李俊,郭旭利,郭曉紅（廣東省惠州市中心人民醫(yī)院,廣東 惠州 516008）

結(jié)腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率及死亡率逐年上升，據(jù)2018年全球癌癥數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，其發(fā)病率位于第四，死亡率位于第三[1]。大量研究表明[2]，結(jié)腸癌的預(yù)后與腫瘤大小、分期、分化程度有一定關(guān)系。近期一些研究表明[3]，WNT通路的失調(diào)與惡性腫瘤的發(fā)生有一定關(guān)系，Dvl家族蛋白是WNT通路的重要成員，在肺癌、乳腺癌、前列腺癌、腦膠質(zhì)瘤等腫瘤中異常表達(dá)。但Dvl-3與結(jié)腸癌的關(guān)系國內(nèi)目前尚無相關(guān)報(bào)道，本研究的目的是探討Dvl-3的表達(dá)在癌組織及癌旁組織中是否存在差異，并探討Dvl-3表達(dá)水平與結(jié)腸癌生物學(xué)行為的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對象和方法

1.1 研究對象 收集2019年1月-2019年12月期間在我院手術(shù)切除的結(jié)腸癌組織標(biāo)本及癌旁正常組織標(biāo)本，90份結(jié)腸癌組織標(biāo)本作為觀察組，76份癌旁正常組織標(biāo)本作為對照組。標(biāo)本對象年齡在35-70歲，男性58例，女性32例。納入標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)本所系患者均經(jīng)病理診斷為結(jié)腸癌[參考中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2020年版)][4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①標(biāo)本對象術(shù)前已接受化療、放療、生物靶向治療等治療措施；②臨床資料不完整或可信度不高。

1.2 檢查方法 ①Dvl-3水平檢測：手術(shù)切除的新鮮標(biāo)本置于-80℃冰箱保存。分別運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測結(jié)腸癌組織及癌旁組織Dvl-3 mRNA水平，然后采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測結(jié)腸癌組織及癌旁組織Dvl-3水平。②血CEA水平檢測：采集實(shí)驗(yàn)對象空腹靜脈血3mL，送至檢驗(yàn)科離心取得血清備用，使用羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀（型號(hào)：cobas? e411）檢測樣本血CEA水平。

1.3 評價(jià)方法 根據(jù)上述指標(biāo)檢測結(jié)果，比較兩組標(biāo)本Dvl-3表達(dá)水平的差異性，并分析Dvl-3的表達(dá)水平與腫瘤大小、分期、分化程度、性別、年齡、血CEA的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)分析。計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)用百分比表示，采用卡方檢驗(yàn)分析，相關(guān)分析采用Pearson法，當(dāng)P＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本中Dvl-3表達(dá)水平比較 對照組標(biāo)本中，Dvl-3多數(shù)呈現(xiàn)陰性或弱陽性表達(dá)，無強(qiáng)陽性表達(dá)；而觀察組標(biāo)本中Dvl-3表達(dá)陽性率遠(yuǎn)高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組標(biāo)本中Dvl-3的表達(dá)水平[n(%)]

2.2 Dvl-3的表達(dá)水平與臨床病理資料的關(guān)系 Dvl-3表達(dá)水平在直徑較大組、未分化和低分化組、Ⅲ與Ⅳ分期組、CEA水平較高組陽性率明顯高于直徑較小組、腫瘤中度以上分化組、Ⅰ與Ⅱ分期組、CEA水平較低組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 Dvl-3在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)水平與臨床病理資料的關(guān)系[n(%)]

2.3 Dvl-3表達(dá)水平與腫瘤大小、腫瘤分期、腫瘤分化程度及血CEA的相關(guān)性分析 Dvl-3表達(dá)水平與腫瘤大小、腫瘤分期、腫瘤分化程度及血CEA水平呈正相關(guān)（r：0.502；0.433；0.479；0.517，P＜0.001），見表3。

表3 Dvl-3表達(dá)水平與腫瘤大小、腫瘤分期、腫瘤分化程度及血CEA的相關(guān)性分析

3 討論

結(jié)腸癌是發(fā)生于結(jié)腸部位較常見的消化道惡性腫瘤，好發(fā)于41-51歲年齡段[5]。隨著社會(huì)的發(fā)展，人類飲食生活習(xí)慣的改變，導(dǎo)致胃腸道腫瘤發(fā)病率攀升。相關(guān)統(tǒng)計(jì)表明[6]，結(jié)腸癌的發(fā)病率僅次于胃癌和食管癌，位列胃腸道腫瘤發(fā)病率第三，發(fā)病率亦呈上升趨勢。結(jié)腸癌由于起病隱匿，早期癥狀不典型，缺乏特異性，患者在就診時(shí)多為中晚期，預(yù)后較差，病死率高。為提高結(jié)腸癌患者生存率，改善預(yù)后，早期發(fā)現(xiàn)和明確診斷具有重要臨床價(jià)值[7]。近年來大量研究表明[2,8-10]，結(jié)腸癌的預(yù)后與腫瘤大小、分期、分化程度有一定關(guān)系。目前國內(nèi)外研究均提示[11]，Wnt通路轉(zhuǎn)錄調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、腫瘤發(fā)生的基因，Wnt通路的過度激活常容易誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生，而Dvl家族蛋白是Wnt通路的重要成員，對腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著重要的研究價(jià)值。

Dishevelled是機(jī)體組織細(xì)胞中廣泛存在的胞漿蛋白，有Dvl-1、Dvl-2和Dvl-3 三個(gè)成員，是Wnt途徑正調(diào)控因子，其N端的DIX域，可結(jié)合Axin，中央?yún)^(qū)的PDZ域，為蛋白-蛋白相互作用的位點(diǎn)，可結(jié)合多種蛋白質(zhì)，而其C端DEP域則具有調(diào)節(jié)細(xì)胞的極性及移動(dòng)的作用[12]。Dvl可被DIX、PDZ、DEP三個(gè)結(jié)構(gòu)域激活，進(jìn)而參與調(diào)節(jié)多個(gè)信號(hào)通路激活過程，是Wnt通路中重要的蛋白，而Wnt通路中各種蛋白最終匯集到β-catenin上，當(dāng)Wnt信號(hào)通路關(guān)閉時(shí)，其會(huì)與其他的蛋白形成一種復(fù)合體后降解，Wnt信號(hào)通路被激活后，使GSK-3β失去活性，進(jìn)而抑制β-catenin的磷酸化，使胞漿內(nèi)β-catenin含量升高，并與胞質(zhì)內(nèi)的TCF/LEF形成免疫復(fù)合物，激活其他的細(xì)胞周期基因，導(dǎo)致細(xì)胞周期發(fā)生異常，最終發(fā)展為惡性腫瘤[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，觀察組標(biāo)本中Dvl-3表達(dá)陽性率遠(yuǎn)高于對照組，與上述結(jié)論一致。本研究結(jié)果顯示，Dvl-3表達(dá)水平在直徑較大組、未分化和低分化組、Ⅲ與Ⅳ分期組陽性率明顯高于直徑較小組、腫瘤中度以上分化組、Ⅰ與Ⅱ分期組；經(jīng)Pearson相關(guān)性分析得出，Dvl-3表達(dá)水平與腫瘤大小、腫瘤分期、腫瘤分化程度呈正相關(guān)。提示Dvl-3陽性表達(dá)在低分化、腫瘤較大、中晚期的結(jié)腸癌顯著高于在中高分化、腫瘤較小、早期的結(jié)腸癌，可見Dvl-3通過某一機(jī)制影響著腫瘤的增殖、侵襲、遷移，由于其與其他信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路存在交叉，具體通過哪一條信號(hào)通路影響著腫瘤細(xì)胞的發(fā)展，還有待進(jìn)一步研究確認(rèn)。張心怡[14]等研究顯示，Dvl蛋白在食管鱗癌組織中存在過度表達(dá)，Dvl蛋白陽性表達(dá)在低分化、中晚期的結(jié)腸癌顯著高于在中高分化、早期的結(jié)腸癌；Dvl蛋白通過Wnt/B-catenin信號(hào)通路，參與調(diào)節(jié)癌細(xì)胞的增長、遷移和凋亡等過程。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相似。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Dvl-3表達(dá)水平在不同血CEA水平分組中，CEA水平較高組陽性率高于CEA水平較低組，經(jīng)Pearson相關(guān)性分析得出，Dvl-3表達(dá)水平與血CEA水平呈正相關(guān)。CEA是常見的且較早發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物，對于消化道腫瘤具有很好的診斷價(jià)值，但特異性表現(xiàn)欠佳。在結(jié)腸癌患者中，血CEA水平會(huì)明顯升高[15]，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Dvl-3表達(dá)水平與血CEA水平呈正相關(guān)，說明血CEA和Dvl-3表達(dá)水平在提示結(jié)腸癌信息中起協(xié)同作用，可聯(lián)合檢測輔助診斷結(jié)腸癌。

綜上所述，Dvl-3在結(jié)腸癌組織中呈現(xiàn)高度表達(dá)，且Dvl-3陽性表達(dá)在低分化、腫瘤較大、中晚期的結(jié)腸癌顯著高于在中高分化、腫瘤較小、早期的結(jié)腸癌，表明Dvl-3表達(dá)水平可能與結(jié)腸癌的發(fā)生，腫瘤的增殖、侵襲、遷移密切相關(guān)，可聯(lián)合血CEA輔助早期診斷結(jié)腸癌，并可嘗試將其作為評估結(jié)腸癌預(yù)后的指標(biāo)，但是有效性有待臨床進(jìn)一步驗(yàn)證。