代 蓮，許珈齊，游平平，柯媛媛，呂輝鴻，黃 瓊

（福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三人民醫(yī)院，福建 福州 350108）

2 型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）主要病因是胰島素敏感性下降引起的胰島素抵抗，癥狀表現(xiàn)為胰島素代償、高血糖以及高血脂，長期發(fā)展將引起不可逆轉(zhuǎn)的并發(fā)癥［1］。胰島素抵抗不僅觸發(fā)高血糖的發(fā)生，其所引起的血脂異常、血液黏度異常等一系列的變化在糖尿病發(fā)生、發(fā)展中更扮演著重要的角色［2］。

中藥治療糖尿病具有明顯的優(yōu)勢，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院張東教授創(chuàng)立的歸一飲加減方廣泛應(yīng)用在糖尿病治療中，取得了良好的治療效果［3］，但臨床研究較少，缺乏研究基礎(chǔ)，治療糖尿病的機(jī)制不明。故本研究建立糖尿病大鼠模型，觀察歸一飲加減方干預(yù)后糖尿病模型大鼠血糖、血脂、血液流變學(xué)、胰島素抵抗指數(shù)的變化，進(jìn)一步探索歸一飲加減方治療糖尿病的療效及機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級雄性Wistar 大鼠60 只，約2 月齡，體質(zhì)量（200±20）g，購于浙江醫(yī)學(xué)科學(xué)院，生產(chǎn)許可證號：SCXK（浙）2019-0002。飼養(yǎng)于福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號：SYXK（閩）2014-0005，飼養(yǎng)在室溫22～25 ℃，相對濕度40%～70%的環(huán)境中。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥材 歸一飲加減方由炙甘草12 g，干姜9 g，附子6 g，葛根10 g，天花粉10 g 組成，原藥材飲片由安徽省萬生中藥飲片有限公司提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 鏈脲佐菌素（STZ，美國Sigma 公司）；血糖試劑盒（北京北化康泰臨床試劑有限公司）；胰島素放免試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所）；膽固醇（TC）生化試劑、三酰甘油（TG）生化試劑（北京中生生物工程高技術(shù)公司）；低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）生化試劑、高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）生化試劑（北京北免東雅生物技術(shù)研究所）；基礎(chǔ)飼料配方由福建中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供；高熱量飼料購于福州諾敦斯生物科技有限公司，按基礎(chǔ)飼料∶奶粉∶蔗糖∶煉豬油∶雞蛋＝63∶4∶30∶20∶2 的比例配制。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司，型號：HH-4）；高速離心機(jī)（德國EPPen?dorf 公司，型號：5810R）；全自動(dòng)生化儀（美國Beck?man 公司）；全自動(dòng)酶標(biāo)儀（美國BioTek 公司，型號：ELX800）；全自動(dòng)血液流變儀（北京普利生生物科技開發(fā)有限公司，型號：LBY-N7500B）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 STZ試劑配制 檸檬酸2.1 g加入雙蒸水100 mL中配成A 液，檸檬酸鈉2.94 g 加入雙蒸水100 mL 中配成B 液，取A 液22.8 mL、B 液17.2 mL 混合均勻，最后稱定300 mg STZ 粉末溶于40 mL A、B 混合液中即得。

2.2 實(shí)驗(yàn)藥物混懸液制備 歸一飲加減方：稱取上述中藥1 劑（共47 g），藥材先用清潔自來水清洗2 遍，隨后加蒸餾水沒過中藥，浸泡0.5 h 后再進(jìn)行煎煮，煎煮1 h 后過濾取藥液；再次加蒸餾水煎煮后過濾取藥液，合并2 次藥液，以武火加熱濃縮至體積為47 mL，相當(dāng)于1.0 g/mL 生藥量濃度，置于4 ℃冰箱保存，使用前1 h 于室溫中恢復(fù)至常溫。鹽酸二甲雙胍、阿托伐他汀片劑研粉后以蒸餾水稀釋混勻，分別配制成61、1.6 mg/mL 混懸液，置于4 ℃冰箱貯藏。

2.3 T2DM 模型制備 將60 只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)抽取10只為正常組，喂以基礎(chǔ)飼料。余下50 只為造模組，造模組給予高熱量飼料喂養(yǎng)。1 個(gè)月后造模組按25 mg/（kg·d）一次性腹腔注射STZ。

2.4 T2DM 模型成功判定 注射STZ 溶液72 h 后，尾靜脈取血測定大鼠空腹血糖（FBG）。若大鼠空腹血糖≥11.1 mmol/L，即確定T2DM 造模成功［4］。

2.5 分組及給藥 將造模成功大鼠隨機(jī)分為模型組、歸一飲組、二甲雙胍組、阿托伐他汀組，每組10 只。模型組予10 mL/（kg·d）蒸餾水灌胃，每日9：00—10：00 灌胃1 次（以下各組灌胃時(shí)間相同）；歸一飲組以成人每日1 劑原方原量，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量按《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》中“人和動(dòng)物按體表面積折算等效劑量比率表”計(jì)算［5］，予歸一飲混懸液3.9 mL/（kg·d）灌胃；二甲雙胍組予二甲雙胍混懸液3 mL/（kg·d）灌胃；阿托伐他汀組予阿托伐他汀混懸液3.1 mL/（kg·d）灌胃。以上4 組在干預(yù)間仍飼以高熱量飼料，正常組不予任何藥物干預(yù)，飼以基礎(chǔ)飼料。各組均喂養(yǎng)8 周。

2.6 指標(biāo)測定

2.6.1 體質(zhì)量、FBG 測定 開始干預(yù)后每隔2 周測定大鼠體質(zhì)量，剪尾測定FBG，測前需禁食不禁水12 h。

2.6.2 糖耐量（OGTT）測定 各組大鼠干預(yù)8 周后剪尾取血行OGTT 測定。末次給藥前1 d 禁食不禁水12 h，以40%葡萄糖液2 g/kg 對大鼠灌胃，于灌胃后0、30、60、120 min 分別檢測血糖值。

2.6.3 血液指標(biāo)測定 末次干預(yù)后大鼠禁食不禁水12 h，給予戊巴比妥鈉50 mg/kg 體質(zhì)量腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，-20 ℃保存。采用放射免疫法檢測空腹胰島素（FINS）并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）；全自動(dòng)生化儀檢測血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平；全自動(dòng)血液流變儀檢測血液流變學(xué)指標(biāo)，包括全血黏度、血漿黏度、血沉、紅細(xì)胞聚集指數(shù)。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料屬正態(tài)分布的以（±s）表示，采用單因素方差分析。

3 結(jié) 果

3.1 各組大鼠體質(zhì)量比較 見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量比較（±s） g

表1 各組大鼠體質(zhì)量比較（±s） g

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與阿托伐他汀組比較，3）P＜0.01。

組別正常組模型組歸一飲組二甲雙胍組阿托伐他汀組n 10 10 10 10 10給藥第2周385.80±17.19 379.63±16.23 382.71±14.60 388.23±8.76 383.47±6.89給藥第4周395.70±18.13 351.52±15.171）360.38±10.601）372.86±9.631）2）3）350.93±7.891）給藥第6周406.80±16.79 316.23±18.341）327.45±9.601）2）3）341.37±8.961）2）3）310.18±5.881）給藥第8周418.69±27.98 271.78±15.831）324.31±11.731）2）3）322.43±10.211）2）3）275.36±4.381）

3.2 各組大鼠空腹血糖比較 見表2。

表2 各組大鼠空腹血糖比較（±s） mmol/L

表2 各組大鼠空腹血糖比較（±s） mmol/L

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與阿托伐他汀組比較，3）P＜0.01。

組別正常組模型組歸一飲組二甲雙胍組阿托伐他汀組n 10 10 10 10 10干預(yù)第2周4.25±0.12 17.38±1.231）11.76±1.601）2）3）10.23±1.761）2）3）16.47±1.891）干預(yù)第4周4.36±0.13 18.52±1.171）8.38±1.602）3）8.86±0.632）3）16.93±1.891）干預(yù)第6周3.76±0.19 16.29±1.341）6.45±0.622）3）7.37±0.962）3）15.18±0.881）干預(yù)第8周3.54±0.12 17.93±1.131）5.23±0.132）3）4.72±0.462）3）16.92±1.141）

3.3 各組大鼠OGTT 比較 見表3。

表3 各組大鼠OGTT 比較（±s） mmol/L

表3 各組大鼠OGTT 比較（±s） mmol/L

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與阿托伐他汀組比較，3）P＜0.01。

組別正常組模型組歸一飲組二甲雙胍組阿托伐他汀組n 10 10 10 10 10灌胃后0 min 3.54±0.12 17.93±1.131）5.23±0.132）3）4.72±0.462）3）16.92±1.141）灌胃后30 min 6.59±0.43 29.57±0.231）9.54±0.342）3）9.31±0.212）3）28.27±0.491）灌胃后60 min 6.51±0.70 25.67±1.451）8.72±0.812）3）8.27±0.782）3）23.66±1.441）灌胃后120 min 5.91±0.65 21.78±1.491）6.80±0.512）3）7.26±0.832）3）19.97±1.491）

3.4 各組大鼠FINS 和HOMA-IR 比較 見表4。

表4 各組大鼠FINS 和HOMA-IR 比較（±s）

表4 各組大鼠FINS 和HOMA-IR 比較（±s）

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與阿托伐他汀組比較，3）P＜0.01。

組別正常組模型組歸一飲組二甲雙胍組阿托伐他汀組n 10 10 10 10 10 FINS/（mIU/L）15.17±1.27 32.55±13.421）15.07±5.852）3）16.58±7.252）3）32.53±13.431）HOMA-IR 2.25±0.49 23.10±0.621）3.49±0.162）3）3.63±0.162）3）23.07±0.611）

3.5 各組大鼠血清TC、TG、LDL-C 和HDL-C 水平比較 見表5。

表5 各組大鼠TC、TG、LDL-C 和HDL-C 水平比較（±s） mmol/L

表5 各組大鼠TC、TG、LDL-C 和HDL-C 水平比較（±s） mmol/L

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與二甲雙胍組比較，3）P＜0.01。

組別正常組模型組歸一飲組二甲雙胍組阿托伐他組n 10 10 10 10 10 TC 1.13±0.17 2.07±0.381）1.44±0.312）3）2.06±0.391）1.46±0.782）3）TG 0.55±0.16 1.18±0.311）0.76±0.272）3）1.14±0.301）0.68±0.522）3）LDL-C 0.61±0.22 1.06±0.431）0.66±0.152）3）1.03±0.421）0.65±0.172）HDL-C 0.68±0.15 0.38±0.24 0.35±0.13 0.37±0.23 0.63±0.26

3.6 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較 見表6。

表6 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較（±s）

表6 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較（±s）

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01；與二甲雙胍組比較，3）P＜0.01。

組別正常組模型組歸一飲組二甲雙胍組阿托伐他汀組n 10 10 10 10 10全血黏度/（mPa·s）4.15±0.57 6.73±1.541）4.37±0.352）3）5.91±1.441）4.22±0.332）3）血漿黏度/（mPa·s）2.21±0.76 3.70±1.031）2.57±1.022）3）3.52±0.881）2.43±0.752）3）血沉/（mm/h）1.21±0.22 2.46±0.431）1.31±0.152）3）2.35±0.171）2.25±0.11紅細(xì)胞聚集指數(shù)1.47±0.15 2.98±0.231）2.79±0.13 2.83±0.261）1.93±0.252）3）

4 討 論

T2DM 病理生理基礎(chǔ)是胰島素抵抗和胰島β 細(xì)胞功能缺陷。T2DM 患者往往伴隨著肥胖，盡管體質(zhì)量管理對于糖尿病人非常重要，但也并非降得越低越好。本研究結(jié)果顯示：歸一飲加減方可使糖尿病大鼠的體質(zhì)量及對葡萄糖的耐受性增加，這使得機(jī)體對葡萄糖吸收利用率提高，無需過度地分解脂肪和蛋白質(zhì)，減少了患者疲乏無力、營養(yǎng)不良、免疫力下降等健康問題的發(fā)生幾率［6］。

本研究結(jié)果還顯示：糖尿病模型組大鼠FPG、FINS、HOMA-IR、TG、TG、LDL-C 水平明顯高于正常組，這與CALIMIOGLU 等［7］研究結(jié)果基本一致，表明糖尿病模型組大鼠存在脂代謝紊亂。長期的脂代謝紊亂可使血脂濃度升高，影響葡萄糖的氧化、攝取和糖異生及胰島素分泌［8］，甚至可干擾胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)而加劇機(jī)體的胰島素抵抗，從而加重糖尿?。?］。歸一飲加減方可改善大鼠血脂水平，使大鼠血液中代謝產(chǎn)生的三酰甘油減少，一定程度上減少了脂毒性對胰島細(xì)胞的損害，減輕了肝臟和外周組織的胰島素抵抗；另外，歸一飲加減方可改善T2DM 大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)，其作用有可能與改善胰島素抵抗有關(guān)，但具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。本研究中治療后二甲雙胍組與模型組比較，LDL-C、TG 指標(biāo)有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)意義，考慮可能與樣本數(shù)量較少且治療時(shí)間較短有關(guān)。綜上，歸一飲加減方對糖尿病大鼠的血脂、血液流變學(xué)指標(biāo)有改善作用，提示其在降低血糖的同時(shí)，可能兼有預(yù)防糖尿病的心血管疾病以及高血壓、微血管病變、腦血栓等并發(fā)癥作用，使糖尿病得到全面的改善，這將是我們下一步研究的方向。