覃彩鳳 楊進(jìn)瓊 李媛媛

1 高州市人民醫(yī)院婦科二區(qū) 廣東高州 525200

2 南方醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 廣東廣州 510080

卵巢癌是指生長(zhǎng)在卵巢上的惡性腫瘤，是女性中常見的惡性腫瘤，近年來(lái)發(fā)病趨勢(shì)逐漸年輕化，但隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步，可通過(guò)細(xì)胞學(xué)檢查的應(yīng)用，盡早診斷并進(jìn)行治療。卵巢癌的發(fā)病原因被認(rèn)為具有遺傳因素、內(nèi)分泌因素、外源性化學(xué)因素等，患病前期癥狀不明顯，在確診時(shí)大多患者已處于終末期，此病預(yù)后較差[1，2]。CD44 可在人體多個(gè)器官組織中表達(dá)，如肝臟、肺臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等，是一種在細(xì)胞膜上表達(dá)的跨膜蛋白，有文獻(xiàn)指出，CD44 在上皮性卵巢癌中起到重要作用，參與腫瘤的轉(zhuǎn)移過(guò)程，呈現(xiàn)高度表達(dá)狀態(tài)，CD44 陽(yáng)性表達(dá)率較高的惡性腫瘤中，可以看出其腫瘤的轉(zhuǎn)移性明顯強(qiáng)于其他惡性腫瘤[3，4]。CD44 還參與腫瘤的耐藥過(guò)程，據(jù)報(bào)道，對(duì)藥物耐藥的患者經(jīng)檢測(cè)CD44 表達(dá)率較高，對(duì)藥物較敏感的患者CD44 表達(dá)率較低，惡性腫瘤治療過(guò)程中，患者對(duì)藥物的敏感程度非常重要，可以直接決定患者治療情況及預(yù)后水平，因此研究CD44 與腫瘤治療的關(guān)系具有臨床意義[5]。沉默信息調(diào)節(jié)因子6（Sirt6）是沉默信息調(diào)節(jié)因子中的一種，作用主要是抑制腫瘤生長(zhǎng)，在人體內(nèi)通過(guò)與透明質(zhì)酸結(jié)合發(fā)揮作用，以往的研究中顯示，Sirt1 同時(shí)為原癌基因與抑癌基因，Sirt6 作為其同源物，在癌細(xì)胞中也存在廣泛表達(dá)[6]。本研究旨在探討卵巢癌組織中CD44、Sirt6 的表達(dá)與其預(yù)后的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018 年1 月～2021 年7 月于我院通過(guò)婦科手術(shù)切除的卵巢癌卵巢組織標(biāo)本40 例為觀察組。同時(shí)選取正常卵巢組織標(biāo)本40 例為對(duì)照組。兩組患者在年齡、體質(zhì)量、初潮年齡在內(nèi)的一般資料（P ＞0.05），具有可比性由于卵巢癌呈現(xiàn)出一定遺傳傾向，兩組組家族腫瘤史中的數(shù)據(jù)具有差異。詳見表1。研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)執(zhí)行。

表1 兩組患者一般資料比較【（），n（%）】

表1 兩組患者一般資料比較【（），n（%）】

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）觀察組患者符合國(guó)際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)中對(duì)卵巢癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。（2）研究對(duì)象在進(jìn)行卵巢切除術(shù)前無(wú)合并其他重要臟器如肝、腎等功能衰竭或受損。（3）研究對(duì)象在進(jìn)行卵巢切除術(shù)前無(wú)精神疾病史。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）研究對(duì)象在院期間檢查出存在免疫系統(tǒng)疾病、人類免疫缺陷病毒感染等。（2）臨床資料不完整者。（3）此次手術(shù)前6 月內(nèi)進(jìn)行過(guò)外科手術(shù)者。（4）標(biāo)本不完整，對(duì)研究結(jié)果造成影響者。

1.3 方法

應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CD44、Sirt6 陽(yáng)性表達(dá)率：（1）制作石蠟切片：研究所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定，用溫箱進(jìn)行脫水處理，后用石蠟包埋，采用深圳市瑞沃德生命科技有限公司提供的病理切片機(jī)，連續(xù)切為4 μm 厚度切片，貼附在潔凈載玻片上，后再經(jīng)60°烤箱中放置至少8 h。（2）免疫組化：烘干后進(jìn)行脫蠟處理，使用二甲苯進(jìn)行兩次，每次30 min；再將其水化，100%濃度乙醇進(jìn)行兩次，每次5 min，95%乙醇進(jìn)行兩次，每次5 min，80%乙醇進(jìn)行一次，每次5 min，75%乙醇一次，每次5 min，最后用蒸餾水進(jìn)行一次，每次5 min。滅活標(biāo)本中的酶類物質(zhì)，在室溫下進(jìn)行，3%H2O2孵育，共10～15 min。（3）再將組織標(biāo)本染色，需配置好DAB顯色劑，（準(zhǔn)備1 mL 蒸餾水，先加入DAB 底物，后加入DAB緩沖液，和DAB顯色劑各一滴，充分搖勻后，放置一旁備用，應(yīng)注意需放在避光處，避免顯色效果喪失，此顯色劑在5 min 內(nèi)有效）。后再利用蘇木精復(fù)染色，需將組織切片浸泡于蘇木精溶液當(dāng)中，需浸泡3 min 左右，此步驟為堿性細(xì)胞核染色；拿出后需在清水中充分清洗，需洗2 min；再將切片浸泡于氨水當(dāng)中，浸泡時(shí)間為2 min 左右，再將其放入清水中充分清洗，要將切片表面的氨水清洗干凈，清洗時(shí)間大約持續(xù)2 min。后需進(jìn)行脫水處理，75%乙醇溶液、80%乙醇溶液、95%乙醇溶液、100%乙醇溶液各一次，每次均為5 min。最后將標(biāo)本進(jìn)行透明封片，應(yīng)用二甲苯進(jìn)行3 此，每次需進(jìn)行5 min，采用中性樹膠封片。（4）高倍顯微鏡查看標(biāo)本：在高倍顯微鏡下查看檢測(cè)結(jié)果，每例標(biāo)本至少需要觀察10 個(gè)高倍視野1000個(gè)腫瘤細(xì)胞，當(dāng)看到視野中出現(xiàn)特異性著色時(shí)，如淺黃色、棕褐色的顆粒狀物時(shí)，則判斷該標(biāo)本出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在10%以上則判定為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS24.0軟件分析處理數(shù)據(jù)，此試驗(yàn)規(guī)定[例（%）]的計(jì)數(shù)資料用檢驗(yàn)表示，計(jì)量資料用（）表示，比較采用t 值。P ＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CD44、Sirt6 的陽(yáng)性表達(dá)率見表2

表2 兩組CD44、Sirt6 的陽(yáng)性表達(dá)率【n（%）】

2.2 兩組預(yù)后情況比較見表3

表3 兩組預(yù)后情況比較【n（%）】

3 討論

卵巢癌在女性生殖道惡性腫瘤中，常見程度排在第三位，僅次于宮頸癌和在宮內(nèi)膜癌，死亡率排在第一位[8]。多個(gè)文獻(xiàn)中有報(bào)道，機(jī)體感染高危HPV 病毒是引起卵巢癌的原因之一，卵巢癌在前期特異性癥狀不明顯，導(dǎo)致患者在就診時(shí)大多數(shù)已處于腫瘤中晚期，且經(jīng)過(guò)治療后，70%左右的患者會(huì)發(fā)生復(fù)發(fā)，因此此病預(yù)后情況較差[9]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用手術(shù)和化療的方式來(lái)治療卵巢癌，但由于卵巢組織本身成分復(fù)雜，解剖位置較隱蔽，治療后5 年生存率仍較低，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量。

卵巢癌組織中CD44、Sirt6 的表達(dá)情況對(duì)于臨床判定卵巢癌有重要意義。CD44 陽(yáng)性表達(dá)率較高的卵巢癌中可顯示出極強(qiáng)的轉(zhuǎn)移和侵襲能力，且耐藥性較強(qiáng)，此類患者在用藥后效果相比其他患者，藥效明顯降低，因此研究CD44 在卵巢癌組織中的作用機(jī)制或得出其對(duì)卵巢癌的影響及作用在臨床有較強(qiáng)的意義。CD44 位于人類第11 號(hào)染色體上，在機(jī)體內(nèi)分布十分廣泛，是細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白，發(fā)生惡性腫瘤的患者體內(nèi)CD44 普遍存在，如胃癌、宮頸癌、肺癌等，但在不同腫瘤患者體內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)率不同，但陽(yáng)性表達(dá)的患者腫瘤易轉(zhuǎn)移。造成此結(jié)果的原理是CD44 可與細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白等物質(zhì)結(jié)合，作用于異質(zhì)性黏附，使腫瘤細(xì)胞黏附于機(jī)體細(xì)胞，CD44 還可與細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合，參與細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)[10]。Sirt6 是一種依賴于煙酰胺腺苷二核苷酸（NAD+）的去乙?；?，屬于酵母沉默信息調(diào)節(jié)因子中的一種，不論是細(xì)菌還是哺乳動(dòng)物內(nèi)都含有此因子，與酵母細(xì)胞中與物質(zhì)代謝和長(zhǎng)壽相關(guān)的SIR2 同源，Sirt6 可以通過(guò)自身功能，起到調(diào)控DNA 功能，維護(hù)端?；竟δ埽瑓⑴c葡萄糖和脂肪代謝，控制機(jī)體內(nèi)炎性反應(yīng)和癌癥發(fā)生等作用，CD44、Sirt6 在機(jī)體中都有重要作用，因此研究CD44、Sirt6 的表達(dá)對(duì)卵巢癌的控制有積極意義。卵巢癌若在早期被發(fā)現(xiàn)并采取措施治療，預(yù)后情況將明顯好轉(zhuǎn)，而中、晚期患者在治療后1～2 年之內(nèi)，就會(huì)再次復(fù)發(fā)[12]。在術(shù)后對(duì)患者進(jìn)行隨訪，查看患者預(yù)后情況，有助于幫助患者盡早恢復(fù)。本研究結(jié)果顯示，觀察組CD44 的陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組，Sirt6 的陽(yáng)性表達(dá)率低于對(duì)照組；觀察組的恢復(fù)率顯著低于對(duì)照組；轉(zhuǎn)移和死亡率高于對(duì)照組。可得知CD44 在癌癥卵巢組織中表達(dá)率高于健康卵巢組織，Sirt6 則為陽(yáng)性表達(dá)率低于健康卵巢組織，可以得出CD44、Sirt6 的表達(dá)與卵巢癌組織發(fā)展和預(yù)后情況有明顯相關(guān)性，值得在臨床推廣檢測(cè)。

綜上所述，卵巢癌組織中CD44、Sirt6 的表達(dá)可顯著反應(yīng)卵巢癌情況，CD44 及Sirt6 的陽(yáng)性表達(dá)率與卵巢癌預(yù)后情況顯著相關(guān)，可為卵巢癌患者的預(yù)后情況提供判斷依據(jù)。