蘭海，劉欣妍，郭子右，劉玉娟，李婷婷，李鑫，梅凱，吳清（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 102488）

化療所致周圍神經(jīng)病變（chemotherapy-induced peripheral neuropathy，CIPN）是化療藥物對周圍神經(jīng)或自主神經(jīng)損傷產(chǎn)生的一系列神經(jīng)功能紊亂的病變，以周圍神經(jīng)系統(tǒng)毒性最為常見，CIPN常見的臨床表現(xiàn)為四肢末端麻木、疼痛或感覺異常[1]。近年來，中醫(yī)藥在改善CIPN方面發(fā)揮了重要作用，具有多成分、多靶點的特點[2]，中醫(yī)臨床通過中藥泡洗、熏蒸、貼敷等外治手段治療CIPN，取得了一定效果[3-4]。

淫羊藿，性溫，味辛、甘，歸肝、腎經(jīng)，能夠補腎助陽，強筋骨，祛風(fēng)濕[5]?，F(xiàn)代研究表明，淫羊藿及其主要活性成分淫羊藿苷等可以改善周圍神經(jīng)損傷，促進周圍神經(jīng)再生[6-8]。試驗室前期研究表明，淫羊藿中的朝藿定與淫羊藿苷類成分對奧沙利鉑所致的周圍神經(jīng)損傷具有明顯的保護作用[9]，并且采用大孔吸附樹脂法，從淫羊藿中富集得到了對奧沙利鉑所致的周圍神經(jīng)損傷具有保護作用的朝藿定與淫羊藿苷部位[10]。

微乳是由水相、油相、表面活性劑和助表面活性劑組成的單一的光學(xué)各向同性和熱力學(xué)穩(wěn)定的分散體系[11]，具有促進藥物透皮吸收、提高藥物穩(wěn)定性、增加難溶性藥物溶解度等優(yōu)點[12-13]。皮膚神經(jīng)纖維的受損是CIPN的病理學(xué)關(guān)鍵[14-15]，因此，本研究擬制備包載淫羊藿富集部位的微乳，通過經(jīng)皮給藥，使藥物直接作用于皮膚中的神經(jīng)纖維，發(fā)揮神經(jīng)保護作用，為淫羊藿富集部位治療或預(yù)防CIPN的研究與開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料

UltiMate 3000型高效液相色譜儀（美國Thermo公司），BT125D型電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]，TK-20B型藥物透皮擴散試驗儀（上海鍇凱科技貿(mào)易有限公司），ZNCL-S-5D型多點智能磁力攪拌器（河南愛博特科技發(fā)展有限公司），DDS-11A型電導(dǎo)率儀（上海越平科學(xué)儀器有限公司），BZF50型真空干燥箱（上海Boxun公司），Zetasize Nano ZS納米粒徑儀（英國馬爾文公司）。

對照品朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷（批號分別為140147-77-9、110623-72-8、110623-73-9、110642-44-9、110642-44-9，純度均≥98%）和聚氧乙烯氫化蓖麻油（EL，Polyoxy 35 castor oil，批 號：Y19O7S23172）（上 海源葉生物科技有限公司），淫羊藿富集部位（自制[12]），油酸（OA）、肉豆蔻酸異丙酯（IPM）（上海麥克林生化科技有限公司，批號分別為C10005653、C10571215），棕櫚酸異丙酯（IPP，Alfa Aesar公司，批號：10173585），中鏈甘油三酸酯（Miglyol 812N）、聚氧乙烯氫化蓖麻油RH40（Cremophor RH40）（北京鳳禮精求商貿(mào)有限責任公司，批號分別為151111、2822716860），聚山梨酯80（Tween 80，Sigma-Aldrich公司，批號：WXBB1118V），司盤80（Span 80）、聚乙二醇400（PEG400）（天津市光復(fù)精細化工研究所，批號分別為20150417、20160604），辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯（Labrasol）、二乙二醇單乙基醚（Transcutol P）（批號分別為175459、159651，Gattefosse公司），丙二醇（PG，北京北化精細化學(xué)品有限責任公司，批號：20140821），磷酸鹽緩沖液（PBS，Biotopped公司），甲醇、乙腈（Sigma，色譜純），水（杭州娃哈哈集團有限公司）。

雄性SD大鼠，5周齡，體質(zhì)量160～180 g [斯貝福（北京）試驗動物科技有限公司，許可證號：SCXK（京）2016-0002]。

2 方法與結(jié)果

2.1 體外透皮試驗中指標成分含量測定方法

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 Merck LiChrospher100 RP-18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相乙腈（A）-水（B）（25∶75），柱溫30℃，流速1 mL·min-1，進樣量10 μL，檢測波長270 nm。此色譜條件下，朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷的分離度均＞1.5，理論塔板數(shù)均＞6000（見圖1）。

圖1 淫羊藿富集部位微乳的HPLC圖Fig 1 HPLC of microemulsion of epimedii folium enrichment fraction

2.1.2 溶液的配制 ① 混合對照品儲備液的制備：取朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，用甲醇配制質(zhì)量濃度分別為53.94、58.20、145.20、150.61、136.57 μg·mL-1的混合對照品儲備液；② 樣品接收液的制備：取淫羊藿富集部位微乳的透皮接收液，過0.22 μm微孔濾膜，搖勻，即得；③ 空白微乳溶液的制備：取空白微乳約50 mg，置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋制得；④ 空白接收液的制備：取空白皮膚的接收液，過0.22 μm微孔濾膜，搖勻，即得。

2.1.3 線性范圍考察 精密吸取“2.1.2”項下混合對照品儲備液適量，用甲醇稀釋至刻度，得一系列濃度的混合對照品溶液，進樣分析。以響應(yīng)值為縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程分別為Y朝藿定A1＝0.315X＋0.0038，r2＝0.9996；Y朝藿定A＝0.3029X＋0.0033，r2＝0.9995；Y朝藿定B＝0.3307X-0.0006，r2＝0.9995；Y朝藿定C＝0.2961X-0.0019，r2＝0.9995；Y淫羊藿苷＝0.4031X-0.0033，r2＝0.9991。線性范圍分別為0.11～5.39 μg·mL-1，0.12～5.82 μg·mL-1，0.29～14.52 μg·mL-1，0.30～15.06 μg·mL-1，0.27～13.66 μg·mL-1。

2.1.4 精密度與加樣回收率考察 配制低、中、高三個質(zhì)量濃度的混合對照品，即含朝藿定A1（0.27，1.08，5.39 μg·mL-1）、朝藿定A（0.29，1.16，5.82 μg·mL-1）、朝藿定B（0.73，2.90，14.52 μg·mL-1）、朝藿定C（0.75，3.01，15.06 μg·mL-1）及淫羊藿苷（0.68，2.73，13.66 μg·mL-1），連續(xù)進樣6次，計算日內(nèi)精密度；連續(xù)進樣3 d，計算日間精密度；平行稱取已知朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷含量的樣品6份，并加入約等于被測成分含量的對照品，制備供試品溶液，進樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果5種成分日內(nèi)及日間的RSD值均小于5%，加樣回收率均在95%～105%，表明方法精密度、加樣回收率良好。取體外透皮接收液（取大鼠腹部皮膚用Franz擴散池夾緊，角質(zhì)層朝向供給池，真皮層朝向接收池，供給池加入去離子水，接收池加入2% Transcutol P PBS溶液作為接收液，溫度設(shè)置為37℃，收集12 h后的接收液）配制成混合物溶液，質(zhì)量濃度分別為1.08、1.16、2.90、3.01、2.73 μg·mL-1，分別于0、6、12、24、36、48 h進樣測定，結(jié)果朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷的RSD值均小于5%，表明5種成分在48 h內(nèi)穩(wěn)定，皮膚滲出物對5種成分含量測定無影響。

2.2 飽和溶解度法篩選油相、表面活性劑及助表面活性劑

按文獻[10]方法制備淫羊藿富集部位，富集部位中朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷含量分別為1.63%、2.52%、16.36%、5.51%、14.46%。淫羊藿富集部位的飽和溶解度不易測定，因此，以淫羊藿富集部位主要成分朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷為指標，通過測定淫羊藿富集部位在不同溶劑中溶解達飽和時這5種成分的溶解量篩選輔料。分別加入過量的淫羊藿富集部位于1 mL無水乙醇、Transcutol P、PG、PEG 400、Labrasol、Tween 80、Span 80、Cremophor RH40、Polyoxy 35 castor oil、OA、IPP、IPM和Miglyol 812 N中，渦旋5 min，超聲10 min，32℃恒溫水浴振蕩器中平衡48 h，整個過程始終保持有固體藥物存在。平衡后的樣品以10 000 r·min-1離心10 min，上清液經(jīng)甲醇適當稀釋，過0.45 μm微孔濾膜，按“2.1.1”項下色譜條件進樣測定，結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，淫羊藿富集部位及其主要成分在助表面活性劑Transcutol P和表面活性劑Labrasol中溶解量較大，但幾乎不溶于油相。因此，本課題選擇Labrasol為表面活性劑，Transcutol P為助表面活性劑，進一步篩選油相。

表1 淫羊藿富集部位在不同溶劑中飽和溶解時5種成分的溶解量(n＝3) Tab 1 Solubility of 5 components of epimedii folium enrichment fraction during saturated dissolution in different solvents (n＝3)

2.3 油相的進一步篩選

微乳區(qū)域面積越大，形成的微乳越穩(wěn)定。因此，采用室溫下水滴定法繪制偽三元相圖，考察油相（IPM、IPP、OA、Miglyol 812 N）對微乳區(qū)域的影響。固定表面活性劑和助表面活性劑的質(zhì)量比Km＝2，其與油相按質(zhì)量比9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9混合，總質(zhì)量為3 g，置于磁力攪拌器，同時逐滴加入蒸餾水，記錄當體系突然由渾濁變?yōu)槌吻?、透明或由澄清、透明變渾濁時的臨界水質(zhì)量，并計算體系中各成分的質(zhì)量百分比繪制偽三元相圖，結(jié)果見圖2。油相為OA時形成的微乳區(qū)域最大，因此固定油相為OA。

圖2 淫羊藿富集部位微乳不同油相的偽三元相圖Fig 2 Pseudo-ternary phase diagram of microemulsion of epimedii folium enrichment fraction with different oil phases

2.4 Km值的確定

以O(shè)A為油相，Labrasol為表面活性劑，Transcutol P為助表面活性劑，改變表面活性劑和助表面活性劑的比值，使Km＝1、2、3，并按照“2.3”項下方法繪制偽三元相圖，考察不同的Km值對微乳區(qū)域的影響。結(jié)果見圖3，當Km＝2時形成微乳區(qū)域最大，故確定Km＝2。

圖3 淫羊藿富集部位微乳不同Km值的偽三元相圖Fig 3 Pseudo-ternary phase diagrams of microemulsion of epimedii folium enrichment fraction with different Km values

2.5 微乳類型與區(qū)域的確定

2.5.1 不同類型微乳體外透皮及滯留研究 微乳可分為水包油（O/W）、雙連續(xù)（Bi-continuous）、油包水（W/O）3種類型，微乳的類型與藥物的皮膚滲透效果有關(guān)。因此，探究不同微乳類型對目標成分的皮膚滲透和滯留效果的影響，進一步優(yōu)選微乳類型。綜合上述考察，選擇以O(shè)A為油相、Labrasol為表面活性劑、Transcutol P為助表面活性劑、且Km＝2，油相與混合表面活性的質(zhì)量比為1∶9制備微乳，采用透皮擴散試驗儀進行體外透皮及滯留試驗。除去毛發(fā)及皮下組織的雄性SD大鼠腹部皮膚固定于接收室與擴散室之間，擴散室分別給予2 mL載藥量為3%的不同含水量微乳或淫羊藿富集部位藥物溶液（PG為溶劑），接收室以含2% Transcutol P的PBS溶液為接收液，水浴溫度為（37±0.1）℃，磁力攪拌轉(zhuǎn)速為200 r·min-1。24 h后移取接收液1 mL，過0.22 μm微孔濾膜后采用高效液相色譜儀測定。

體外透皮試驗結(jié)束后，用PBS洗凈皮膚上的殘留制劑，用顯微鑷小心分離表皮層和真皮層。將表皮層和真皮層分別剪成小塊，加入70%乙醇于組織研磨器中研磨，研磨液超聲1 h，4000 r·min-1離心20 min，上清液過0.22 μm微孔濾膜后采用高效液相色譜儀測定。

單位面積24 h累積透過量和皮膚中藥物滯留量分別按下式進行計算：

式中，Q24為單位面積24 h累積透過量（μg·cm-2），Qs為皮膚中藥物滯留量（μg·cm-2），C24為24 h時接收液藥物濃度，Cs為皮膚研磨液中藥物濃度，VR為接收室體積（8 mL），Vs為研磨液體積，A為擴散池有效擴散面積（3.14 cm2）。不同含水量微乳的處方組成及微乳類型見表2。微乳及藥物溶液的Q24見圖4。結(jié)果顯示，對于朝藿定及淫羊藿苷5種成分，不同類型微乳的24 h累積透過量均隨微乳的含水量增加而增大，說明微乳類型影響5種成分的皮膚滲透效果，并且不同類型微乳的透過量均大于藥物溶液，其中O/W型微乳ME 80/20中5種成分的Q24最大。

表2 不同類型淫羊藿富集部位微乳的處方組成 Tab 2 Formulation composition of microemulsion of epimedii folium enrichment fraction with different types

微乳及藥物溶液的單位面積24 h累積表皮滯留量及累積真皮滯留量分別見圖4B及圖4C。不同類型微乳中5種成分的表皮滯留量接近且無統(tǒng)計學(xué)差異，但均大于藥物溶液的表皮滯留量，說明不同類型微乳制劑均能促進5種成分在表皮中的滯留，但微乳類型對5種成分的表皮滯留影響不大。不同類型微乳中5種成分的真皮滯留量均大于藥物溶液，說明不同類型微乳均能促進5種成分的真皮滯留。綜合不同類型微乳對5種成分的皮膚滲透、表皮滯留及真皮滯留促進效果可知，O/W型微乳促進5種成分的皮膚滲透及真皮滯留效果最好，所以確定微乳類型為O/W型。

圖4 不同類型淫羊藿富集部位微乳5種成分的單位面積24 h累積透過量（A）、累積表皮滯留量（B）、累積真皮滯留量（C）（n＝3）Fig 4 24-hour accumulative permeation（A），accumulative epidermal retention（B）and dermal retention（C）of 5 components of microemulsion of different types epimedii folium enrichment fraction with （n＝3）

2.5.2O/W微乳區(qū)域的確定 電導(dǎo)率對微乳類型及相行為的轉(zhuǎn)變敏感，通過測定電導(dǎo)率，建立電導(dǎo)率-含水量曲線來確定微乳類型[16]。建立油相與混合表面活性劑不同質(zhì)量比時的電導(dǎo)率-含水量曲線，確定形成O/W型微乳的臨界值及其區(qū)域。結(jié)果顯示，當油相與混合表面活性的質(zhì)量比為2∶8時不能形成O/W型微乳；當油相與混合表面活性的質(zhì)量比為1∶7、1∶8、1∶9時形成O/W型微乳的臨界含水量分別為71.32%、75.20%、78.21%，其電導(dǎo)率-含水量曲線見圖5；參照偽三元相圖得到O/W型微乳區(qū)域（見圖6），確定3種組分的取值范圍為：混合表面活性劑為18%～25%，油相為2%～4%，水相為71%～80%。

圖5 沺相與混合表面活性劑質(zhì)量比對淫羊藿富集部位微乳電導(dǎo)率-含水量曲線的影響Fig 5 Effect of the mass ratio of oil phase to mixed surfactant on the conductivity-water content curve of microemulsion of epimedii folium enrichment fraction

圖6 O/W型淫羊藿富集部位微乳的區(qū)域Fig 6 Region of O/W microemulsion of epimedii folium enrichment fraction

2.6 D-最優(yōu)混料設(shè)計優(yōu)選微乳處方

2.6.1 D-最優(yōu)混料設(shè)計 根據(jù)“2.5.2”項下確定的水相（A）、混合表面活性劑（B）、油相（C）組分取值范圍，以微乳的粒徑及PDI為評價指標，固定載藥量為3%，采用D-最優(yōu)混料設(shè)計，進一步優(yōu)化微乳處方，試驗設(shè)計及測定結(jié)果見表3。

表3 D-最優(yōu)混料試驗設(shè)計及結(jié)果 Tab 3 D-optimal mixture test design and results

2.6.2 數(shù)據(jù)模型擬合及響應(yīng)面分析 運用Design Expert 11.1軟件，以水相（A）、混合表面活性劑（B）、油相（C）為影響因素，分別以粒徑（Y1）和PDI（Y2）為評價指標，對試驗結(jié)果進行模型擬合，擬合結(jié)果顯示粒徑（Y1）和PDI（Y2）分別符合特殊四次模型（Special Quartic model）和二次模型（Quadratic model），其擬合方程分別為：Y1＝133.27A＋191.20B＋20699.26C-560.53AB-23 012.45AC-26 933.38BC＋16 595.83A2BC＋31 265.11AB2C-100 000ABC2，R2＝0.9996，P＜0.0001，失擬值P＝0.1589；Y2＝0.2204A＋0.3085B-11.72C＋0.0315AB＋15.53AC＋15.30BC，R2＝0.7487，P＝0.0083，失擬值P＝0.069，說明模型擬合良好。根據(jù)回歸分析結(jié)果，繪制粒徑及PDI的自變量與響應(yīng)值關(guān)系的二維等高線和三維響應(yīng)圖（見圖7），結(jié)果顯示混合表面活性劑含量越高，油相含量越低，微乳的粒徑越?。涣椒植几鶆颍碢DI?。┑膬蓚€區(qū)域分別是水相含量較高、油相含量較低的區(qū)域和水相含量較低、油相含量較高的區(qū)域。PDI隨著油相含量的增加呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢，提示粒徑的均勻分布主要取決于水相和油相的合理配比。

圖7 淫羊藿富集部位微乳的粒徑及PDI三維響應(yīng)面及二維等高線圖Fig 7 Three-dimensional response surface and two-dimensional contour map of particle size and PDI of microemulsion of epimedii folium enrichment fraction

2.6.3 最優(yōu)處方及驗證 以最小粒徑及最小PDI為優(yōu)化指標，預(yù)測最佳處方為水（77.35%）、表面活性劑Labrasol（13.77%）、助表面活性劑Transcutol P（6.88%）、OA（2%），所得微乳粒徑為33.85 nm、PDI為0.253。按照優(yōu)化處方進行驗證，重復(fù)3次，結(jié)果實際粒徑為（34.93±0.76）nm，PDI為（0.254±0.023），預(yù)測值與實際值偏差分別為3.19%、0.40%，均小于5%，說明方程預(yù)測準確性良好。

2.7 微乳載藥量考察

2.7.1 不同載藥量微乳的粒徑及PDI檢測 預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)，當載藥量達到13%（w/w）時微乳不能完全溶解淫羊藿富集部位，故選擇載藥量為1%、3%、5%、7%、9%、11%、12%的微乳進一步考察。取未經(jīng)稀釋的不同載藥量微乳檢測粒徑及PDI，結(jié)果表明，載藥量為1%、3%、5%的微乳粒徑分別為（48.22±0.36）、（34.41±1.53）、（34.06±0.94）nm，PDI分別為（0.241±0.002）、（0.243±0.029）、（0.364±0.021）。當載藥量≥5%時，PDI大于0.3，表明載藥量≥5%的微乳放置后可能出現(xiàn)不穩(wěn)定、粒徑增大的現(xiàn)象。因此，選擇1%、3%、5%的載藥量進行進一步考察。

2.7.2 長期穩(wěn)定性研究 將載藥量為1%、3%和5%的微乳室溫放置，分別在制備后的第0、1、3個月測定其粒徑及PDI。第3個月，載藥量為1%的微乳粒徑和PDI分別為（58.91±0.83）nm、（0.232±0.008），載藥量為3%的微乳粒徑和PDI分別為（41.13±0.33）nm、（0.278±0.003），載藥量為5%的微乳粒徑和PDI分別為（44.07±0.20）nm、（0.412±0.004）。PDI在載藥量為1%和3%時無明顯變化且小于0.3，表明粒徑分布均勻；但載藥量為5%時，PDI明顯增大，說明當微乳載藥量為5%時，長時間室溫放置不穩(wěn)定。因此，最終確定淫羊藿富集部位微乳載藥量為3%。

2.8 質(zhì)量評價

2.8.1 體外透皮試驗 最優(yōu)處方制備的淫羊藿富集部位微乳及游離藥物溶液的體外透皮試驗操作同“2.5.1”項，于2、4、6、8、10、20、22和24 h移取接收液0.4 mL，同時補加等溫等體積的新鮮接收液，樣品經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾，進入液相檢測，計算藥物穩(wěn)態(tài)透皮速率、累積透過量及滯后時間。

單位面積藥物的累積透過量按下式計算：

其中，Q（μg·cm-2）為單位面積累積透過量，V為擴散池的體積（8 mL），Vi為每次取樣體積，Cn和Ci分別為第n次和第i次取樣時接收液中藥物濃度，A為擴散面積（3.14 cm2）。以累積透過量對時間作圖，所得直線部分的斜率即為穩(wěn)態(tài)透皮速率（Jss，μg·cm-2·h-1），直線部分的反向延長線與X軸的交點即為滯后時間（Tlag，h）。

微乳的藥物促透比（enhancement ratio，ER）按下式公式計算：

淫羊藿富集部位微乳和藥物溶液中淫羊藿富集部位主要成分朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷的滲透動力學(xué)曲線和透皮參數(shù)分別見圖8及表4。由結(jié)果可知，在不同時間點，微乳中朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷的皮膚滲透量均大于藥物溶液，促透比分別為3.589、8.975、11.094、14.558、9.063，說明將淫羊藿富集部位包載于微乳中能促進其皮膚滲透。

表4 淫羊藿富集部位微乳及藥物溶液中5種成分的體外透皮參數(shù)(n＝3) Tab 4 Transdermal parameters in vitro of 5 components in the microemulsion and drug solution (n＝3)

圖8 淫羊藿富集部位微乳及藥物溶液中5種成分的體外滲透動力學(xué)曲線（n＝3）Fig 8 Osmotic kinetics curve in vitro of 5 components in the microemulsion and drug solution（n＝3）

2.8.2 體外皮膚滯留試驗 體外透皮試驗結(jié)束后，PBS洗凈皮膚上的殘留制劑，將皮膚剪成小塊，進行組織研磨后進樣測定，計算單位面積藥物的皮膚滯留量。淫羊藿富集部位微乳及藥物溶液中5種成分的24 h皮膚滯留量見圖9，微乳中5種成分的累積滯留量均顯著高于藥物溶液，說明將淫羊藿富集部位包載于微乳中能提高藥物滯留在皮膚中的量，并且5種成分的累積滯留量的大小與淫羊藿富集部位中初始含量有關(guān)，含量越大，滯留量越大。

圖9 淫羊藿富集部位微乳及藥物溶液中5種成分的24 h皮膚滯留量（n＝3）Fig 9 24-hour skin retention of 5 components in microemulsion and drug solution（n＝3）

3 討論

皮膚是人體最大的器官，含有豐富的神經(jīng)纖維，包括表皮神經(jīng)末梢、真皮層的神經(jīng)叢和存在于汗腺、毛囊中的神經(jīng)等[17]。CIPN中，遠端軸突最先受損，使得四肢末端麻木疼痛癥狀以“襪子和手套”型分布發(fā)展，并且表皮神經(jīng)纖維的丟失與疼痛行為直接相關(guān)，這是CIPN的病理學(xué)關(guān)鍵[14-15]。將藥物包載于微乳中可以顯著增加藥物的皮膚滯留量，藥物滯留在皮膚中可以作為儲庫，持續(xù)的向皮膚深層提供藥物，使藥物直接作用于皮膚神經(jīng)纖維、遠端軸突，發(fā)揮神經(jīng)保護作用，促進受損神經(jīng)再生，有利于治療CIPN并預(yù)防其發(fā)展。中醫(yī)臨床常使用中藥泡洗、熏蒸、貼敷等外治手段治療CIPN，但傳統(tǒng)治療手段存在使用不方便、療效不穩(wěn)定等問題，本研究制備的淫羊藿富集部位微乳具有使用方便、有效成分明確的特點，對治療CIPN和提高化療患者的生存質(zhì)量具有十分重要的意義。

淫羊藿中含有黃酮類、木脂素類、多糖、生物堿類、苯酚苷、揮發(fā)油、微量元素等成分，其中黃酮類是主要藥效成分，研究表明黃酮類成分具有提高性功能、抗骨質(zhì)疏松、保護神經(jīng)系統(tǒng)、預(yù)防心血管疾病等作用[18]。文獻報道淫羊藿是中醫(yī)治療周圍神經(jīng)損傷的臨床常用藥[19]，且淫羊藿中發(fā)揮神經(jīng)保護作用的主要活性成分主要是朝藿定與淫羊藿苷等黃酮類成分[6-8]。此外，2020年版《中國藥典》將朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷作為淫羊藿飲片的質(zhì)量控制指標成分。因此本文選擇朝藿定A1、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及淫羊藿苷5種成分作為透皮試驗的評價指標。

微乳的類型影響藥物的皮膚滲透及滯留效果，研究表明微乳的透皮和滯留量隨微乳含水量的增加而增加[20-21]，促進效果強弱為：O/W＞Bicontinuous＞W(wǎng)/O，O/W型微乳透皮和皮膚滯留效果較好，可能是由于含水量的增加加強了皮膚的水合作用，降低了角質(zhì)層的屏障作用，使藥物更易透過皮膚。目前，未見研究報道微乳類型對中藥復(fù)雜多成分的皮膚滲透及滯留的影響，本研究比較了不同類型微乳對淫羊藿富集部位5種成分的經(jīng)皮促透和皮膚滯留影響，可為包載中藥多成分的微乳類型的選擇提供一定指導(dǎo)。然而在本研究中，5種成分在不同類型的微乳中均表現(xiàn)出相似的滲透和滯留特性，可能是由于5種成分的油水分配系數(shù)（logP值）相似，因此，需要進一步研究不同類型微乳對logP值差異較大的多種成分經(jīng)皮促透和皮膚滯留的影響，這將對包載中藥復(fù)雜成分的微乳類型的選擇提供更科學(xué)的指導(dǎo)。

微乳類型的判斷依據(jù)于微乳在相轉(zhuǎn)變過程中的理化性質(zhì)變化[22]，判斷微乳類型的常用方法有電導(dǎo)率法、差式掃描量熱法、小角X衍射法、核磁共振法等。電導(dǎo)率法的優(yōu)勢在于微乳電導(dǎo)的變化與其類型變化關(guān)系理論明確、操作簡單、結(jié)果精確[23-24]。本研究通過建立電導(dǎo)率-含水量曲線圖更準確、清晰地判斷了微乳類型變化的臨界點。