康 婕，李 媛，石 菲，梁喜玲，劉娟娟，樊 成

（陜西省產(chǎn)品質量監(jiān)督檢驗研究院，陜西西安 710048）

安賽蜜又稱為乙?；前匪徕?，是一種白色結晶物質（單斜結晶形），是一種可作為甜味劑的食品添加劑，對光、熱、酸、堿及微生物具有很高的穩(wěn)定性，在空氣中不吸潮，適用范圍較廣泛，是當前世界上第4代合成甜味劑，24 h可以排出體外，因此沒有卡路里[1-6]。安賽蜜在國際甜味劑市場備受青睞[7]。安賽蜜為人工合成甜味劑，在飲料類中安賽蜜最大允許使用量為0.3 g/kg。食品中超標使用會給人們的身體健康帶來威脅，因此加強食品中安賽蜜等食品添加劑的監(jiān)管及檢測工作任重道遠。

本能力驗證項目旨在了解目前省內(nèi)實驗室在飲料中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┑仁称诽砑觿z測領域的整體水平，提高全省乙?；前匪徕洠ò操惷郏┑臋z測能力結果作為為政府遴選承擔監(jiān)抽任務的依據(jù)。本次能力驗證計劃的方案計劃遵循GB/T 27043—2012[8]、GB/T 28043—2019、CNAS—GL002：2014[9]、CNAS—GL003：2018[10]等相關規(guī)定。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

YP5002型電子天平（上海佑科儀器儀表有限公司）；TG16-WS型臺式高速離心機（湖南湘儀實驗室儀器公司）；Breeye1525型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；超聲清洗儀；抽濾瓶；G3耐酸漏斗；0.45 μm微孔濾膜；層析柱。

甲醇、乙腈、硫酸銨、硫酸、中性氧化鋁、乙?；前匪徕洏藴势罚珺epure公司；實驗室用水均為一級水。

1.2 實施方案

制定科學合理的方案→組織專家對方案進行研討及提出建設性意見→樣品制備及均勻性穩(wěn)定性檢驗→發(fā)放“能力驗證報名表”，告知試驗室參加并返回報名表并審核→作業(yè)指導書編制→樣品登記、編號、貼標→樣品發(fā)放→回收結果→數(shù)據(jù)統(tǒng)計、處理及中期報告編寫→補測及數(shù)據(jù)報送→最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理、技術分析→報告編制。

1.3 保密措施

為確保本次能力驗證工作嚴格的公平公正，結果真實可靠，協(xié)調組織單位分組（督察組和統(tǒng)計組）實施編號和統(tǒng)計工作。由督察組對參加本次能力驗證的單位進行編號，并對樣品進行編號、發(fā)放，編號原則由督察組統(tǒng)一管理。待能力驗證結果匯總至統(tǒng)計組后，從督察組拿到編號原則，統(tǒng)計組按照預定的統(tǒng)計方法進行計算。

1.4 能力驗證樣品設計及制備

安賽蜜在飲料生產(chǎn)企業(yè)廣泛應用，是國家和省級食品安全監(jiān)督抽檢的檢驗項目，樣品制備是能力驗證的關鍵環(huán)節(jié)。本次能力驗證活動的檢測樣品基質采用市售的同一批次飲料，檢測篩選不含安賽蜜的飲料作為空白樣品基質，添加目標物食品添加劑安賽蜜，并加入干擾物質阿斯巴甜和紐甜，添加一定量的防腐劑，采用逐級放大的方式經(jīng)振搖、攪拌混勻并均質制備成安賽蜜濃度為0.12～0.20 g/L的A、B、C 3組樣品（其中C為備用樣），每組樣品制備2 L，分裝后高溫高壓滅菌，防止微生物滋生；測試樣品采用雙樣發(fā)樣，每個實驗室獲得A+B樣品。

1.5 能力驗證樣品的包裝、標識、發(fā)放

量取制備好的樣品約30 mL分裝于玻璃瓶中，高溫高壓滅菌（115 ℃，30 min），對樣品進行唯一性標識，隨機編號SP-XXX，置于冷藏條件下保存，向報名的實驗室分發(fā)2個不同濃度的樣品，即A+B樣品組合。每家參加實驗室獨立編號，收到兩份各帶有唯一編號的供測試樣品。發(fā)放樣品時同時發(fā)放作業(yè)指導書、樣品接收狀態(tài)確認表和測試結果報告單。運輸過程按照樣品的保存條件儲存，對于個別因素引起的樣品丟失或損壞，盡快通知實施機構，重新領取樣品。

1.6 能力驗證檢測方法

本次能力驗證推薦參加的實驗室采用《飲料中乙?；前匪徕浀臏y定》（GB/T 5009.140—2003）進行測定。如果參加實驗室采用推薦方法以外的方法（如實驗室常用方法、非標方法或者其他標準方法），需在結果報告單中標明。

1.7 結果回收

檢測機構在作業(yè)指導書規(guī)定的時間內(nèi)完成檢測工作后填寫測試結果報告單，并在報送電子版的同時將測試結果報告單和原始記錄一同寄送項目實施單位，以便后續(xù)的技術分析。

1.8 能力驗證統(tǒng)計方法

將參加能力驗證實驗室的結果進行匯總，校對無誤后，按穩(wěn)健統(tǒng)計方法計算實驗室內(nèi)的Z值和實驗室間的Z值。Z比分數(shù)判定原則是|Z|≤2為滿意結果，2＜|Z|＜3為可疑結果（有問題），|Z|≥3為不滿意結果（離群值）。

2 結果與分析

2.1 均勻性測定

采用本次能力驗證推薦的方法GB/T 5009.140—2003中高效液相色譜法對樣品中安賽蜜含量進行測定，并采用單因素方差分析進行均勻性檢驗。從制備好的A、B、C 3個濃度水平樣品中隨機抽取10份樣品用于均勻性檢驗，每個樣品重復測定2次。在短時間內(nèi)由同一測試人員，使用《飲料中乙?；前匪徕浀臏y定》（GB/T 5009.140—2003）測試方法、相同測試條件對樣品進行安賽蜜的檢測。均勻性采用單因子方差統(tǒng)計分析，采用F檢驗查詢F檢驗臨界值表，只有當樣品中安賽蜜含量的F值小于F臨界值（F0.05(9,10)=3.02）時，表明制備樣品均勻。

由表1～表3可知，均勻性檢驗計算的F值＜F臨界值，表明在0.05顯著性水平時，樣品間不存在顯著性差異，樣品A、B、C中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┖渴蔷鶆虻摹?/p>

表1 樣品A中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┚鶆蛐詸z驗數(shù)據(jù)分析結果

表3 樣品C中乙酰磺胺酸鉀（安賽蜜）均勻性檢驗數(shù)據(jù)分析結果

2.2 穩(wěn)定性測定

本次能力驗證計劃在7～10月完成檢測，參加實驗室均在省內(nèi)。在此過程中，不同地方氣溫差異不大，本次能力驗證樣品采用領樣形式，1 d內(nèi)可到達各參加實驗室，樣品在傳遞過程中加冰袋運輸保存，穩(wěn)定性采用t檢驗對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，模擬樣品傳遞過程中的條件，在試驗期間抽取10個樣本，每個樣本重復測定2次，人機料法環(huán)與均勻性檢驗保持一致。穩(wěn)定性試驗持續(xù)時間為37 d，測定時間間隔按先密后疏的原則設計，共分為4個間隔。樣品分別于制樣后第1 d（9月4日）、第5 d（9月8日）、第10 d（9月13日）、第37 d（10月10日，補測發(fā)樣日）進行檢測。以均勻性試驗所得結果為參比數(shù)據(jù)，采用t檢驗方法進行穩(wěn)定性檢驗。當t值小于tα(n1+n2-2)時，表明兩個相鄰時間抽取的樣品中安賽蜜的含量無顯著性差異，即制備樣品穩(wěn)定。

表2 樣品B中乙酰磺胺酸鉀（安賽蜜）均勻性檢驗數(shù)據(jù)分析結果

由表4可知，計算所得的t值均＜t臨界值（t0.05(18)=2.101），表明在0.05顯著性水平時，樣品A、B、C中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┖渴欠€(wěn)定的。

表4 樣品中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┓€(wěn)定性檢驗數(shù)據(jù)分析結果

3 能力驗證結果統(tǒng)計

3.1 初測結果統(tǒng)計

本次能力驗證全省共有31家實驗室報名參加，其中質監(jiān)系統(tǒng)實驗室9家，食品藥品檢驗所實驗室9家，社會和企業(yè)實驗室13家。收到有效測試報告30份（1家逾期上報結果，不計入統(tǒng)計），對30家實驗室上報的結果依據(jù)《能力驗證結果的統(tǒng)計處理和能力評價指南》（CNAS—GL002：2018）進行統(tǒng)計分析，詳見表5。由表6可知，其中結果為滿意的實驗室有22家，占73.3%；結果為可疑的實驗室有1家；結果為離群的實驗室有7家。

表5 檢測結果穩(wěn)健統(tǒng)計值匯總表

表6 各實驗室能力驗證初測結果

3.2 統(tǒng)計圖表

為使參加者更直觀地了解本次能力驗證活動的結果，采用直方圖來表示有關的統(tǒng)計量。Z比分數(shù)序列直方圖按照Z比分數(shù)的大小順序顯示出每個實驗室的Z比分數(shù)，并標有實驗室唯一代碼，安賽蜜Z比分數(shù)序列直方圖參見圖1～圖2。由圖1可以看出，實驗室間結果可疑和不滿意的實驗室有SP-007、SP-009、SP-011和SP-017，主要反應這4家實驗室的結果存在系統(tǒng)誤差。由圖2可以看出，實驗室內(nèi)結果可疑和不滿意的實驗室有SP-003、SP-007、SP-009、SP-013、SP-017、SP-024和SP-030，說明這7家實驗室安賽蜜的分割樣品對結果間差值太大。

圖1 樣品A+B安賽蜜測定值ZB比分數(shù)序列直方圖

圖2 樣品A+B安賽蜜測定值ZW比分數(shù)序列直方圖

3.3 補測結果統(tǒng)計

對第一次檢驗結果不滿意或可疑的檢測機構在進行實驗室整改后給予一次補測機會。本次能力驗證共有9家實驗室參加了補測，收到補測測試報告9份，其中7家實驗室結果滿意，還有2家結果不滿意。

4 分析和建議

4.1 檢測方法的差異

參加本次能力驗證的31家實驗室均采用《飲料中乙酰磺胺酸鉀的測定》的國標方法進行測定，標準中只有高效液相色譜法一種檢測方法，故實驗室間檢測方法不存在差異。

4.2 檢測過程的質量控制

影響檢測結果準確性的因素有人員、設備、使用的試劑、環(huán)境條件和所采用的方法等。檢測過程中要嚴格控制實驗條件，保證使用的儀器處于良好的工作狀態(tài)，使用的標準溶液按照標準要求配制，特別是測試人員要具備相應的能力。對于飲料中的安賽蜜的測定過程，尤其應注意以下幾個問題。

（1）樣品提取。樣品若未完全溶解于提取溶劑，會導致結果偏低。

（2）樣品凈化。①固相萃取柱。不同批次中性氧化鋁固相萃取柱回收率存在差異。②樣液淋洗速度。樣液淋洗速度未控制恰當和保持一致，其中速度過快的，目標物沒有被完全吸附；洗脫速度太慢，則不能把目標物完全洗脫下來。③樣品收集。用流動相洗脫時，要準確收集洗脫液25 mL并混勻。

（3）樣品測定。①標準物質純度。在配制標準溶液時，應按照標準物質純度折算出標準溶液實際濃度。②標準曲線濃度。標準曲線濃度范圍要覆蓋試樣。③液相色譜儀儀器狀態(tài)不穩(wěn)定。紫外檢測器狀態(tài)不穩(wěn)定，或儀器流動相管路堵塞，導致流動相系統(tǒng)不穩(wěn)定，干擾了進樣。

（4）檢測人員。在譜圖處理過程中，若檢測人員對檢測結果計算有誤，則會直接導致最后結果產(chǎn)生偏差。

4.3 檢測報告原始記錄分析

通過對31家實驗室的原始記錄進行審核，發(fā)現(xiàn)存在以下問題：計算錯誤導致檢測結果錯誤；圖譜與原始記錄不相符；原始記錄和檢測報告單位不相符；未按標準要求取樣、檢測。

5 建議

陜西省產(chǎn)品質量監(jiān)督檢驗研究院開展的飲料中乙?；前匪徕洠ò操惷郏┑臏y定能力驗證制備了滿足均勻性和穩(wěn)定性要求的飲料樣品，制定了詳細的實施方案，編制了作業(yè)指導書，考核單位覆蓋食藥系統(tǒng)、質檢系統(tǒng)、出入境以及第三方檢驗檢測實驗室，對全省31家通過取得計量認證合格證書的食品檢測機構的乙?；前匪徕洠ò操惷郏z測能力進行考核，識別各實驗室間存在的差異，在一定程度上反應了陜西省檢驗檢測整體能力和水平。

考核結果不僅對驗檢測機構內(nèi)控的有效性進行了確認，同時對提升質量控制的能力和檢驗人員的檢測水平有所幫助，也可作為政府機構遴選監(jiān)督抽檢項目實施單位的依據(jù)。本次能力驗證滿意率為93.5%，這說明大部分實驗室對分析方法的掌握應用較好，少數(shù)實驗室出現(xiàn)離群或可疑結果，需要其自行整改。建議參加實驗室參照本報告給出的信息，根據(jù)相關標準和規(guī)范，結合自身實際，重點從儀器狀態(tài)（如儀器的使用、調試、維護和方法是否優(yōu)化符合要求等）、標準品（如標準品是否過期、標準品純度是否折算等）、人員操作（樣品的提取、數(shù)據(jù)處理等操作過程加強培訓）及結果計算等環(huán)節(jié)上查找原因，找出差距和問題所在，制定糾正措施，有效整改，使參加此次能力驗證達到真正目的。