張超，鄒賀康，翟明，莊遠(yuǎn)杯，丘波，吳家華，張聲源，羅曉東*

1.嘉應(yīng)學(xué)院 廣東省山區(qū)特色農(nóng)業(yè)資源保護(hù)與精準(zhǔn)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 梅州 514015；2.嘉應(yīng)學(xué)院 醫(yī)學(xué)院 客家藥用生物資源研究所，廣東 梅州 514031；3.嘉應(yīng)學(xué)院 醫(yī)學(xué)院，廣東 梅州 514031

金線吊烏龜Stephania cepharanthaHayata 為防己科千金藤屬植物，又名頭花千金藤、白藥子，主產(chǎn)于廣西、貴州、云南等地，《中華本草》記載其有清熱解毒、涼血止血、消腫散結(jié)的功效，主治咽喉腫痛、熱毒癰腫、風(fēng)濕痹痛，在民間廣泛用于治療咽喉腫痛、風(fēng)濕痹痛和腮腺炎等疾病[1-3]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，千金藤屬植物提取的生物堿千金藤素（cepharanthine，CEP）具有抗炎、清除自由基、抗腫瘤、抑制人類(lèi)免疫缺陷病毒-1（HIV-1）和免疫調(diào)節(jié)等生物活性[4-5]。目前，國(guó)內(nèi)外關(guān)于金線吊烏龜?shù)难芯恐饕杏谏飰A、黃酮、蒽醌、甾醇和糖類(lèi)等化學(xué)成分和提取方法[6-8]，其藥理學(xué)相關(guān)研究較少。

從民間應(yīng)用和前人研究基礎(chǔ)出發(fā)，為全面評(píng)價(jià)金線吊烏龜不同提取部位在抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化及抑制亞硝化的活性差異，本研究以金線吊烏龜?shù)氖兔烟崛∥铩⒁宜嵋阴ヌ崛∥?、正丁醇提取物和水提取? 個(gè)不同極性部位為研究對(duì)象，采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、醋酸扭體法和熱板法評(píng)價(jià)抗炎、鎮(zhèn)痛活性；采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除法和2,2-聯(lián)氮基-雙-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽（ABTS）自由基清除法測(cè)定抗氧化活性；模擬人體胃酸條件（pH 3.0，溫度37 ℃），采用鹽酸萘乙二胺法和α-萘胺法測(cè)定抑制亞硝化活性，以期為金線吊烏龜?shù)闹苿╅_(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 藥材

金線吊烏龜購(gòu)于梅州市梅江區(qū)藥材市場(chǎng)，經(jīng)嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院客家藥用生物資源研究所張聲源副教授鑒定為防幾科千金藤屬多年生藤本植物金線吊烏龜Stephania cepharanthaHayata的塊根。

1.2 動(dòng)物

無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)昆明種小鼠雄性60 只、雌性150 只，體質(zhì)量（20±2）g，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理中心提供，合格證號(hào)為44002100026062，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SCXK（粵）2021-0041。實(shí)驗(yàn)期間小鼠飼養(yǎng)于嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房，溫度20～26 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，自由進(jìn)食、飲水。

1.3 試藥

雙氯芬酸鈉腸溶片（北京諾華制藥有限公司，批號(hào)：X1283）；羅通定片（上海金不換蘭考制藥有限公司，批號(hào)：H41023917）；維生素C（VitC，西隴科學(xué)有限公司）；DPPH、ABTS（美國(guó)Sigma 公司，批號(hào)分別為STBB0829V、K1517067）；亞硝酸鈉、對(duì)氨基苯磺酸、鹽酸萘乙二胺、二甲胺、1-萘胺、過(guò)硫酸鉀、無(wú)水檸檬酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、碳酸鈉（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；二甲苯（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；乙酸（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；無(wú)水乙醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；0.9%氯化鈉注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司）；其余試劑均為分析純。

1.4 儀器

RB-200 型智能熱板儀（成都泰盟軟件有限公司）；Spark 型酶標(biāo)儀（瑞士Tecan 公司）；UV-1800型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）。

2 方法

2.1 金線吊烏龜不同溶劑提取物的制備

金線吊烏龜2.0 kg 干燥后粉碎，用3 倍量95%乙醇加熱回流提取3 次，每次30 min，合并提取液，減壓濃縮得總浸膏225 g（得率11.25%）。取總浸膏200 g 分散于蒸餾水中，依次加入石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，減壓回收溶劑，得石油醚提取物46 g（得率2.59%）、乙酸乙酯提取物12 g（得率0.67%）、正丁醇提取物59 g（得率3.32%）、水提取物83 g（得率4.67%）。

2.2 抗炎、鎮(zhèn)痛活性考察

2.2.1 二甲苯致小鼠耳廓腫脹法 SPF 級(jí)昆明種小鼠60 只，雌雄各半，隨機(jī)分為6 組，每組10 只，分別為空白組（0.9%氯化鈉溶液）、陽(yáng)性組（雙氯芬酸鈉）及4個(gè)實(shí)驗(yàn)組（石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物）。陽(yáng)性組小鼠按照0.01 g·kg-1灌胃雙氯芬酸鈉溶液，經(jīng)前期開(kāi)展的預(yù)實(shí)驗(yàn)毒性驗(yàn)證，4個(gè)實(shí)驗(yàn)組小鼠灌胃劑量為3 g·kg-1，空白組小鼠灌胃等體積0.9%氯化鈉溶液。連續(xù)給藥5 d，末次給藥1 h 后，于小鼠右耳兩面各涂二甲苯10 μL 激發(fā)炎癥致腫。4 h 后頸椎脫臼處死，用打孔器沿右耳廓打一直徑為5 mm的圓片，左耳相同部位打孔作對(duì)照，分析天平稱(chēng)質(zhì)量記錄，根據(jù)公式（1）、（2）計(jì)算各組腫脹度及腫脹抑制率。

2.2.2 醋酸扭體法 實(shí)驗(yàn)小鼠分組及給藥同2.2.1項(xiàng)下方法。連續(xù)給藥5 d，末次給藥1 h后，按0.02 mL·g-1于小鼠腹腔注射0.6%乙酸溶液致痛，記錄注射乙酸后20 min 內(nèi)小鼠扭體反應(yīng)（腹部和后肢因疼痛刺激而伸長(zhǎng)）次數(shù)，并按公式（3）計(jì)算扭體反應(yīng)抑制率。

2.2.3 熱板法 將智能熱板儀調(diào)至55 ℃，記錄小鼠開(kāi)始舔后足的時(shí)間，篩選5～30 s 舔后足的雌性昆明種SPF 級(jí)小鼠60 只，0.5 h 后再測(cè)定1 次，取兩次舔后足的平均時(shí)間作為該小鼠的基礎(chǔ)痛閾。分組同2.2.1 項(xiàng)下方法，陽(yáng)性組小鼠按照0.1 g·kg-1灌胃羅通定溶液，其他組給藥方式不變。連續(xù)給藥5 d，末次給藥后的第1、2 小時(shí)分別記錄小鼠舔后足的時(shí)間作為給藥后的痛閾，并根據(jù)公式（4）計(jì)算痛閾提高百分率。在熱板上持續(xù)60 s 仍無(wú)舔足動(dòng)作的小鼠痛閾按60 s記錄。

2.3 抗氧化活性測(cè)定

2.3.1 DPPH 法 以適量無(wú)水乙醇充分溶解各實(shí)驗(yàn)組樣品至0.40 mg·mL-1，溶解VitC至0.04 mg·mL-1，逐級(jí)稀釋至0.5倍，共5個(gè)質(zhì)量濃度，分別精密吸取不同質(zhì)量濃度的樣品溶液和VitC 溶液各80 μL 于96孔板中，各加入0.15 mmol·mL-1DPPH 無(wú)水乙醇溶液150 μL，混合后避光靜置5 min，在酶標(biāo)儀517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度（A），每個(gè)樣品平行操作3 次，根據(jù)公式（5）計(jì)算各樣品對(duì)DPPH 自由基的清除率。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）、清除率為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸分析，計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50），IC50越小，其活性越強(qiáng)。

式中Ai為樣品反應(yīng)體系的吸光度，Aj為對(duì)照反應(yīng)體系的吸光度，A0為空白反應(yīng)的吸光度。

2.3.2 ABTS法蒸餾水配制7.0 mmol·mL-1的ABTS 溶液與2.45 mmol·mL-1過(guò)硫酸鉀溶液等體積混合后，室溫避光靜置12～16 h，制備ABTS母液。分別取10 mmol·L-1磷酸二氫鈉溶液和磷酸氫二鈉溶液19、81 mL，混勻，制備pH 7.4 的磷酸緩沖溶液。用pH 7.4 磷酸緩沖溶液調(diào)節(jié)ABTS 母液在734 nm 處A為0.70±0.02，即得ABTS 工作液。以無(wú)水乙醇充分溶解各組實(shí)驗(yàn)樣品至質(zhì)量濃度為0.16 mg·mL-1，逐級(jí)稀釋至0.5倍，共5個(gè)質(zhì)量濃度；無(wú)水乙醇充分溶解VitC 至質(zhì)量濃度分別為0.01、0.02、0.03、0.04、0.05 mg·mL-1。分別精密吸取不同質(zhì)量濃度的樣品溶液和VitC溶液各50 μL于96 孔板中，加入ABTS工作液200 μL，混合后避光靜置5 min，在酶標(biāo)儀734 nm處測(cè)定各孔的A，每個(gè)樣品平行操作3次。根據(jù)公式（5）計(jì)算各樣品對(duì)ABTS自由基的清除率和IC50。

2.4 抑制亞硝化活性測(cè)定

2.4.1 鹽酸萘乙二胺法 分別取0.10 mol·L-1檸檬酸溶液198.63 mL 和0.20 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液51.37 mL，混勻，制備pH 3.0 的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液。以無(wú)水乙醇充分溶解各組實(shí)驗(yàn)樣品至質(zhì)量濃度為20.00 mg·mL-1，逐級(jí)稀釋至0.5倍，共5 個(gè)質(zhì)量濃度；無(wú)水乙醇充分溶解VitC 至質(zhì)量濃度分別為1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mg·mL-1。分別精密吸取不同質(zhì)量濃度的樣品溶液和VitC 溶液1.0 mL 于25 mL 具塞比色管中，依次加入pH 3.0 的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液2.0 mL，5 μg·mL-1亞硝酸鈉溶液2.0 mL，充分混勻后37 ℃恒溫反應(yīng)1 h，加入0.4%對(duì)氨基苯磺酸2.0 mL，混勻，靜置5 min后，加入0.2%鹽酸萘乙二胺溶液1.0 mL，定容至刻度，靜置15 min后在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)538 nm處測(cè)定A，每個(gè)樣品平行操作3 次。根據(jù)公式（5）計(jì)算各樣品對(duì)亞硝酸鹽的清除率和IC50。

2.4.2α-萘胺法 以無(wú)水乙醇充分溶解樣品各實(shí)驗(yàn)組樣品溶液至質(zhì)量濃度分別為4.00、8.00、12.00、16.00、20.00 mg·mL-1，溶解VitC 至質(zhì)量濃度分別為4.00、8.00、12.00、16.00、20.00 mg·mL-1。分別精密吸取不同質(zhì)量濃度的樣品溶液和VitC 溶液1.0 mL 于25 mL具塞比色管中，依次加入pH 3.0的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液10.0 mL、1 mmoL·L-1亞硝酸鈉溶液1.0 mL、1 mol·L-1的二甲胺溶液1.0 mL，定容至刻度，37 ℃恒溫反應(yīng)1 h。精密移取反應(yīng)液1.0 mL 至培養(yǎng)皿，加入0.5%碳酸鈉溶液0.5 mL，紫外燈（254 nm）下反應(yīng)15 min 后依次加入1%對(duì)氨基苯磺酸1.5 mL、0.1%1-萘胺1.5 mL、蒸餾水0.5 mL，靜置15 min后在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)525 nm 處測(cè)定A，每個(gè)樣品平行操作3 次。根據(jù)公式（6）計(jì)算各樣品對(duì)亞硝胺合成的阻斷率和IC50。

式中Ai為樣品反應(yīng)體系的吸光度，Aj為對(duì)照反應(yīng)體系的吸光度，A0為空白反應(yīng)的吸光度。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 25.0 和Origin 8.5 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果以（）表示。采用單因素方差分析進(jìn)行組間比較，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 金線吊烏龜不同提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛活性

3.1.1 小鼠耳廓腫脹度測(cè)定結(jié)果 各組小鼠耳廓腫脹度及腫脹抑制率見(jiàn)表1。與空白組比較，除乙酸乙酯提取物外，金線吊烏龜各提取部位均能顯著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹（P＜0.05），其抑制能力大小依次為水提取物＞正丁醇提取物＞石油醚提取物＞乙酸乙酯提取物。其中水提取物對(duì)小鼠耳廓腫脹抑制率高達(dá)36.57%，具有較好的抗炎活性。

表1 金線吊烏龜不同提取部位對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（, n=10）

表1 金線吊烏龜不同提取部位對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（, n=10）

注：與空白組比較，*P＜0.05；表2～3同。

3.1.2 小鼠扭體次數(shù)測(cè)定結(jié)果 各組小鼠扭體次數(shù)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。與空白組比較，金線吊烏龜?shù)乃崛∥锖褪兔烟崛∥锞茱@著抑制醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)（P＜0.05），而乙酸乙酯和正丁醇作用不明顯。其中，水提取物對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的抑制率較高，達(dá)到49.14%，優(yōu)于其他3 個(gè)提取部位，顯示出較好的外周鎮(zhèn)痛作用。

表2 金線吊烏龜不同提取部位對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（, n=10）

表2 金線吊烏龜不同提取部位對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響（, n=10）

3.1.3 小鼠痛閾測(cè)定結(jié)果 各組小鼠痛閾測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。與空白組比較，金線吊烏龜各提取部位均能提高小鼠對(duì)熱板的痛閾，在給藥后1、2 h 都有不同程度的提高（P＜0.05）。其中，水提取物給藥后1 h對(duì)小鼠痛閾的提高百分率為47.40%，2 h 提高百分率67.35%，且均優(yōu)于其他3 個(gè)提取部位，顯示出較好的中樞鎮(zhèn)痛作用。

表3 金線吊烏龜不同提取部位對(duì)小鼠的痛閾提高率（, n=10）

表3 金線吊烏龜不同提取部位對(duì)小鼠的痛閾提高率（, n=10）

3.2 金線吊烏龜不同提取物的抗氧化活性

3.2.1 DPPH 自由基清除結(jié)果 各提取部位對(duì)DPPH 自由基的清除率測(cè)定結(jié)果及IC50見(jiàn)圖1、表4。在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，金線吊烏龜各提取部位對(duì)DPPH 自由基均有不同程度的清除作用，呈現(xiàn)量效關(guān)系，清除能力大小依次為乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞石油醚提取物＞水提取物。當(dāng)質(zhì)量濃度為0.4 mg·mL-1時(shí)，乙酸乙酯提取物對(duì)DPPH自由基的清除率高達(dá)93.78%，且乙酸乙酯提取物清除作用的IC50值最低，為（0.084±0.008）mg·mL-1，表明乙酸乙酯提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力最強(qiáng)，且與其他3個(gè)提取部位之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 金線吊烏龜不同提取部位對(duì)DPPH自由基的清除能力（, n=3）

3.2.2 ABTS 自由基清除結(jié)果 各提取部位對(duì)ABTS 自由基的清除率測(cè)定結(jié)果及IC50見(jiàn)圖2、表4。在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，金線吊烏龜各提取部位對(duì)ABTS 自由基均有不同程度的清除作用，呈一定的量效關(guān)系，清除能力大小依次為乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞石油醚提取物＞水提取物。乙酸乙酯提取物清除作用的IC50最低，為（0.063±0.005）mg·mL-1，表明金線吊烏龜?shù)囊宜嵋阴ヌ崛∥飳?duì)ABTS 自由基的清除能力最強(qiáng)，與其他3 個(gè)提取部位之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖2 金線吊烏龜不同提取部位對(duì)ABTS自由基的清除能力（, n=3）

表4 金線吊烏龜不同提取部位抗氧化活性的IC50（, n=3）mg·mL-1

表4 金線吊烏龜不同提取部位抗氧化活性的IC50（, n=3）mg·mL-1

注：與水提取物比較，*P＜0.05；與石油醚提取物比較，#P＜0.05；與正丁醇提取物比較，△P＜0.05。

3.3 金線吊烏龜不同提取物的抑制亞硝化活性

3.3.1 亞硝酸鹽清除結(jié)果 各提取部位對(duì)亞硝酸鹽的清除率測(cè)定結(jié)果及IC50見(jiàn)圖3、表5。在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，金線吊烏龜各提取部位對(duì)亞硝酸鹽均具有不同程度的清除作用，有較好的量效關(guān)系，清除能力大小依次為水提取物＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞石油醚提取物。當(dāng)水提取物質(zhì)量濃度為20 mg·mL-1時(shí)對(duì)亞硝酸鹽的清除率達(dá)到97.39%，且水提取物清除作用的IC50值最低（4.35±0.15）mg·mL-1，表明水提取物對(duì)亞硝酸鹽的清除能力最強(qiáng)，與其他3個(gè)提取部位之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖3 金線吊烏龜各提取部位對(duì)亞硝酸鹽的清除能力（, n=3）

3.3.2 亞硝胺合成的阻斷結(jié)果 各提取部位對(duì)亞硝胺合成的阻斷率測(cè)定結(jié)果及IC50見(jiàn)表5、圖4。在實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，金線吊烏龜各提取部位對(duì)亞硝胺的合成均有一定的阻斷作用，阻斷能力隨質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)，阻斷率大小依次為水提取物＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞石油醚提取物。且水提取物阻斷作用的IC50值最低，為（11.08±0.27）mg·mL-1，表明水提取物對(duì)亞硝胺合成的阻斷能力最強(qiáng)，與其他3 個(gè)提取部位之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。此外，隨著質(zhì)量濃度的升高，水提取物阻斷亞硝胺的能力會(huì)優(yōu)于同等質(zhì)量濃度的陽(yáng)性對(duì)照VitC。

圖4 金線吊烏龜不同提取部位對(duì)亞硝胺合成的阻斷能力（, n=3）

表5 金線吊烏龜各提取部位抑制亞硝化活性的IC50（, n=3）mg·mL-1

表5 金線吊烏龜各提取部位抑制亞硝化活性的IC50（, n=3）mg·mL-1

注：與石油醚提取物比較，*P＜0.05；與正丁醇提取物比較，#P＜0.05；與乙酸乙酯提取物比較，△P＜0.05。

4 結(jié)論與討論

研究表明，人體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)被打破是導(dǎo)致各種癌癥的危險(xiǎn)因素，如炎癥是諸多癌癥的發(fā)病基礎(chǔ)，自由基增多使活性氧的濃度增加，在癌癥的發(fā)展中同樣起促進(jìn)作用。此外，長(zhǎng)期攝入N-亞硝基化合物及自身代謝產(chǎn)生的內(nèi)源性N-亞硝基化合物是食管癌、肝癌和鼻咽癌高發(fā)的重要因素。因此，癌癥與炎癥、自由基及N-亞硝基化合物這三者之間存在一定關(guān)聯(lián)性[9-10]。目前，對(duì)于金線吊烏龜?shù)难芯慷嘁曰瘜W(xué)成分研究為主，對(duì)其藥效學(xué)報(bào)道較少，故本研究開(kāi)展了基于抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化和抑制亞硝化3 種藥效的金線吊烏龜不同提取部位的篩選研究，旨在對(duì)各提取部位進(jìn)行精準(zhǔn)、系統(tǒng)分析，從而明確各極性部位的藥理活性，并為其藥效物質(zhì)的分離純化提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

疼痛作為生命的第五大體征，其產(chǎn)生的主要原因是組織損傷引起的炎癥[11]。吲哚美辛、布洛芬和雙氯芬酸鈉等非甾體類(lèi)藥物，抗炎、鎮(zhèn)痛的同時(shí)也存在影響血小板聚集和消化道損傷等嚴(yán)重不良反應(yīng)，延緩患者康復(fù)且增加醫(yī)護(hù)人員的負(fù)擔(dān)[12-13]。因此，在天然藥物中尋找和開(kāi)發(fā)強(qiáng)效、低廉且不良反應(yīng)少的新型抗炎鎮(zhèn)痛藥已成為新的研究趨勢(shì)。本研究通過(guò)二甲苯致小鼠耳廓腫脹反應(yīng)制備急性炎癥模型，考察藥物抗炎活性；采用醋酸扭體法考察藥物外周鎮(zhèn)痛活性，熱板法考察藥物中樞鎮(zhèn)痛活性。結(jié)果表明，金線吊烏龜4 個(gè)提取部位均有不同程度的抗炎、鎮(zhèn)痛活性，其中水提取物的作用效果最顯著，說(shuō)明金線吊烏龜抗炎、鎮(zhèn)痛活性物質(zhì)富集于極性較大的水提取物，這可能與其富含多種生物堿類(lèi)活性成分有關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道多種生物堿類(lèi)成分在相關(guān)疾病的抗炎、鎮(zhèn)痛治療中發(fā)揮較好的療效[14]，如羅昱瀾等[15]用千金藤屬植物廣西地不容中分離得到的總堿進(jìn)行抗炎、鎮(zhèn)痛評(píng)價(jià)，效果顯著，因此有望從金線吊烏龜大極性部位甚至總生物堿中探索出新型、高效的抗炎鎮(zhèn)痛藥。

自由基化學(xué)性質(zhì)活潑，在機(jī)體內(nèi)部通過(guò)氧化反應(yīng)使細(xì)胞膜和遺傳物質(zhì)產(chǎn)生應(yīng)激性損傷，引起機(jī)體老化，進(jìn)而增加各種退行性疾病的風(fēng)險(xiǎn)[16]，清除、抑制自由基已成為臨床常見(jiàn)輔助治療手段[17]。綜合DPPH 法和ABTS 法2 種評(píng)價(jià)體系的測(cè)定結(jié)果，金線吊烏龜4 個(gè)提取部位均具有良好的抗氧化活性，且中等極性的乙酸乙酯提取物和較大極性的正丁醇提取物抗氧化活性較好，可能與這2 個(gè)部位富含黃酮等較大極性的化學(xué)成分有關(guān)。文獻(xiàn)[18]報(bào)道植物總黃酮具有良好的抗氧化活性。此外，吳冬青等[19]發(fā)現(xiàn)，金線吊烏龜總黃酮清除DPPH 自由基活性顯著且穩(wěn)定性好，因此可針對(duì)金線吊烏龜?shù)囊宜嵋阴ズ驼〈继崛〔课簧踔量傸S酮進(jìn)行更深入的研究，進(jìn)行抗氧化活性成分的靶向分離。

病因?qū)W分析表明，消化道癌癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加與N-亞硝基化合物的合成有直接關(guān)系[20]。亞硝酸鹽作為N-亞硝基化合物的前體化合物，廣泛存在于腌制食品中，攝入體內(nèi)后在人體胃酸環(huán)境可與胺類(lèi)發(fā)生亞硝胺反應(yīng)，形成N-亞硝基化合物，進(jìn)而引發(fā)一系列的腫瘤，甚至可以透過(guò)胎盤(pán)屏障誘導(dǎo)下一代患癌[21]。因此，清除體內(nèi)亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺合成反應(yīng)，是預(yù)防和控制相關(guān)癌癥的有效途徑。通過(guò)模擬人體胃內(nèi)環(huán)境，綜合評(píng)價(jià)金線吊烏龜?shù)囊种苼喯趸钚裕Y(jié)果表明，4 個(gè)提取部位均具有一定的抑制亞硝化活性，其中水提取物的抑制亞硝化活性最強(qiáng)，可能與水提取物富集極性較大的生物堿類(lèi)活性物質(zhì)有關(guān)，文獻(xiàn)報(bào)道千金藤屬植物塊根、莖葉和種子中提取的多種生物堿，具有抗癌細(xì)胞生長(zhǎng)和抗骨肉瘤等多種臨床藥理活性[4,22]，提示可以從金線吊烏龜水提取物中探索有助于癌癥病因性預(yù)防的生物堿類(lèi)成分。

綜上所述，金線吊烏龜具有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化和抑制亞硝化活性，后續(xù)重點(diǎn)對(duì)其大、中極性提取部位開(kāi)展系統(tǒng)的化學(xué)成分、構(gòu)效關(guān)系及作用機(jī)制研究，將有助于闡明金線吊烏龜藥用科學(xué)內(nèi)涵，為這一藥用資源的綜合開(kāi)發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。