賈放放，齊博文，張蓓蓓，王雯靜，王 陽，石璠鈺，劉 曉，朱枝祥，王 娟*，史社坡*

蛇足石杉內生真菌MT-40的代謝產(chǎn)物研究

賈放放1, 2，齊博文1，張蓓蓓1，王雯靜1，王 陽1，石璠鈺1，劉 曉1，朱枝祥1，王 娟1*，史社坡1*

1. 北京中醫(yī)藥大學中藥學院 中藥現(xiàn)代研究中心，北京 100029 2. 高平市中醫(yī)醫(yī)院，山西 高平 048400

研究蛇足石杉內生真菌MT-40的代謝產(chǎn)物。利用硅膠、Sephadex LH-20及半制備液相色譜等方法進行分離純化，根據(jù)化合物的理化性質及IR、MS、NMR等數(shù)據(jù)鑒定化合物的結構；利用體外模型進行抑制血小板ATP釋放及抗乙酰膽堿酯酶活性篩選。從MT-40固體發(fā)酵培養(yǎng)后的代謝產(chǎn)物中分離得到了20個化合物，分別鑒定為(±)--(3a,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,13a-dodecahydrocyclododeca []oxazol- 2-yl)-4-hydroxybenzamide（1）、cyclo-(Trp-Tyr)（2）、cyclo-(Trp-Phe)（3）、meleagrin（4）、alternariol（5）、alternariol methyl ether（6）、altenuene（7）、koninginin B（8）、koninginin F（9）、koninginin D（10）、過氧化麥角甾醇（11）、β谷甾醇（12）、volemolide（13）、4-hydroxy-17-methylincisterol（14）、4-hydroxy-3,6-dimethyl-2-pyran-2-one（15）、對羥基苯甲酸（16）、對羥基苯甲醛（17）、香草酸（18）、對羥基苯乙酸（19）、酪醇（20）。化合物1為新化合物，命名為(±)-盤尼西堿A；化合物5在100 μmol/L時有一定的抑制血小板釋放ATP作用，抑制率為（40.6±5.2）%；所有化合物在100 μmol/L時未表現(xiàn)出乙酰膽堿酯酶抑制活性。

蛇足石杉；內生真菌；產(chǎn)黃青霉菌；生物堿；聚酮；(±)-盤尼西堿A；alternariol

植物內生真菌（endophyte）是指一類部分或全部生活史存在于健康植物組織內部，而不使宿主植物表現(xiàn)出明顯感染癥狀的微生物[1]。由于寄主植物的不同及其生存環(huán)境的差異，植物內生菌的種類多樣、數(shù)目龐大，且在長期進化過程中形成了豐富的代謝系統(tǒng)，使其次生代謝產(chǎn)物結構新穎、類群豐富、生物活性顯著。目前從植物內生菌中分離鑒定的化合物包括生物堿、萜類、蒽醌、𠮿酮、甾醇、多肽等多種成分，并發(fā)現(xiàn)了一系列具有活性的天然產(chǎn)物，如具有動物神經(jīng)毒性的麥角生物堿和吲哚生物堿，具有植物抗毒素樣作用的細胞松弛素，以及其他活性物質，包括抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗病毒等天然化合物。這些代謝產(chǎn)物結構豐富多樣，是活性天然產(chǎn)物的重要來源之一[2-6]。因此，內生真菌代謝產(chǎn)物的系統(tǒng)研究對于發(fā)現(xiàn)更多結構新穎的活性天然產(chǎn)物具有重要意義。

蛇足石杉(Thunb. ex Murray) Trev.為石杉科石杉屬多年生草本蕨類植物，全草具有散瘀消腫、清熱解毒的功效。蛇足石杉各個組織中含有豐富的內生真菌，文獻報道從部分蛇足石杉來源的內生真菌中分離得到了生物堿、倍半萜、多肽等多種化合物[7-12]，但是相對于蛇足石杉中所含有的豐富的內生菌來說，目前這些內生菌代謝產(chǎn)物的研究明顯不足。因此，進一步挖掘蛇足石杉內生真菌次生代謝產(chǎn)物，有望發(fā)現(xiàn)結構新穎的活性天然產(chǎn)物。在前期研究中，本課題組對蛇足石杉中的內生真菌進行了分離鑒定，并對部分真菌代謝產(chǎn)物進行了系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)了一系列結構新穎的化合物[13-16]。本實驗主要對蛇足石杉內生真菌MT-40進行了系統(tǒng)的化學成分研究，固體發(fā)酵培養(yǎng)后分離鑒定了20個化合物，分別為(±)--(3a,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,13a-dodecahydrocyclododeca[]oxazol-2-yl)-4-hydroxybenzamide（1）、cyclo-(Trp-Tyr)（2）、cyclo-(Trp-Phe)（3）、meleagrin（4）、alternariol（5）、alternariol methyl ether（6）、altenuene（7）、koninginin B（8）、koninginin F（9）、koninginin D（10）、過氧化麥角甾醇（ergosterol peroxide，11）、β-谷甾醇（βsitosterol，12）、volemolide（13）、4-hydroxy-17-methylincisterol（14）、4- hydroxy-3,6-dimethyl-2-pyran-2-one（15）、對羥基苯甲酸（-hydroxybenzoic acid，16）、對羥基苯甲醛（4-hydroxybenzaldehyde，17）、香草酸（4- hydroxy-3-methoxybenzoic acid，18）、對羥基苯乙酸（4-hydroxyphenylacetic acid，19）、酪醇（tyrosol，20）。其中化合物1為新化合物，命名為(±)-盤尼西堿A。并對分離鑒定的化合物進行了抑制血小板釋放ATP活性和乙酰膽堿酯酶抑制活性的研究。

1 儀器與材料

Autopol IV全自動旋光儀（美國Rudolf公司）；UV-2401PC紫外分光光度計（日本Shimadzu公司）；470 FT-IR紅外光譜儀（美國Thermo公司）；XT4顯微熔點測定儀（北京科儀電光儀器廠）；高效液相離子阱飛行時間質譜分析系統(tǒng)：UFLC SIL-20AC自動進樣器，CTO-20AC柱溫箱，SPD M20A紫外檢測器，LC-20ADXR泵，IT-TOF-MS配備ESI離子源（日本Shimadzu公司）；Varian 500核磁共振儀（美國Varian公司）；Waters 2998半制備型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；ODS半制備柱（SunFireTMC18，150 mm×10 mm，5 μm）；Sephadex LH-20填料（瑞典Amerasham Biosciences公司）；ODS柱色譜填料（Li-Chroprep RP-C18，40～63 μm，德國Merck公司）；D101大孔樹脂、柱色譜用硅膠（200～300目）及薄層色譜用GF254硅膠預制板均為青島海洋化工廠生產(chǎn)。M1000型多功能酶標儀（美國TECAN公司）；碘代硫代乙酰膽堿、5,5-二硫代二硝基苯甲酸、二甲基亞砜、十二烷基硫酸鈉、熒光素酶原液、ATP、凝血酶均由Sigma公司提供；D-熒光素鈉鹽購于北京百靈威科技有限公司；HBSS緩沖液（Hank’s Balanced Salt Solution，HBSS）購于美國賽默飛世爾科技公司；石杉堿甲（批號80/100629）購于上海詩丹德標準技術服務有限公司；電鰻乙酰膽堿酯酶由上海源葉生物公司提供。

蛇足石杉(Thunb ex Murray) Trev.采自福建省南平市（標本編號201507）。本研究所用菌株由課題組自蛇足石杉中分離，根據(jù)其形態(tài)特征及ITS rDNA序列鑒定為產(chǎn)黃青霉菌，菌種保存于北京中醫(yī)藥大學現(xiàn)代研究中心（菌種編號MT-40）。

2 內生菌的發(fā)酵培養(yǎng)及代謝產(chǎn)物的提取分離

MT-40于無菌環(huán)境下接種至0.5 L×40瓶糙米培養(yǎng)基中，室溫培養(yǎng)40 d后，用醋酸乙酯超聲提取6次。提取液合并濾過，減壓濃縮得浸膏提取物130 g。經(jīng)正相硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（10∶1→0∶1）、二氯甲烷-甲醇（20∶1→0∶1）梯度洗脫，合并得到10個流分（Fr. A～J）。Fr. D經(jīng)過正相硅膠柱色譜分離，收集合并相同部分，得到7個流分（Fr. D1～D7），其中Fr. D3經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜分離并結合半制備液相色譜分離純化得到化合物19（2.5 mg；流動相為甲醇-水90∶10）和16（2.5 mg；流動相為甲醇-水90∶10）；Fr. D4經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜并結合半制備液相色譜分離純化得到化合物5（2.8 mg；流動相：甲醇-甲酸水80∶20）；Fr. D5經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜分離并結合半制備液相色譜分離純化得到化合物6（2.5 mg；流動相為甲醇-甲酸水70∶30）；Fr. D6經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜分離并結合半制備液相色譜分離純化得到化合物13（2.0 mg；流動相為乙腈-甲酸水45∶55）和14（1.9 mg；流動相為乙腈-甲酸水45∶55）；Fr. D7用正相硅膠柱色譜反復進行梯度洗脫，得到化合物11（5.0 mg）和12（3.5 mg）。Fr. E經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，收集合并相同部分，得到5個流分（Fr. E1～E5），其中Fr. E3經(jīng)反相ODS液相色譜并結合半制備液相色譜分離純化得到化合物1（2.5 mg；流動相為甲醇-水65∶35）和8（2.3 mg；流動相為甲醇-水50∶50）；Fr. E4經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜分離并結合半制備液相色譜分離純化得到化合物15（2.9 mg；流動相為甲醇-甲酸水45∶55）、17（2.5 mg；流動相為甲醇-甲酸水45∶55）、18（2.4 mg；流動相為甲醇-甲酸水25∶75）和20（2.4 mg；流動相為甲醇-甲酸水25∶75）。Fr. F經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，收集合并相同部分，得到5個流分（Fr. F1～F5），其中Fr. F3經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜分離并結合半制備液相色譜分離純化得到化合物7（2.8 mg；流動相為甲醇-水50∶50）；Fr. F4經(jīng)反復重結晶得到化合物4（20.0 mg）；Fr. F5經(jīng)反相ODS液相色譜并結合半制備液相色譜分離純化得到化合物2（1.9 mg；流動相為乙腈-甲酸水45∶55）、3（1.5 mg；流動相為乙腈-甲酸水45∶55）、9（2.8 mg；流動相為甲醇-水30∶70）和10（2.5 mg；流動相為甲醇-水30∶70）。

3 結構鑒定

表1 化合物1的1H- 和13C-NMR數(shù)據(jù)(500/125 MHz, CDCl3)

Table 1 1H- and 13C-NMR data of compound 1 (500/125 MHz, CDCl3)

碳位δHδC 2 155.1 43.46 (m)50.0 51.95 (m), 1.81 (m)31.1 61.78 (m), 1.23 (m)26.4 71.51 (m)25.6 81.23 (m)25.5 91.09 (m), 0.86 (m)24.7 101.09 (m), 0.86 (m)24.7 111.23 (m)25.5 121.51 (m)25.6 131.78 (m), 1.23 (m)26.4 141.95 (m), 1.81 (m)32.5 154.16 (m)57.4 1′ 171.3 2′ 128.7 3′,7′7.45 (d, J = 8.5 Hz)129.5 4′,6′6.77 (d, J = 8.5 Hz)115.6 5′ 159.1

圖1 化合物1結構與關鍵HMBC ()、1H-1H COSY () 相關

化合物4：黃色粉末，mp 250～252 ℃，HR-ESI-MS/: 434.180 7 [M＋H]+（計算值為434.182 3），分子式為C23H23N5O4。1H-NMR (500 MHz, DMSO-6): 3.66 (3H, s, 1-OCH3), 7.54 (1H, d,= 8.0 Hz, H-4), 7.04 (1H, t,= 7.5 Hz, H-5), 7.26 (1H, t,= 7.5 Hz, H-6), 6.98 (1H, d,= 8.0 Hz, H-7), 5.25 (1H, s, H-8), 9.26 (1H, s, 9-OH), 10.13 (1H, s, 14-NH), 8.19 (1H, s, H-15), 7.77 (1H, s, H-18), 12.91 (1H, s, 19-NH), 7.36 (1H, s, H-20), 6.00 (1H, s, H-22), 4.98 (2H, m, H-23), 1.20 (6H, s, H-24, H-25)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-6): 64.8 (1-OCH3), 101.3 (C-2), 52.2 (C-3), 125.6 (C-3a), 124.7 (C-4), 123.2 (C-5), 127.9 (C-6), 111.5 (C-7), 146.3 (C-7a), 109.1 (C-8), 142.9 (C-9), 158.5 (C-10), 123.7 (C-12), 164.9 (C-13), 106.8 (C-15), 126.0 (C-16), 137.7 (C-18), 134.2 (C-20), 41.8 (C-21), 143.4 (C-22), 112.9 (C-23), 24.3 (C-24), 23.2 (C-25)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[21]，故鑒定化合物4為meleagrin。

化合物5：黃色粉末，mp 319～321 ℃，HR-ESI-MS/: 257.044 4 [M－H]?（計算值為 257.045 5），分子式為C14H10O5。1H-NMR (500 MHz, DMSO-6): 6.67 (1H, brs, H-5′), 6.31 (1H, brs, H-4), 6.59 (1H, brs, H-3′), 7.20 (1H, brs, H-6), 2.65 (3H, brs, H-7′)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-6): 138.3 (C-1), 97.4 (C-2), 164.7 (C-3), 100.9 (C-4), 164.1 (C-5), 104.3 (C-6), 165.5 (C-7), 109.0 (C-1′), 138.1 (C-2′), 101.6 (C-3′), 158.4 (C-4′), 117.5 (C-5′), 152.6 (C-6′), 25.3 (C-7′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[22]，故鑒定化合物5為alternariol。

化合物6：黃色粉末，mp 275～277 ℃，HR-ESI-MS/: 271.062 2 [M－H]?（計算值為271.061 2），分子式為C15H12O5。1H-NMR (500 MHz, DMSO-6): 6.73 (1H, brs, H-5′), 6.66 (1H, brs, H-3′), 6.61 (1H, brs, H-4), 7.21 (1H, brs, H-6), 2.73 (3H, s, H-7′), 3.90 (3H, s, 5-OCH3)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-6): 138.4 (C-1), 98.5 (C-2), 164.0 (C-3), 99.2 (C-4), 164.7 (C-5), 103.4 (C-6), 166.2 (C-7), 109.5 (C-1′), 137.8 (C-2′), 101.6 (C-3′), 158.7 (C-4′), 117.6 (C-5′), 152.6 (C-6′), 25.0 (C-7′), 55.8 (5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[23]，故鑒定化合物6為alternariol methyl ether。

化合物11：白色針狀結晶（甲醇），mp 171～173 ℃，EI-MS/: 428 [M]+，分子式為C28H44O3。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 3.93 (1H, m, H-3), 6.21 (1H, d,= 8.5 Hz, H-6), 6.45 (1H, d,= 8.5 Hz, H-7), 0.85 (3H, s, H-18), 1.20 (3H, s, H-19), 0.96 (3H, d,= 6.5 Hz, H-21), 5.11 (1H, dd,= 8.5, 15.5 Hz, H-22), 5.19 (1H, dd,= 8.5, 15.5 Hz, H-23), 0.79 (3H, d,= 5.0 Hz, H-26), 0.77 (3H, d,= 5.0 Hz, H-27), 0.87 (3H, d,= 7.0 Hz, H-28)；13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 34.9 (C-1), 30.3 (C-2), 66.7 (C-3), 37.1 (C-4), 82.4 (C-5), 135.6 (C-6), 130.9 (C-7), 79.6 (C-8), 51.2 (C-9), 37.0 (C-10), 23.6 (C-11), 39.5 (C-12), 44.7 (C-13), 51.9 (C-14), 20.2 (C-15), 28.9 (C-16), 56.4 (C-17), 13.1 (C-18), 18.4 (C-19), 39.5 (C-20), 20.8 (C-21), 135.4 (C-22), 132.5 (C-23), 43.0 (C-24), 33.3 (C-25), 19.9 (C-26), 18.4 (C-27), 17.8 (C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的一致[26]，故鑒定化合物11為過氧化麥角甾醇。

化合物12：白色結晶（甲醇），mp 137～139 ℃，EI-MS/: 414 [M]+，分子式為C29H50O。1H-NMR (500 MHz, DMSO-6): 3.50 (1H, m, H-3), 5.32 (1H, d,=.0 Hz, H-6), 0.65 (3H, s, H-18), 0.98 (3H, s, H-19), 0.90 (3H, d,= 6.5 Hz, H-21), 0.83 (3H, d,= 4.5 Hz, H-26), 0.78 (3H, s, H-27), 0.85 (3H, d,= 2.0 Hz, H-29)；13C-NMR (125 MHz, DMSO-6): 37.5 (C-1), 31.9 (C-2), 72.0 (C-3), 42.5 (C-4), 141.0 (C-5), 121.9 (C-6), 32.1 (C-7), 32.1 (C-8), 50.3 (C-9), 36.7 (C-10), 21.3 (C-11), 40.0 (C-12), 42.5 (C-13), 57.0 (C-14), 24.5 (C-15), 28.5 (C-16), 56.2 (C-17), 12.2 (C-18), 19.6 (C-19), 36.4 (C-20), 19.0 (C-21), 34.1 (C-22), 26.2 (C-23), 46.0 (C-24), 29.3 (C-25), 19.2 (C-26), 20.1 (C-27), 23.3 (C-28), 12.1 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的一致[27]，故鑒定化合物12為β-谷甾醇。

化合物15：白色粉末，mp 184～186 ℃，HR-ESI-MS/: 139.042 0 [M－H]?（計算值為139.040 1），分子式為C7H8O3。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 5.93 (1H, s, H-5), 1.82 (3H, s, H-7), 2.16 (3H, H-8)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 169.7 (C-2), 98.3 (C-3), 161.1 (C-4), 103.2 (C-5), 160.5 (C-6), 8.5 (C-7), 19.6(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的一致[30]，故鑒定化合物15為4-hydroxy-3,6- dimethyl-2-pyran-2-one。

化合物16：淺黃色粉末，mp 214～216 ℃，HR-ESI-MS/: 137.024 9 [M－H]?（計算值為137.024 4），分子式為C7H6O3。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 7.83 (2H, d,= 8.0 Hz, H-2, 6), 6.77 (2H, d,= 8.0 Hz, H-3, 5)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 122.9 (C-1), 133.1 (C-2, 6), 116.2 (C-3, 5), 163.5 (C-4), 172.8 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[31]，故鑒定化合物16為對羥基苯甲酸。

化合物17：白色粉末，mp 106～108 ℃，HR-ESI-MS/: 121.028 2 [M－H]?（計算值為121.029 5），分子式為C7H6O2。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 7.75 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2, 6), 6.89 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3, 5), 9.74 (1H, s, H-7)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 128.6 (C-1), 132.0 (C-2, 6), 115.5 (C-3, 5), 163.7 (C-4), 191.4 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的一致[32]，故鑒定化合物17為對羥基苯甲醛。

化合物18：白色粉末，mp 200～202 ℃，HR-ESI-MS/: 167.035 8 [M－H]?（計算值為 167.035 0），分子式為C8H8O4。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 7.53 (1H, s, H-2), 6.80 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 7.51 (1H, d,= 8.0 Hz, H-6), 3.87 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 123.2 (C-1), 115.8 (C-2), 148.7 (C-3), 152.4 (C-4), 113.8 (C-5), 125.1 (C-6), 169.4 (C-7), 56.5 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的一致[33]，故鑒定化合物18為香草酸。

化合物19：無色針狀結晶（甲醇），mp 148～150 ℃，HR-ESI-MS/: 151.041 4 [M－H]?（計算值為 151.040 1），分子式為C8H8O3。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 7.83 (2H, d,= 8.0 Hz, H-2, 6), 6.77 (2H, d,= 8.0 Hz, H-3, 5), 3.31 (2H, s, H-7)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 126.9 (C-1), 131.5 (C-2, 6), 116.3 (C-3, 5), 157.4 (C-4), 41.2 (C-7), 176.4 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的一致[34]，故鑒定化合物19為對羥基苯乙酸。

化合物20：白色片狀晶體（甲醇），mp 89～91 ℃，EI-MS/: 138 [M]+，分子式為C8H10O2。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 3.68 (2H, t,= 7.5 Hz, H-1), 2.71 (2H, t,= 7.5 Hz, H-2), 7.02 (2H, d,= 8.0 Hz, H-2′, 6′), 6.69 (2H, d,= 8.0 Hz, H-3′, 5′)；13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 63.2 (C-1), 38.0 (C-2), 129.4 (C-1′), 129.6 (C-2′, 6′), 114.7 (C-3′, 5′), 155.3 (C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的一致[35]，故鑒定化合物20為酪醇。

4 活性篩選

參考文獻報道方法[36]測定乙酰膽堿酯酶抑制活性，抗血小板釋放ATP作用方法[16]如下：設對照組、模型組和給藥組，每組設3個復孔。各組分別加入100 μL血小板懸液，放入CO2培養(yǎng)箱孵育5 min。給藥組加入25 μL不同濃度（0、4、20、100 μmol/L）的化合物，對照組和模型組加入等體積的HBSS緩沖液。隨后在給藥組和模型組加入25 μL凝血酶至終濃度0.05 U/mL，對照組加入等體積的HBSS緩沖液。在各孔加入50 μL熒光素酶底物，室溫反應5 min，多功能酶標儀測定生物發(fā)光值（RLU），按照公式計算各化合物對血小板釋放ATP的抑制率和半數(shù)抑制濃度（median inhibitory concentration，IC50）值。

抑制率＝(RLU模型組均值－RLU給藥組均值)/(RLU模型組均值－RLU對照組均值)

結果表明化合物5在100 μmol/L時有一定的抗血小板釋放ATP作用，其抑制率為（40.6±5.2）%。陽性藥LY294002抑制率為（102.7±3.1）%；化合物1抑制率為（32.9±9.6）%，其他化合物抑制率均小于20%；所有化合物在100 μmol/L時對乙酰膽堿酯酶不顯示抑制活性，所有化合物的抑制率均小于10%，陽性藥石杉堿甲IC50為（0.54±0.02）μmol/L。

5 討論

本研究對蛇足石杉內生真菌MT-40的化學成分進行了系統(tǒng)分離，得到20個化合物，包括生物堿類化合物、聚酮類化合物、甾體類化合物和小分子芳香類化合物，其中化合物1為新化合物。新化合物1的結構中含有獨特的二氫噁唑并十二元大環(huán)結構，這類結構在文獻報道的天然產(chǎn)物中非常少見，根據(jù)其結構推測可能是在聚酮合酶（polyketide synthase，PKS）、非核糖體肽合成酶（nonribosomal peptide synthetase，NRPS）、?；D移酶的共同作用下生成，但其確切的合成機制尚在研究中。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Metabolites fromMT-40, an endophytic fungus isolated from

JIA Fang-fang1, 2, QI Bo-wen1, ZHANG Bei-bei1, WANG Wen-jing1, WANG Yang1, SHI Fan-yu1, LIU Xiao1, ZHU Zhi-xiang1, WANG Juan1, SHI She-po1

1. Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China 2. Gaoping Chinese Medicine Hospital, Gaoping 048400, China

To investigate the chemical metabolites fromMT-40, an endophytic fungus isolated from.The compounds were isolated and purified by using various column chromatographies including silica gel, Sephadex LH-20, and-preparative HPLC. The structures were established using extensive spectroscopic techniques such as IR, MS, and NMR. The inhibitory activities against ATP release of platelets and acetylcholinesterase of all the isolates were also investigated by usingmodels.Twenty compounds including (±)--(3a,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,13a- dodecahydrocyclododeca []oxazol-2-yl)-4-hydroxybenzamide (1), cyclo-(Trp-Tyr) (2), cyclo-(Trp-Phe) (3), meleagrin (4), alternariol (5), alternariol methyl ether (6), altenuene (7), koninginin B (8), koninginin F (9), koninginin D (10), ergosterol peroxide (11), βsitosterol (12), volemolide (13), 4-hydroxy-17-methylincisterol (14), 4-hydroxy-3,6-dimethyl-2-pyran-2-one (15),-hydroxybenzoic acid (16), 4-hydroxybenzaldehyde (17), 4-hydroxy-3- methoxybenzoic acid (18), 4-hydroxyphenylacetic acid (19), and tyrosol (20) were isolated from the solid fermentation cultures ofMT-40.Compound 1 is a new compound; Compound 5 exhibited slight inhibitory activities on ATP release of thrombin-activated platelets with inhibition rate of (40.6 ±5.2)% at the concentration of 100 μmol/L. All the compounds didn′t exhibit inhibitory activities on AChE at the concentration of 100 μmol/L.

(Thunb. ex Murray) Trev.; endophytic fungi;; alkaloids; polyketides; (±)-penicialkaloid A; alternariol

R284.1

A

0253 - 2670(2022)13 - 3904 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.13.003

2021-12-23

國家自然科學基金項目（81773842）；國家自然科學基金項目（81903495）；北京中醫(yī)藥大學新教師啟動基金項目（2021-JYB-XJSJJ-005）

賈放放，女，主要從事中藥化學成分研究。E-mail: jiaff017@163.com

史社坡，研究員，主要從事中藥活性成分發(fā)現(xiàn)及合成生物學研究。E-mail: shishepo@163.com

王 娟，講師，主要從事中藥活性成分發(fā)現(xiàn)及合成生物學研究。E-mail: wjwangjuan2012@163.com

[責任編輯 王文倩]