武真邑， 秦士貞 ， 張董燕 ， 王四新， 季海峰， 史兆國

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅蘭州 730070；2.北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100097）

乳酸菌是動物腸道菌群的重要組成部分，其作用方式是產(chǎn)生有機(jī)酸降低腸道pH，產(chǎn)生抗菌物質(zhì)及其他代謝產(chǎn)物抑制腸道有害菌生長繁殖（Pierina 等，2021；Pringsulaka 等，2015），最終通過影響腸道生理功能來對機(jī)體健康發(fā)揮有益作用（Hill 等，2014；Jiao 等，2014）。 研究表明，將乳酸菌制劑應(yīng)用在豬生產(chǎn)中， 能夠增加豬消化道中有益菌數(shù)量，改善腸道菌群組成，調(diào)控短鏈脂肪酸代謝及組成，以及提高飼料轉(zhuǎn)化效率和生產(chǎn)性能，在增強(qiáng)機(jī)體免疫性能等方面也具有積極的促進(jìn)作用（Peng 等，2020；Zhang 等，2016；Zhang 和Lee，2014）。 我國自2020 年7 月施行飼料全面禁抗以來， 乳酸菌制劑作為一種新型的飼料添加劑備受關(guān)注，然而，乳酸菌的菌株來源、菌株生長生理特點對其作用效果及產(chǎn)品研發(fā)都會產(chǎn)生影響。因此，分離篩選優(yōu)良的乳酸菌菌株， 進(jìn)行菌株益生特性方面的研究， 使其能夠科學(xué)應(yīng)用于我國實際養(yǎng)豬生產(chǎn)，有著廣闊的應(yīng)用前景。本研究室從豬糞便中分離得到一株乳酸片球菌，對菌株的生長性能、產(chǎn)乳酸、耐酸堿性能進(jìn)行了研究，并對菌株的抑菌能力， 包括菌株抑制大腸桿菌生物膜形成及其抑制率、 抑菌效果以及相應(yīng)的抗生素效價等方面進(jìn)行了分析， 該研究結(jié)果為開發(fā)優(yōu)良的豬源乳酸菌菌株提供了數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 培養(yǎng)基 （1）MRS 液體培養(yǎng)基：酵母浸粉5 g/L、葡萄糖20 g/L、吐溫-80 1 mL/L、硫酸錳0.05 g/L、硫酸鎂0.2 g/L、蛋白胨10 g/L、牛肉浸粉5 g/L、磷酸氫二鉀2 g/L、檸檬酸三胺2 g/L、醋酸鈉5 g/L、pH 7.5。 在MRS 液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加15 g/L瓊脂，即為MRS 瓊脂，121 ℃滅菌15 min。 （2）LB液體培養(yǎng)基：酵母浸粉5 g/L、胰蛋白胨10 g/L、氯化鈉10 g/L，121 ℃高壓滅菌15 min。（3）TSB 肉湯：胰蛋白胨17 g/L、氯化鈉5 g/L、葡萄糖2.5 g/L、大豆蛋白胨3 g/L、pH 7.3，121 ℃高壓滅菌15 min。

1.2 試驗方法

1.2.1 豬源乳酸片球菌的分離與鑒定 新鮮豬糞樣置于TSB 液體培養(yǎng)基中進(jìn)行富集， 分別取0代、1 代、2 代菌培養(yǎng)液利用十倍稀釋法涂板于MRS 瓊脂中，放置于厭氧罐中37 ℃培養(yǎng)24 h，挑選單菌落進(jìn)行純化厭氧培養(yǎng)， 并對純化菌種進(jìn)行液體培養(yǎng)、20%甘油凍存。 采用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（試劑盒由天根生化科技有限公司提供） 提 取DNA，PCR 引 物 采 用27f （5'-AGAGTTTGATCATGGCTCAG -3' ）、1492r （5' -TAGGGTTACCTTGTTACGACTT-3'） 進(jìn)行16S 測序，將測序結(jié)果于NCBI blast 進(jìn)行比對，并送至中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心進(jìn)行生理生化特征和16S rDNA 鑒定。

1.2.2 生長曲線 將菌株18 h 活化后，接種量參考董婷（2014）的研究結(jié)果，按照0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%接種于MRS 液體培養(yǎng)基中， 采用Bioscreen C 生長曲線分析儀（購于上海謂載商貿(mào)發(fā)展有限公司， 產(chǎn)地芬蘭） 測定其0 ～48 h 的OD600nm值， 繪制生長曲線。 根據(jù)生長曲線選取8、10、12、16、20、24 h 等時間點，吸取發(fā)酵液利用十倍稀釋法涂板于MRS 固體培養(yǎng)基進(jìn)行活菌數(shù)測定。

1.2.3 產(chǎn)乳酸性能 在上述時間點測定活菌數(shù)的同時，每個時間點取上清液1 mL，利用乳酸試劑盒（購于南京建成生物工程研究所）測定乳酸含量。

1.2.4 耐酸堿性能 將菌株18 h 活化后，分別接種到pH 為2、3、4、6、6.5、7、8、10 的MRS 液體培養(yǎng)基中，于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0、2、4 h，測定其活菌數(shù)， 利用活菌數(shù)以及存活率分析菌株的耐酸堿性能。

1.2.5 乳酸片球菌對大腸桿菌抑制能力的測定將菌株按照上述研究所得最適培養(yǎng)時間進(jìn)行活化，按照上述研究所得最適添加量添加至MRS 液體培養(yǎng)基中，從0 h 開始，每隔2 h 取1 mL 培養(yǎng)液至24 h。 參照舒中玉（2018）的研究方法，將乳酸片球菌發(fā)酵液用0.22 μm 無菌濾器進(jìn)行過濾，利用牛津杯法測定不同時間培養(yǎng)基上清液對指示菌大腸桿菌C83905（Escherichia coliC83905）（購于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）的抑菌圈直徑，以此來判斷其抑菌能力， 確定乳酸片球菌抑制大腸桿菌的最佳培養(yǎng)時間。

1.2.6 乳酸片球菌抑制大腸桿菌生物膜形成試驗

1.2.6.1 大腸桿菌生物膜形成能力測定 指示菌為標(biāo)準(zhǔn)菌株大腸桿菌C83905， 根據(jù)吳麗娜等（2021）的研究方法并進(jìn)行適當(dāng)修改，將大腸桿菌C83905 菌液調(diào)整至1×106CFU/mL， 備用。 在12孔微孔板中加入900 μL MRS 液體培養(yǎng)基， 再加入100 μL 大腸桿菌C83905 菌液， 于37 ℃分別培養(yǎng)至6、12、18、24、30、36、42、48 h，用移液槍吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液，0.85% NaCl 沖洗3 ～4 次，除去孔內(nèi)未黏附浮游菌。 用處理過的無菌刮刀將附著在12 孔板內(nèi)大腸桿菌C83905 生物膜刮下，在12 孔板內(nèi)加入1 mL 0.85%的NaCl，混勻之后利用十倍稀釋法進(jìn)行稀釋，涂板于LB 固體培養(yǎng)基，進(jìn)行菌落計數(shù)以此評估不同時間大腸桿菌C83905 的生物膜行成能力。

1.2.6.2 乳酸片球菌對大腸桿菌生物膜的抑制試驗 根據(jù)1.2.6.1 結(jié)果中大腸桿菌C83905 生物膜的最佳形成時間，進(jìn)行乳酸片球菌的抑菌試驗。將乳酸片球菌發(fā)酵液用0.22 μm 無菌濾器過濾，根據(jù)吳麗娜等（2021）的研究方法并適當(dāng)修改后將上清液濃度分別利用干凈、無菌MRS 液體培養(yǎng)基稀釋，使其濃度分別為原液，稀釋2、4、8、16、32、64倍，吸取180 μL 加入到96 孔板中，再加入20 μL活菌濃度為1×106CFU/mL 的大腸桿菌C83905菌液，利用Bioscreen C 生長曲線分析儀，在37 ℃條件下測定乳酸片球菌對大腸桿菌C83905 生物膜形成的抑制能力，每組6 個重復(fù)。

同時，取上述乳酸片球菌原液，稀釋2、4、8、16、32、64 倍，各吸取900 μL 加入12 孔板，再加入100 μL 的大腸桿菌 （1×106CFU/mL），37 ℃下培養(yǎng)12 h，用移液槍吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液，0.85% NaCl沖洗3 ～4 次，除去孔內(nèi)未黏附浮游菌，然后用無菌刮刀將附著在12 孔板內(nèi)大腸桿菌生物膜刮下，利用十倍稀釋法涂板于LB 固體培養(yǎng)基， 利用菌落計數(shù)評估乳酸片球菌上清液對大腸桿菌C83905 的抑制率，每組6 個重復(fù)。

1.2.7 乳酸片球菌抑菌能力的抗生素效價分析選用四種抗生素：鹽酸四環(huán)素、氨芐青霉素、硫酸慶大霉素以及鏈霉素硫酸鹽（均由大連美侖生物技術(shù)有限公司提供）。參照王發(fā)明（2010）的方法并做出適當(dāng)修改，測定其不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液（C）對致病菌大腸桿菌的抑菌圈直徑 （mm）， 通過ELISAcalc 作圖軟件以抑菌圈直徑為縱坐標(biāo)、lgC為橫坐標(biāo)， 繪制出抗生素效價曲線（二次回歸曲線）。 根據(jù)上述乳酸片球菌對大腸桿菌C83905 抑制能力的測定結(jié)果，帶入二次回歸曲線公式，利用最大抑菌圈直徑求出相應(yīng)的抗生素濃度。

1.3 數(shù)據(jù)處理 試驗數(shù)據(jù)利用Excel 軟件初步處理，再利用SPSS 23.0 對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析及處理，進(jìn)行ANOVA 單因素方差分析，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，且P＜0.05 代表差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 豬源乳酸片球菌的分離鑒定 本試驗分離得到1 株乳酸片球菌，如圖1 所示，菌株的菌落為乳白色、邊緣整齊、圓形光滑不透明，經(jīng)革蘭氏染色法染色，在油鏡下觀察，如圖2 所示，為革蘭氏陽性菌，呈球狀成群分布。經(jīng)中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心鑒定為乳酸片球菌（Pediococcus Lactis）， 本 實 驗 室 編 號 為 ZLP025。

圖1 菌落形態(tài)

圖2 染色后菌體形態(tài)（1000×）

2.2 生長曲線測定 測定不同接種量條件下乳酸片球菌ZLP025 的生長曲線，由圖3 可知，0 ～2 h 為菌株生長滯緩期，2 ～8 h 為菌株生長對數(shù)期，8 ～24 h 進(jìn)入生長穩(wěn)定期。 測定不同菌株添加量在不同時間的活菌數(shù)發(fā)現(xiàn)，如圖4 所示，乳酸片球菌ZLP025 在添加量為2.5%且培養(yǎng)時間為第16 h 時，活菌數(shù)最高，為2.24×109CFU/mL，另外測定其生長pH 為3.87， 利用SPSS 23.0 對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析可知此時活菌數(shù)最高，pH 最低，但與其他數(shù)據(jù)相比差異不顯著（P＞0.05）。 將該添加量和培養(yǎng)時間確定為后續(xù)試驗活化菌種添加量和時間。

圖3 生長曲線

圖4 不同時間不同添加量活菌數(shù)

2.3 產(chǎn)乳酸性能 由圖5 可知， 各添加量的乳酸含量在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)第8 h 時隨添加量依次遞增，隨著培養(yǎng)時間的增加，在第16 h 時，乳酸含量在菌株添加量為2.5%時達(dá)到最高，為73.75 mmol/L。 隨后隨著時間的增加，乳酸含量有所下降。

圖5 乳酸含量測定

2.4 耐酸堿性能 由圖6 可知，當(dāng)pH 為2 時，培養(yǎng)時間由0 ～2 h，活菌數(shù)有所降低，隨著pH 增加為3、4、6、6.5、7、8、10 時，菌液中的活菌數(shù)均無下降趨勢，說明菌株能夠耐受pH 在3 ～10 的環(huán)境。且當(dāng)pH 為6.5 時，相同時間培養(yǎng)下，活菌數(shù)最高，說明pH 為6.5 是菌株培養(yǎng)的最適pH，當(dāng)pH 增加時，活菌數(shù)相對于pH 為6.5 時有所降低，當(dāng)pH增加到10，其在0、2、4 h 時的活菌數(shù)下降，分別為3.95×107、4.28×107CFU/mL 和7.95×107CFU/mL。

圖6 耐酸堿性能

2.5 乳酸片球菌對大腸桿菌抑制能力的測定由表1 可知，從0 h 開始，其上清液原液對大腸桿菌C83905 的抑菌圈直徑為（8.0±0.34）mm，隨著培養(yǎng)時間的增加，其抑菌圈直徑相應(yīng)增加，直至第14 h 時， 上清液原液對大腸桿菌C83905 的抑菌圈直徑增加至（21.0±0.23）mm，至第16 h 時，抑菌圈直徑增加為（28.0±0.45）mm，達(dá)到了最大值。 隨后隨著培養(yǎng)時間的增加，抑菌圈直徑有所減小，第18 h 時，抑菌圈直徑減小為（28.0±0.45）mm，至第24 h 時，抑菌圈直徑減小為（18.5±0.29）mm。 通過SPSS 23.0 分析可得，16 h 時抑菌圈直徑與其他時間相比差異均顯著（P＜0.05）。

表1 不同時間上清液原液對大腸桿菌C83905 的抑菌圈直徑mm

2.6 乳酸片球菌抑制大腸桿菌生物膜形成試驗

2.6.1 大腸桿菌生物膜形成能力測定 由圖7 可知， 當(dāng)培養(yǎng)至12 h 時生物膜中大腸桿菌C83905活菌數(shù)最高，其活菌數(shù)為3.55×108CFU/mL。 隨后隨著時間增加至48 h，活菌數(shù)逐漸降低，因此，選用12 h 為大腸桿菌C83905 最佳成膜時間， 并進(jìn)行后續(xù)試驗。

圖7 大腸桿菌生物膜中活菌數(shù)的測定

2.6.2 乳酸片球菌對大腸桿菌生物膜抑制率試驗由圖8 可知，上清液原液、稀釋2 倍、稀釋4 倍這三個濃度對大腸桿菌的抑制作用較強(qiáng)，隨著時間的增加，OD600nm值無變化，從上清液稀釋8 倍開始，各個濃度下OD600nm值均隨著時間的增加有所增加，這表明上清液的最小抑菌稀釋倍數(shù)為4 倍。

圖8 對大腸桿菌生物膜抑制曲線

由圖9、10 可知，當(dāng)上清液稀釋8 倍時，大腸桿菌仍有較高活菌數(shù)， 此時抑制率較低，為1.14%，隨著抑菌濃度的增加，活菌數(shù)出現(xiàn)下降的趨勢。 當(dāng)上清液稀釋4 倍時， 大腸桿菌活菌數(shù)為7.94×105CFU/mL，抑菌率為19.54%，當(dāng)不對上清液進(jìn)行稀釋時，活菌數(shù)為0，抑菌率為100%，表明此時大腸桿菌全部被抑制，無法生長。

圖9 大腸桿菌生物膜形成的抑制

圖10 對大腸桿菌抑制率

表2上清液相對于抗生素效價

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2.7 豬源乳酸片球菌相應(yīng)的抗生素效價分析四種抗生素對大腸桿菌效價曲線如圖11、12、13、14 所示， 上清液相對于抗生素效價如表2 所示。隨著培養(yǎng)時間的增加， 上清液原液對大腸桿菌的抑制能力也相應(yīng)增加，培養(yǎng)至16 h 時，抑菌圈直徑達(dá)到最大值28 mm，隨后隨著時間的增加，抑菌圈直徑逐步減小。 將上清液抑菌最大抑菌圈帶入相應(yīng)的抗生素效價計算公式中可知， 豬源乳酸片球菌ZLP025 培養(yǎng)16 h， 其上清液抑菌效果相應(yīng)的抗生素效價分別為：鹽酸四環(huán)素1.01 mg/mL、氨芐青霉素1.08 mg/mL、 硫酸慶大霉素97.54 mg/mL及鏈霉素硫酸鹽1.26 mg/mL。

圖11 鹽酸四環(huán)素對大腸桿菌效價曲線

圖12 氨芐青霉素對大腸桿菌效價曲線

3 討論

乳酸片球菌（Pediococcus lactis）屬于片球菌屬，兼性厭氧。目前在人糞便、酸白菜、酸馬奶及發(fā)酵香腸中都已分離得到。有研究表明，乳酸片球菌能夠產(chǎn)生有機(jī)酸、環(huán)二肽、細(xì)菌素等，可在食品中作為生物防腐劑使用（Kaur 等，2014）。 本文從豬糞便中分離得到一株乳酸片球菌， 該菌在2 h 的滯緩期之后，便進(jìn)入對數(shù)生長期，菌株生長迅速，說明該菌株具有在腸道中快速繁殖的能力， 這與舒中玉（2018）研究結(jié)果一致，說明菌株有可能迅速繁殖成為腸道內(nèi)優(yōu)勢菌群。 8 h 末，菌株進(jìn)入穩(wěn)定期，其OD600nm值穩(wěn)定下來。 張博文等（2021）報道的豬源乳酸片球菌L9 其2 ～8 h 也是對數(shù)生長期，8 h 后進(jìn)入生長穩(wěn)定期，本試驗結(jié)果與其一致，但本試驗中乳酸片球菌ZLP025 生長最佳pH為3.87，低于張博文等（2021）報道的L9 菌株（pH最低為4.42），這說明本試驗分離的豬源乳酸片球菌產(chǎn)酸性能更佳。另外，黃滄海等（2004）研究仔豬源羅伊氏乳桿菌發(fā)現(xiàn)， 通過在培養(yǎng)過程中適時補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì)后， 菌株的的對數(shù)生長期能從第2 h延長至22 h 結(jié)束，其對數(shù)生長期維持了20 h。 因此，可以依據(jù)這些結(jié)果，適時對豬源乳酸片球菌進(jìn)行營養(yǎng)物質(zhì)補(bǔ)充，以延長對數(shù)生長期，提高菌體密度，為科研和生產(chǎn)提供較高濃度的活性菌體。

圖13 硫酸慶大霉素對大腸桿菌效價曲線

圖14 鏈霉素硫酸鹽對大腸桿菌效價曲線

微生物制劑需要有一定的耐酸能力才能夠通過胃內(nèi)環(huán)境，到達(dá)腸道，發(fā)揮益生作用，豬胃液pH在2.0 ～4.5，一般保持在3.0，食物通過胃需要2～3 h。王津等（2014）研究表明，3 株母豬源乳酸片球菌在pH 為2.5 處理3 h 后存活率分別為34.90%、32.93%、28.76%。 本次試驗結(jié)果表明，在pH 為2 的酸性環(huán)境中， 菌株在2 h 的存活率為71.78%，在pH 為3 的酸性環(huán)境中，菌株在2、4 h的存活率分別為99.89%和99.72%，在pH 為4 的酸性環(huán)境中， 菌株2、4 h 的存活率分別為100.93%和104.74%，說明本試驗分離得到的豬源乳酸片球菌耐酸性能更強(qiáng)， 能夠耐受動物的胃部酸性環(huán)境。另外，乳酸菌能夠在其生長過程中產(chǎn)生乳酸（Wang 等，2020），應(yīng)用于動物生產(chǎn)中能夠有效降低腸道pH 和氧化還原電勢， 抑制有害微生物的生長（Nagpal 等，2012）。 本試驗測定了豬源乳酸片球菌ZLP025 產(chǎn)乳酸情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該菌株在添加量為2.5%培養(yǎng)時間為16 h 時， 乳酸含量最高，為73.75 mmol/L，這要高于李潔等（2014）報道的8 株乳酸片球菌發(fā)酵液乳酸產(chǎn)量， 李潔等（2014）還指出，改變碳源會影響菌株的乳酸產(chǎn)量，由此可見， 本試驗菌株ZLP025 在產(chǎn)乳酸性能方面仍有優(yōu)良的開發(fā)潛力。

研究表明， 抗生素能夠有效抑制致病菌（Teh和Lee 和Dykes，2019；Kaplan 等，2011）， 四環(huán)素類藥物能夠抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成起到殺菌作用， 屬于高效殺菌劑 （韓景華，2020；Kang 等，2018）， 氨芐青霉素可利用結(jié)合蛋白與酶相互作用，影響細(xì)胞壁的合成，導(dǎo)致細(xì)菌死亡（Maciej 等，2019），硫酸慶大霉素和鏈霉素能夠與細(xì)菌核糖體的30 s 亞單位結(jié)合，抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，以此來抑制細(xì)菌生長。 但抗生素的諸多弊端直接影響到畜禽健康、 產(chǎn)品安全及人類健康 （Sazykin 等，2021），在我國當(dāng)前飼料全面禁抗的背景下，具有抑菌作用的益生菌有望成為抗生素替代品（Nuria等，2019）。 大腸桿菌是一種常見的致病菌（Sommers 等，2018），在養(yǎng)豬生產(chǎn)中是造成豬腹瀉的主要原因（Jean-félix 等，2017），陳亞男等（2020）、舒中玉（2018）、王娟（2016）等利用牛津杯法研究乳酸片球菌對大腸桿菌的抑制作用發(fā)現(xiàn)，乳酸片球菌抑菌圈直徑分別達(dá)到了20.0、15.0 mm 和15.56 mm。本試驗利用牛津杯法研究發(fā)現(xiàn)， 乳酸片球菌ZLP025 對大腸桿菌C83905 的抑菌圈直徑最高可達(dá)28.0 mm，數(shù)值大于辛在海和王國雷（2011）研究的乳酸片球菌PA003 對大腸桿菌的抑菌圈（13.97 mm），以及陳亞男等（2020）（15.0 mm）、舒中玉（2018）（15.56 mm）、王娟等（2016）（20.0 mm）研究乳酸片球菌對大腸桿菌抑菌圈直徑， 說明本菌株抑菌性能較為優(yōu)越。

細(xì)菌生物膜具有較高耐藥性、 極強(qiáng)黏附性及抗吞噬性， 生物膜的形成能夠發(fā)生多種細(xì)菌感染性疾病， 是細(xì)菌感染主要根源之一 （張珊珊等，2021）。 研究表明，大腸桿菌等致病菌通過形成復(fù)雜的生物膜而定植于腸道內(nèi)（吳麗娜等，2019）。本試驗對乳酸片球菌抑制大腸桿菌生物膜進(jìn)行了試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乳酸片球菌上清液稀釋4 倍，能夠抑制大腸桿菌生物膜形成， 且對大腸桿菌活菌抑制率為19.54%，上清液原液培養(yǎng)時，對大腸桿菌抑菌率能達(dá)到100%。 抗生素效價的測定標(biāo)準(zhǔn)以其抑菌能力或殺菌能力來衡量（辛在海和王國雷，2011），王發(fā)明（2010）利用大腸桿菌作為指示菌研究了植物乳桿菌上清液對多黏菌素B 的效價試驗。 本試驗利用大腸桿菌C83905 作為指示菌，研究了乳酸片球菌上清液相對于多種抗生素效價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乳酸片球菌ZLP025 上清液相對于鹽酸四環(huán)素、氨芐青霉素、硫酸慶大霉素、鏈霉素硫酸鹽等四種抗生素的效價分別為1.01、1.08、97.54、1.26 mg/mL。 本試驗選用鹽酸四環(huán)素、氨芐青霉素、硫酸慶大霉素、 鏈霉素硫酸鹽等作為參考抗生素，測定乳酸片球菌相對抑菌效價的方法，為乳酸片球菌的抑菌活性測定以及比較提供了定量方法。

4 結(jié)論

本試驗分離得到的豬源乳酸片球菌ZLP025，在培養(yǎng)16 h 時生長性能最佳， 其活菌數(shù)為2.24×109CFU/mL，pH 為3.87， 產(chǎn)乳酸含量為73.75mmol/L，對豬源大腸桿菌抑菌直徑達(dá)28 mm。 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，乳酸片球菌ZLP025 發(fā)酵上清液能有效抑制豬源大腸桿菌生物膜形成， 其抑菌效價分別可達(dá)到對鹽酸四環(huán)素1.01 mg/mL、氨芐青霉素1.08 mg/mL、硫酸慶大霉素97.54 mg/mL 及鏈霉素硫酸鹽1.26 mg/mL。 這些結(jié)果表明， 豬源乳酸片球菌ZLP025 能夠作為優(yōu)良乳酸菌發(fā)揮益生作用，并具有良好的應(yīng)用開發(fā)潛力。