金鳳華

（合肥市食品藥品檢驗中心，合肥 238000）

薄荷腦是唇形科植物薄荷的主要有效成分，為無色針狀/棱柱狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末，具有疏風解毒、清涼止癢、促透作用、抑制腫瘤細胞增殖的功效[1-13]。《中國藥典》2020 年版第1 部采用了氣相色譜法測量薄荷腦原料藥的含量[14]。

準確測量薄荷腦原料藥的含量是藥品質(zhì)量控制的關鍵，而不確定度的評定是評價實驗測量結(jié)果可信度的有效方法，但目前氣相色譜法測定薄荷腦含量的不確定度評定未見報道。為提高氣相色譜法測定薄荷腦原料藥中主成分含量的準確度，根據(jù)JJF 1059.1—2012《測量不確定度評定與表示》[15]、《中國藥典》2020 年版第1 部，參考不確定度評價相關文獻，筆者對氣相色譜法測定薄荷腦原料藥主成分含量進行不確定度評定[16-17]，逐一分析實驗過程中的各種影響因素，該方法為評價檢驗報告質(zhì)量提供科學的依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent7890B 型，美國安捷倫科技有限公司。

電子分析天平：Mettler-Toledo XP205型，感量為0.01 mg，瑞士梅特勒公司。

無水乙醇：分析純，國藥集團化學試劑有限公司。

薄荷腦對照品：純度（質(zhì)量分數(shù)）為99.8%，編號為110728-201707，中國食品藥品檢定研究院。

薄荷腦原料藥樣品：標示含量（質(zhì)量分數(shù)）為100%，批號為AY210413（1），安徽豐樂香料有限責任公司。

1.2 溶液制備

薄荷腦對照品溶液：1 mg/mL，精密稱取薄荷腦對照品適量，精密稱定，加無水乙醇溶解并稀釋、定容，搖勻，過濾。

薄荷腦原料藥樣品溶液：1 mg/mL，取薄荷腦原料藥樣品約10 mg，精密稱定，置于10 mL 容量瓶中，加入無水乙醇溶解并稀釋至標線，搖勻。

1.3 色譜條件

色譜柱：DB-WAX 毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm，美國安捷倫科技有限公司）；柱溫：30 ℃；檢測器：FID 檢測器；檢測器溫度：250 ℃；氮氣流量：25 mL/min；氫氣流量：30 mL/min；空氣流量：350 mL/min。

1.4 數(shù)學模型

薄荷腦原料藥中薄荷腦含量按照公式(1)、公式(2)計算：

式中：X——薄荷腦原料藥中薄荷腦的含量（質(zhì)量分數(shù)），%；

fx——薄荷腦原料藥樣品稀釋倍數(shù)；

m——薄荷腦原料藥樣品質(zhì)量，g；

F——響應因子；

fs——薄荷腦對照品稀釋倍數(shù)；

ms——薄荷腦對照品質(zhì)量，g；

P——薄荷腦對照品純度（質(zhì)量分數(shù)），%。

2 不確定度分量及其來源

參考《測量不確定度評定與表示》和《中國藥典》2020 年版第1 部，按照薄荷腦含量與輸入量的函數(shù)關系式，確定薄荷腦含量的不確定度來源：

（1）A 類不確定度：測量重復性引入的不確定度u(X1)。

（2）B 類不確定度：天平稱量（包括樣品稱量和對照品稱量）引入的不確定度u(m)、稀釋定容（包括樣品稀釋定容和對照品稀釋定容）引入的不確定度u(V)及儀器進樣引入的不確定度u(X2)。

3 不確定度分量的評定

3.1 重復測量引入的相對標準不確定度urel(X1)

平行稱取10 份薄荷腦原料藥樣品，在1.3 色譜條件下進行測定，重復性試驗結(jié)果見表1。

表1 重復性試驗結(jié)果 %

由表1 試驗數(shù)據(jù)計算重復性測量引入的標準不確定度：

重復性測量引入的相對標準不確定度：

3.2 樣品稱量引入的相對標準不確定度urel(M)

平行稱取10 份薄荷腦原料藥樣品，稱量結(jié)果列入表2。

表2 薄荷腦原料藥樣品稱量質(zhì)量 mg

3.2.1 稱量重復性引入的標準不確定度u1(m)

由儀器檢定證書可知，天平稱量重復性的標準偏差s為0.1 mg，按均勻分布考慮，k= 3，則天平稱量重復性引入的標準不確定度：

3.2.2 天平稱量的準確性引入的不確定度u2(m)

由儀器檢定證書可知，天平稱量允許的最大誤差為±0.2 mg，樣品需稱取10 次，按均勻分布考慮，k=，則天平稱量的準確性引入的不確定度：

3.2.3 環(huán)境溫度、濕度引入的標準不確定度

環(huán)境溫度、濕度對稱量結(jié)果的影響很小，可以忽略不計。稱取10.07 mg樣品引入的標準不確定度：

稱取10.07 mg 樣品引入相對標準不確定度：

3.3 薄荷腦對照品稱量引入的相對標準不確定度urel(ms)

平行稱取薄荷腦對照品兩份，對照品稱量結(jié)果見表3。

表3 對照品稱量質(zhì)量 mg

3.3.1 天平稱量重復性引入的標準不確定度u1(ms)

由天平檢定證書可知，天平稱量重復性的標準偏差為±0.1 mg，按均勻分布考慮，k=，則天平稱量的重復性引入的不確定度：

3.3.2 天平稱量準確性引入的標準不確定度u2(ms)

由天平檢定證書可知，天平稱量允許的最大誤差為±0.2 mg，對照品稱取2 次，按均勻分布考慮，k=，則天平稱量的準確性引入的不確定度：

3.3.3 環(huán)境溫度、濕度引入的標準不確定度

環(huán)境溫度、濕度對稱量結(jié)果的影響很小，可以忽略不計。綜上所述，稱取10.02 mg 薄荷腦對照品的標準不確定度：

稱量引入的相對標準不確定度：

綜上所述，天平稱量引起的相對標準不確定度：

3.4 樣品溶液配制體積引入的相對標準不確定度urel(Vx10)

3.4.1 容量瓶容量偏差引入的相對標準不確定度urel，1(Vx10)

根據(jù)檢定證書，10 mL A 級容量瓶的容量允許差為±0.02 mL，按矩形分布處理，k=，則10 mL A 級容量瓶引入的標準不確定度：

10 mL A 級容量瓶引入的相對標準不確定度：

3.4.2 溫度引入的相對標準不確定度urel，2(Vx10)

玻璃儀器和無水乙醇在20 ℃時的體積膨脹系數(shù)αg、αm分別為2.5×10-5、1.10×10-3℃。在實驗溫度為24 ℃時，使用10 mL A 級容量瓶，由溫度差引起的體積變化ΔVx=（αm-αg）×Vx×ΔT= 0.043 mL，體積不確定度服從三角分布，k= 6，則使用10 mL A 級容量瓶時，溫差引入的標準不確定度：

溫差引入的相對標準不確定度：

將urel，1(Vx10)與urel，2(Vx10)合成，得樣品溶液配制體積引入的相對標準不確定度：

3.5 薄荷腦對照品溶液配制體積引入的相對標準不確定度urel(Vs10)

3.5.1 容量瓶容量偏差引入的相對標準不確定度urel，1(Vs10)

據(jù)檢定證書10 mL A 級容量瓶的允許差為±0.02 mL，按矩形分布處理，k= 3，則容量瓶容量偏差引入的標準不確定度：

容量瓶容量偏差引入的相對標準不確定度：

3.5.2 溫度引入的相對標準不確定度urel，2(Vs10)

實驗室實際控制溫度為24 ℃，按照3.4.2 方法評定，溫度引入的薄荷腦對照品溶液配制體積的標準不確定度：

將urel，1(Vs10)與urel，2(Vs10)合成，得對照品溶液配制體積引入的相對標準不確定度：

綜上所述，實驗定容體積V引起的相對不確定度：

3.6 儀器進樣引入的相對標準不確定度urel(X2)

選取薄荷腦對照品溶液，連續(xù)進樣6 次，測定結(jié)果見表4。

表4 對照品溶液6 次平行測定色譜峰面積

根據(jù)表4 數(shù)據(jù)，可得儀器進樣引入的標準不確定度：

儀器進樣引入的相對標準不確定度：

4 合成相對標準不確定度

將各不確定度分量匯總于表5。

表5 不確定度匯總

各不確定度分量來源彼此獨立不相關，因此合成得：

5 擴展不確定度

在95%的置信概率情況下，包含因子k=2，則擴展不確定度：

6 測量結(jié)果不確定度的報告與表示

在95%的置信概率情況下，包含因子k=2，則測量結(jié)果：

7 結(jié)語

采用氣相色譜法測定薄荷腦含量，并對其進行不確定度評定。根據(jù)不確定度分量可知，薄荷腦含量測定的不確定度主要來源于樣品稱量、樣品制備的稀釋體積，因此要求分析人員熟練掌握實驗室基本操作技術(shù)，嚴格按照規(guī)定的檢測條件進行測定。