羅鳴

（江西省吉安市食品藥品檢驗檢測中心，吉安 343000）

臨床在進行藥物、食品檢測時，常用超高效液相色譜法實施檢測， 其屬于一種化學成分分離技術，應用原理與高效液相色譜法一致，能夠快速檢測小顆粒物質(zhì)，分離速度快、自動化程度高，且適用范圍較廣[1]。 當前在進行藥物檢驗分析時，相比高效液相色譜法， 超高效液相色譜法具有更加突出的優(yōu)勢， 不僅可以將藥物中的復雜成分進行有效分析，且檢驗分離速度快，使用較為廣泛[2]。

1 儀器與方法

1.1 儀器選取 使用超高效液相色譜儀， 選取48片三七傷藥片（生產(chǎn)廠家：山西和豐大來制藥有限公司；國藥準字：Z20003048），隨機分為對照組與研究組，各24 例。

1.2 方法 隨機擇48 片三七傷藥片，實施檢測。 對照組：高效液相色譜法檢測。 將藥片進行研磨，直到其呈現(xiàn)粉末狀，將藥粉置入量瓶中，增加流動溶解，進行稀釋與濾過后，放置紫外線中掃描（200～400 nm），其中末端吸收210 nm，對波長進行檢測。隨后吸取20 μL 稀釋液注入液相色譜儀， 并且記錄以及觀察色譜圖。 研究組：超高效液相色譜法檢測。 將藥片進行研磨，直到其呈現(xiàn)粉末狀，隨后增加流動溶解，進行稀釋以及過濾后，在超高效液相色譜法儀中注入20 μL 稀釋液， 對色譜圖進行觀察與記錄。

1.3 觀察指標 分析兩組藥物檢驗分析時間以及徹底分離率。

1.4 統(tǒng)計學分析 以SPSS 19.0 軟件分析資料。 χ2檢驗計數(shù)資料，t 檢驗計量資料。 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 分析時間對比 對比分析時間， 研究組更短，P＜0.05，見表1。

表1 分析時間（±s，min）

表1 分析時間（±s，min）

組別 例數(shù) 分析時間研究組對照組t 值P 值24 24 2.41±0.11 15.34±1.47 42.971＜0.001

2.2 徹底分離率 對比徹底分離率， 研究組更高，P＜0.05。 見表2。

表2 徹底分離率（n，%）

3 討論

3.1 藥物檢驗相關概述 在實施藥物檢驗時，部分樣品由于含量比較少，因此分離時難度大，時間長，結果不理想。因此當前臨床需要一種分析速度快且分離效率高的方式，而超高效液相色譜法則可以滿足上述條件。 超高效液相色譜法具有靈敏度、精確度高的優(yōu)勢，因此在臨床進行藥物檢驗中使用較為廣泛。 由于超高效液相色譜法分辨率、自動化程度高，檢測速度快，所以在實施檢測后，能夠有效分辨出假冒偽劣藥物，提高用藥的安全性。 在進行藥物分析時，相比高效液相色譜法，使用超高效液相色譜法分離能力更高，可以在較快的流速、線速以及反壓下實施分離，結果較為優(yōu)異。 因此現(xiàn)階段臨床在對原料藥、成藥、中間體各組分以及雜質(zhì)含量檢測時，常選擇使用超高效液相色譜法，具有快速、準確且高效的優(yōu)勢[3]。

超高效液相色譜是由細粒徑填料和細內(nèi)徑柱子而獲得的高效液相色譜技術， 對色譜柱性能產(chǎn)生影響的主要因素是固定相的顆粒度。 顆粒度越小其色譜柱的效率越高， 顆粒度的降低能夠提升色譜柱的效率， 同時還能提高分析的靈敏度和速度。 為了能夠顯著提升分離速度和分離效率，則需要在超高效液相色譜的色譜技術上進行改進，需要創(chuàng)新的技術有4 點：（1）使用雜化顆粒技術來合成新型色譜填料。 新型的全多孔球形反相固定相色譜填料的粒徑大小為17 μm，同時在填料技術上也進行改進，制備高效率的色譜柱。 （2）制造超高效液相色譜輸液泵。 如裝填的色譜柱較長，為提升柱效的流速，應先將其柱壓進行準確計算，再使用輸液泵將溶劑進行直接傳送。 （3）超高效液相色譜高速檢測器。 當色譜峰通過檢測器時，一般會有一個非常小和非常高的時間常數(shù)， 這樣可以幫助檢測器在整個色譜峰內(nèi)撲捉到更多的數(shù)據(jù)點， 能夠獲得準確的保留時間和峰面積。 （4）自動進樣器。進樣系統(tǒng)是超高效液相色譜非常關鍵的因素，在超高效液相色譜中確保極端高壓力波動的影響，所以進樣時體積要盡量減小， 這樣才能加快進樣周期的同時還能實現(xiàn)進樣的高速度。

3.2 超高效液相色譜法的應用現(xiàn)狀

3.2.1 應用于藥品分析 在藥品檢驗分析中， 樣品分離難度高、 分析時間長一直是藥品檢驗分析的弊端。 而應用超高效液相色譜法進行藥品檢驗分析，可彌補上述弊端，提高藥品檢測的靈敏度和藥品分析準確性。 如，在測定人凝血因子VII 中枸櫞酸離子含量的試驗中， 應用超高效液相色譜法進行測定的效果良好。 采用氫氧化鈉溶液（20 mmol/L）作為流動相，離子交換柱為4 mm × 250 mm，等度洗脫時長20 min， 測定枸櫞酸離子的濃度范圍在0.1～2.0 μg/mL 之間，該濃度與對照品色譜峰呈線性關系，回收率為98.4%[4]。 如在3-羥基地氯雷他定和地氯雷他定的測定時， 實驗證明應用超高效液相色譜法進行測定無任何誤差。 除此之外，超高效液相色譜法還被成功應用于松乳劑、 曲安西隆乳劑等合成藥物，以及中間體、副產(chǎn)物的檢驗分析中，提高了檢測分析結果的準確性。

3.2.2 應用于藥物代謝動力學 目前， 在醫(yī)藥學領域中， 針對藥物代謝動力學方面的研究主要集中在以下幾個方面：藥物在體內(nèi)的分布情況、藥物在人體內(nèi)的吸收、代謝和排泄。 研究內(nèi)容包括藥物分析測定、 藥物代謝和基質(zhì)分離、 代謝物定量分析等。 相關研究結果表明，超高效液相色譜法在藥物代謝產(chǎn)物檢測中的分離效率較高，不僅如此，超高效液相色譜法還能對樣品進行定量分析。 利用超高效液相色譜法-MS/MS 系統(tǒng)可以測定人體血漿當中的喹那普利和喹那普利拉， 前者的回收率高達85.8%，后者的回收率則可達到62.6%[5]。 超高效液相色譜法檢驗分析過程的耗時較短， 大約在3 min 左右，便可測定出血清中氯氮平及去甲可待因的含量， 并且還能測定出人體血漿中洛匹那韋和利托那韋的濃度。 綜上，在藥物代謝動力學的研究中， 應用超高效液相色譜法能夠使檢測分析結果更加精確。

3.2.3 應用于中藥成分分析 生物堿是大部分中藥最具活性的成分之一，而在中藥成分分析中，超高效液相色譜法的作用十分明顯。 通過超高效液相色譜法分析生物堿時， 因硅羥基在固定相表面的殘留， 會使化合物色譜峰呈現(xiàn)出拖尾或是展寬的情況， 所以需要在檢測分析中加入有機胺類或是離子對試劑等添加劑， 這樣能夠?qū)潭ㄏ啾砻鏆埩舻墓枇u基起到有效的屏蔽作用[3]。 但是添加劑的使用，導致殘余的硅羥基減少，影響了檢測分析結果的準確性。 而采用酸抑制劑，能夠達到有效分析的目的，可提高檢測靈敏度。

3.2.4 保健食品中非法添加化學藥品的檢測 隨著物質(zhì)生活不斷地提升，肥胖癥的人也越來越多，人們也熱衷于減肥。 生產(chǎn)商們?yōu)榱颂岣邷p肥效果，非法添加化學藥物，常見的有鹽酸西布曲明。 該種藥物會導致人體心血管系統(tǒng)、 消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等發(fā)生不良反應。 如果減肥保健食品中添加了這類物質(zhì)，人們長期服用就會對身體造成極大危害。藥品檢驗人員通過超高效液相色譜建立鹽酸西布曲明的檢測方法， 對市場上的減肥保健食品進行篩查， 發(fā)現(xiàn)了不少非法添加的現(xiàn)象， 結果快速準確。 通過超高效液相色譜對減肥保健食品中的違禁成分進行檢測， 為食品藥品行政監(jiān)督提供準確可靠的信息，起到了凈化食品藥品市場，確保人們的食藥安全的作用。

3.3 超高效液相色譜法的優(yōu)勢 目前現(xiàn)代色譜技術中， 使用最為廣泛以及活躍的一種分析方式便是液相色譜，在生化、藥物、環(huán)境以及農(nóng)業(yè)等領域中使用較為廣泛[6]。 近些年工業(yè)以及技術發(fā)展速度不斷加快，各領域?qū)σ合嗌V的要求不斷提升，要求在短時間內(nèi)完成對大量樣品的分析， 而部分生化樣品以及天然產(chǎn)物的分離難度大， 分析時間較長，便對液色相譜技術的分離能力提出更多要求。在該情況下，出現(xiàn)了超高效液相色譜法，屬于小顆粒填料液相色譜技術。 作為一種新型的高效液相色譜技術，該項技術的研發(fā)成果以及使用，提升液相色譜技術的分離能力，使其進入一個新的高度[7]。當前，臨床在使用超高效液相色譜法時，對樣片的吸收方便，處理操作簡便，檢測自動化程度高，具有高靈敏度和分離效率，且檢測時間較短，因此在進行藥物質(zhì)量、藥劑樣品、成分識別微量藥物檢驗等情況下使用廣泛[8-9]。 超高效液相色譜法的主要原理是，使用超高壓技術，提高色譜柱性能，加快分離檢查速度，提升靈敏度，從而使分析樣品時間顯著減短[10-11]。 超高效液相色譜的主成分自身對照法包括兩種方式，一種加矯正因子，一種不加。 前者通過載入矯正因子來矯正雜質(zhì)的實測峰面積；如果沒有雜質(zhì)對照品就可以使用不加矯正因子的對照檢測方法。 總之利用主成分自身對照法能快速準確地對藥物中微量雜質(zhì)進行定量分析， 有廣泛的應用前景[12]。

3.4 超高效液相色譜法在藥物檢驗分析中的應用效果 當前我院在實施藥物檢驗分析時，主要選擇使用超高效液相色譜法檢驗， 相較高效液相色譜法，研究結果顯示，研究組分析時間、徹底分離率顯著較優(yōu)。 因此不難看出，研究組在采取超高效液相色譜法檢驗后，臨床價值高，能夠加快藥物檢驗速度，提高分離率。

對該結論進行原因分析，主要因素如下：當前臨床在實施檢驗時， 超高效液相色譜法具有廣泛的使用價值。 其作為一種新型液相色譜技術，將液相色譜的應用范圍進行擴大與延伸， 因其具備操作簡便、 分析速度快、 靈敏度和分離能力高的優(yōu)勢，擴寬了現(xiàn)代色譜分析的應用前景[9]。 超高效液相色譜法的樣本體積較小，對溶劑消耗的量較少，并且藥物成分分離速度快， 因此在進行藥物體內(nèi)代謝產(chǎn)物、藥物合成、化學成分、定量定性分析等內(nèi)容方面使用較廣，具有重要意義[13]。 目前實施超高效液相色譜法， 可以完成較多復雜的成分減低與分離[10]。 雖在理論上分析，超高效液相色譜法和高效液相色譜法的原理基本一致，但相比而言，超高效液相色譜法提高了色譜峰容量、 分析通量以及靈敏度， 有效將高效液相色譜法的不足之處進行彌補，因此在分離速度、分離效果以及靈敏度方面具有更加顯著的優(yōu)勢。 站在適應環(huán)境角度分析，超高效液相色譜法具有更高的適應力， 即使在高壓以及高速的狀態(tài)下，也能夠完成分離，且質(zhì)量較佳，站在靈敏度角度分析，超高效液相色譜法使用的為微粒， 可以有效減小顆粒度粒徑以及微粒色譜峰，有效縮短樣品檢測分離時間，對檢測的靈敏度進行提高[14]。 站在速度角度分析，使用超高效液相色譜法，其選擇的為微粒，可以顯著縮短色譜柱長，在保障柱效不變的情況下，能夠提升藥物分析速度，從而縮短的分析時間，提高分析效率。

綜上所述， 實施藥物檢驗分析采取超高效液相色譜法檢驗臨床效果顯著。