吳震宇 趙娟 (蘭溪市人民醫(yī)院病理科，浙江 金華 321100)

乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤之一，具有高度異質(zhì)性。最近幾年乳腺癌的發(fā)病率與死亡率均呈快速升高趨勢(shì)，并在女性腫瘤中始終占有首要位置〔1〕。有學(xué)者指出〔2〕，腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤大小、分級(jí)等對(duì)乳腺癌的預(yù)后有重要影響。同樣有研究認(rèn)為〔3〕在治療乳腺癌的過程中應(yīng)重視分子情況，能夠提高乳腺癌的臨床療效。國(guó)際共識(shí)認(rèn)為可以通過免疫組化法將浸潤(rùn)性乳腺癌(IBC)分為4個(gè)亞型，包括人表皮生長(zhǎng)因子受體(HER)-2過表達(dá)型、Luminal A型、Luminal B型及三陰型〔4〕?；讟尤橄侔?BLBC)屬于三陰型乳腺癌(TNBC)的一種，且BLBC具有侵襲性強(qiáng)、惡性度高、預(yù)后差等特點(diǎn)〔5〕。細(xì)胞角蛋白(CK)5/6是一種基底型細(xì)胞角蛋白。本研究旨在檢測(cè)CK5/6、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、雌激素(ER)、HER-2、孕激素(PR)、Ki67在IBC組織中的表達(dá)及其在IBC診斷和治療的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 采集2017年1月1日至2020年12月31日于蘭溪市人民鋒院就診的180例IBC患者的標(biāo)本?；颊吣挲g60～79歲，平均(69.73±5.68)歲，中位年齡63歲。60～63歲55例，64～79歲125例。所有患者在接受手術(shù)前未接受過其他方法治療。參照2019年世界衛(wèi)生組織(WHO)頒布的女性生殖系統(tǒng)乳腺和腫瘤的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)〔6〕，其中82例腫瘤最大徑<2 cm，98例≥2 cm。參照Elston&Ellis法〔7〕組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，18例組織分級(jí)Ⅰ級(jí)，94例Ⅱ級(jí)，68例Ⅲ級(jí)；參照2019 St．Gallen國(guó)際共識(shí)中通過免疫組化法對(duì)乳腺癌進(jìn)行分子分型的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行劃分〔8〕：Luminal A型是指HER-2陰性與Ki-67增殖指數(shù)低于30%，ER陽(yáng)性超過1%，PR陽(yáng)性超過20%；Luminal B型存在兩種情況，一種是PR、ER均為陽(yáng)性，HER-2陰性，Ki-67增殖指數(shù)超過30%；另一種是PR、ER均為陽(yáng)性，HER-2陽(yáng)性，Ki-67增殖指數(shù)無其他要求；HER-2過表達(dá)型即是指PR與ER為陰性，HER-2為陽(yáng)性。三陰型是指PR、ER、HER-2三者均為陰性。本研究所有的標(biāo)本由醫(yī)院工作經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)生進(jìn)行及Ki-67閱片。

1.2方法 CK5/6、EGFR、Ki-67均為北京中杉金橋公司產(chǎn)品，PR、ER、HER-2及En Vision均為羅氏公司產(chǎn)品。本研究所有標(biāo)本首先用10%甲醛進(jìn)行固定，再使用石蠟將其包埋處理，隨后將其切成4 μm厚的組織切片，行蘇木素-伊紅(HE)染色、光鏡觀察。采用EnVision兩步法進(jìn)行免疫組化染色，采用自動(dòng)組化儀進(jìn)行抗原修復(fù)。將所有的病理切片設(shè)兩組進(jìn)行對(duì)照分析。ER、PR以子宮內(nèi)膜作為參照，HER-2以乳腺癌患者的病理標(biāo)本作為參照，Ki-67、EGFR采用闌尾炎患者作為參照，CK5/6以正常的乳腺組織為參照。

陽(yáng)性結(jié)果判斷 ER和PR陽(yáng)性主要表現(xiàn)為在IBC細(xì)胞核中有陽(yáng)性著色出現(xiàn)；HER-2陽(yáng)性主要表現(xiàn)為顯現(xiàn)出較強(qiáng)陽(yáng)性著色的浸潤(rùn)性癌細(xì)胞膜的數(shù)量在10%以上；CK5/6陽(yáng)性主要表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)上有陽(yáng)性著色出現(xiàn)；EGFR陽(yáng)性表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)和胞膜上均有陽(yáng)性著色。陽(yáng)性細(xì)胞是指當(dāng)抗體在腫瘤細(xì)胞表達(dá)中，細(xì)胞膜、細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕色顆粒。切片中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量超過10%為陽(yáng)性。Ki-67、PR、ER的陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞核中。參照《中國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)乳腺癌診療指南 2018》〔9〕中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。1%是PR和ER的陽(yáng)性臨界值；HER-2陽(yáng)性(3+)是指腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)數(shù)量超過10%細(xì)胞膜環(huán)周強(qiáng)著色；HER-2不確定(2+)是指超過10%的完整細(xì)胞膜環(huán)周著色程度一般或著色程度較強(qiáng)的細(xì)胞膜環(huán)周數(shù)量低于10%；HER-2陰性(1+)是指超過10%的不完整細(xì)胞膜著色程度較弱；沒有出現(xiàn)著色或呈現(xiàn)微弱的不完整細(xì)胞膜的數(shù)量低于10%為0，1+和0均屬于陰性。對(duì)HER-2經(jīng)免疫組化最后評(píng)分結(jié)果為2+的患者進(jìn)行熒光原位雜交，檢測(cè)HER-2基因是否出現(xiàn)增殖情況，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果再將HER-2進(jìn)行分組。采用免疫組化法對(duì)CK5/6和EGFR進(jìn)行染色處理，若沒有出現(xiàn)著色定義為陰性；著色程度弱到強(qiáng)的癌細(xì)胞數(shù)量在20%及以下為弱陽(yáng)性；著色程度較強(qiáng)的浸潤(rùn)癌細(xì)胞數(shù)量超過20%為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)及Pearson相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1IBC組織學(xué)分類情況 180例IBC患者中，非特殊類型IBC(IBC-NST)165例(91.67%)，其中經(jīng)典型IBC-NST 157例，變異形態(tài)IBC-NST 8例；另有15例(8.33%)特殊類型IBC。180例IBC中，37例TNBC，143例非三陰型乳腺癌(N-TNBC)。見表1。

表1 IBC組織學(xué)分類情況〔n(%)〕

2.2CK5/6、EGFR在各類分子分型中的表達(dá)情況 180例IBC中包括47例(26.11%)Luminal A型；66例(36.67%)Luminal B型，Luminal B型中有48例(26.67%)Luminal B型HER-2陰性型，18例(10.00%)Luminal B型HER-2陽(yáng)性型；30例(16.67%)HER-2過表達(dá)型；37例(20.56%)TNBC。180例IBC中CK5/6陽(yáng)性率為13.89%(25/180)，其中有12例呈弱陽(yáng)性，13例呈強(qiáng)陽(yáng)性；EGFR陽(yáng)性率為28.89%(52/180)，其中23例呈弱陽(yáng)性，29例呈強(qiáng)陽(yáng)性，兩者共陽(yáng)性率為10.56%(19/180)。37例TNBC中，CK5/6陽(yáng)性率為43.24%(16/37)，其中7例呈弱陽(yáng)性，9例呈強(qiáng)陽(yáng)性；EGFR陽(yáng)性率為62.16%(23/37)，8例呈弱陽(yáng)性，15例呈強(qiáng)陽(yáng)性；CK5/6和EGFR均為陽(yáng)性的比率為35.14%(13/37)。143例N-TNBC中，CK5/6陽(yáng)性率為6.29%(9/143)，其中5例呈弱陽(yáng)性，4例呈強(qiáng)陽(yáng)性；EGFR陽(yáng)性率為20.28%(29/143)，其中16例呈弱陽(yáng)性，13例呈強(qiáng)陽(yáng)性；CK5/6和EGFR均為陽(yáng)性的比率為4.20%(6/143)。CK5/6、EG-FR在TNBC中的陽(yáng)性率及共陽(yáng)性率均比在N-TNBC中的更高(P<0.01)。CK5/6、EGFR在TNBC中的共陽(yáng)性率顯著高于其他4種分子分型中的陽(yáng)性率(P<0.05)，見表2。

2.3CK5/6、EGFR的表達(dá)與疾病臨床病理特征的關(guān)系 在IBC-NST中，CK5/6的陽(yáng)性率為13.33%(22/165)，EGFR的陽(yáng)性率為29.09%(48/165)，兩者共陽(yáng)性率為10.91%(18/165)；在特殊類型IBC中，CK5/6的陽(yáng)性率為20.00%(3/15)，EGFR的陽(yáng)性率為26.67%(4/15)，兩者共陽(yáng)性率為6.67%(1/15)。CK5/6與EGFR的表達(dá)在IBC、TNBC和IBC-NST的組織學(xué)分級(jí)中均存在相關(guān)性(P<0.01)。CK5/6、EGFR表達(dá)在Ⅲ級(jí)腫瘤中的表達(dá)率明顯比Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)更高(P<0.01)。見表3。通過進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，EGFR在IBC中的表達(dá)與PR、ER、HER-2、Ki-67表達(dá)均有相關(guān)性(P<0.01)，CK5/6的表達(dá)與PR、ER、Ki-67表達(dá)有相關(guān)性(P<0.01)。見表3。

表2 CK5/6、EGFR在各類分子分型中的表達(dá)情況〔n(%)〕

表3 CK5/6、EGFR陽(yáng)性表達(dá)與IBC病理特征的關(guān)系(n)

2.4TNBC病理特征與CK5/6、EGFR表達(dá)的關(guān)系 CK5/6在年齡間的表達(dá)有明顯差異(P<0.05)，EGFR在不同年齡組間的表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。CK5/6和EGFR表達(dá)均與Ki-67高表達(dá)有相關(guān)性(P<0.05)。見表4。對(duì)37例IBC-NST進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，EGFR與組織學(xué)分級(jí)無關(guān)，CK5/6與TNBC組織學(xué)分級(jí)有相關(guān)性，CK5/6在Ⅲ級(jí)腫瘤中的陽(yáng)性率明顯比Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)更高(P<0.05)。

表4 TNBC臨床病理特征與CK5/6、 EGFR陽(yáng)性表達(dá)的關(guān)系(n)

3 討 論

乳腺癌是一種涉及多種信號(hào)通路且具有極度異質(zhì)性的疾病，該疾病的分子特征較為獨(dú)特，不同分子亞型的內(nèi)在特征會(huì)影響疾病發(fā)展和預(yù)后效果，因此腫瘤生物學(xué)的關(guān)鍵信息對(duì)治療乳腺癌有至關(guān)重要的作用〔10〕。近年來，隨著分子生物技術(shù)的快速發(fā)展，人們對(duì)乳腺癌的分子特征有了更進(jìn)一步地了解，乳腺癌分子分型被廣泛應(yīng)用于治療乳腺癌疾病中，從而幫助患者進(jìn)行個(gè)性化生物靶向治療，改善預(yù)后效果〔11〕。PR、ER、HER-2、Ki67是目前公認(rèn)的分子。而不同分子分型不同，IBC治療方案也存在一定差異〔12〕；針對(duì)Luminal A型主要采用內(nèi)分泌療法；Luminal B型HER-2陰性型會(huì)在Luminal A型治療的基礎(chǔ)上給予相應(yīng)化療手段；Luminal B型HER-2陽(yáng)性型會(huì)在給予相應(yīng)的HER-2治療方法；HER-2過表達(dá)型通常采用化療與HER-2相結(jié)合的治療方法。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Line等〔13〕研究結(jié)果相似。

CK5/6是一種能夠在乳腺定向干細(xì)胞、肌上皮中間細(xì)胞、腺中間細(xì)胞表達(dá)的基底細(xì)胞型細(xì)胞角蛋白，但其不能夠在腺上皮和肌上皮終端細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)。而定向干細(xì)胞是普通乳腺增生主要特征，因此CK5/6在期間常呈陽(yáng)性表達(dá)，而CK5/6在大多數(shù)的浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中均呈陰性表達(dá)，因此CK5/6可作為區(qū)分乳腺增生類型的重要參考數(shù)據(jù)〔14，15〕。EGFR是一種跨膜酪氨酸激酶，EGFR能與表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、雙調(diào)蛋白(AR)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)2α結(jié)合，形成異源或同源二聚體，從而激活自身活性，與其下游含PTB和SH2區(qū)域的蛋白相結(jié)合，幫助細(xì)胞從G1期到S期的過渡。EGFR在疾病發(fā)生和發(fā)展過程中起重要作用〔16,17〕。有研究顯示〔18〕，EGFR在浸潤(rùn)性腫瘤中呈高表達(dá)狀態(tài)。有研究報(bào)道〔19〕，CK5/6和EGFR陽(yáng)性在IBC中的惡性程度高，臨床上的預(yù)后效果更差。CK5/6、EGFR在TNBC中的陽(yáng)性率和共陽(yáng)性率均明顯比在N-TNBC中更高，CK5/6和EGFR在TNBC中表達(dá)均與Ki-67有相關(guān)性。而Ki67是一種能夠反映腫瘤增殖率的典型細(xì)胞增殖性核蛋白，在增殖細(xì)胞中呈高表達(dá)。本研究結(jié)果表明，CK5/6、EGFR表達(dá)和腫瘤的惡性程度有關(guān)。CK5/6、EGFR表達(dá)可作為患者治療和預(yù)后的重要參考標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表明EGFR同樣能夠成為IBC患者預(yù)后的重要參數(shù)。有研究指出〔20〕，可以通過熒光原位雜交、免疫組化方法檢測(cè)PR、ER及HER-2水平來對(duì)TNBC進(jìn)行診斷。本研究結(jié)果表明了CK5/6可作為TNBC預(yù)后的重要參數(shù)。高級(jí)別TNBC主要有組織學(xué)分級(jí)為Ⅲ級(jí)的IBC-NST，鱗狀細(xì)胞化生性癌、大汗腺癌、伴軟骨肉瘤分化的化生性癌、梭形細(xì)胞化生性癌等。低級(jí)別TNBC包括腺樣囊性癌、低級(jí)別纖維瘤病樣化生性癌、多形態(tài)癌、分泌性癌、低級(jí)別腺鱗癌等。有研究指出〔21〕，多數(shù)高級(jí)別TNBC預(yù)后較差，但也有極少數(shù)高級(jí)別TNBC預(yù)后效果較好，與本文結(jié)果相似。

綜上，乳腺癌檢測(cè)CK5/6及EGFR與PR、ER、HER2的表達(dá)相結(jié)合，對(duì)IBC預(yù)后具有重要的參考價(jià)值，TNBC的腫瘤患者術(shù)后預(yù)后較差。