覃小敏 邢輝 李琳 周敏 毛小剛 呂華兵 楊將

(湖北文理學(xué)院附屬醫(yī)院 襄陽市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 襄陽 441021)

宮頸癌是常見的女性生殖器官癌癥，其發(fā)病率在所有女性惡性腫瘤中排第二位，據(jù)最新統(tǒng)計(jì)資料顯示，我國每年新增宮頸癌患者達(dá)13萬，嚴(yán)重威脅女性健康〔1〕。宮頸癌患者的發(fā)病率逐漸升高可能與環(huán)境污染、生活壓力、飲食習(xí)慣等多方面因素有關(guān)，流行病調(diào)查研究顯示，人類乳頭瘤病毒(HPV)感染是造成宮頸癌變的重要原因之一，宮頸癌患者中，HPV感染率達(dá)90%以上〔2〕。腫瘤標(biāo)志物在一定程度上反映了腫瘤的發(fā)展程度，絕大多數(shù)宮頸癌患者死亡的原因?yàn)槟[瘤對(duì)周圍組織的侵襲和腫瘤細(xì)胞的散播，但目前仍缺乏可靠的宮頸癌細(xì)胞生長、浸潤、轉(zhuǎn)移的抑制性指標(biāo)〔3〕。腫瘤異常蛋白(TAP)是腫瘤細(xì)胞代謝過程中釋放的，是由糖鏈結(jié)構(gòu)異常的糖蛋白和鈣組成的復(fù)合物，TAP水平直接反映癌變的程度和數(shù)量〔4〕；堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)是一類強(qiáng)有力的細(xì)胞有絲分裂原和促血管新生因子，在腫瘤細(xì)胞的增殖、分化和血管形成過程中具有重要作用，可反映腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移〔5〕；細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白(CDCA)5是后期促進(jìn)復(fù)合物的底物之一，可調(diào)控腫瘤細(xì)胞周期，但目前有關(guān)CDCA5的表達(dá)及作用機(jī)制類的研究較少〔6〕。本研究擬分析血清TAP、bFGF及CDCA5表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年2月至2019年1月于湖北文理學(xué)院附屬醫(yī)院治療的98例宮頸癌患者為癌癥組，另選取同期女性體檢健康的56例為健康組，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)許可。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《宮頸病變的診斷與治療》〔7〕中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)病理學(xué)檢查確診；②無放化療、免疫治療史；③年齡65～85歲；④患者及家屬均對(duì)本研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并感染性疾病和免疫功能疾病者；②近3個(gè)月內(nèi)有糖皮質(zhì)激素類藥物使用史；③合并其他部位惡性腫瘤者。癌癥組年齡65～82歲，平均(75.16±2.05)歲；健康組年齡66～84歲，平均(73.12±2.41)歲。兩組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法 ①TAP測(cè)定：采集患者清晨空腹靜脈血置于載玻片，涂抹均勻并晾干，置于水平凈化操作臺(tái)，將TAP凝劑充分搖勻后均勻滴到血片上，待標(biāo)本干燥后放置顯微鏡下觀察其形態(tài)。TAP正常(無明顯凝聚物)：未見明顯類晶體凝聚物，呈顆粒狀，凝聚物面積0～121 μm2；TAP弱陽性(凝聚物較小)：邊緣較完整的類晶體凝聚物，凝聚物面積121～225 μm2；TAP陽性(凝聚物較大)：邊緣較完整的類晶體凝聚物，凝聚物面積≥225 μm2。②bFGF檢測(cè)：采用Western印跡法進(jìn)行測(cè)定，采集患者靜脈血，離心處理后取上清液，在聚苯乙烯板中加入0.1 ml上清液，置于4℃的環(huán)境中過夜孵育，加入磷酸鹽緩沖液沖洗3次，3 min/次，加入bFGF抗體，37℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖液沖洗3次，3 min/次，后對(duì)各標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色。計(jì)算各個(gè)標(biāo)本中bFGF的表達(dá)水平。③CDCA5測(cè)定：采集患者癌組織研磨取總蛋白，使用Bradford法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，將提取的總蛋白經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜、加入5%脫脂牛奶后封閉處理，加入CDCA5抗體，置于4℃的環(huán)境中過夜孵育后加入2抗，37℃孵育2 h后采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，分析CDCA5表達(dá)量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)、Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清TAP、bFGF及CDCA5水平比較 癌癥組TAP、bFGF及CDCA5水平明顯高于健康組(P<0．05)，見表1。

表1 兩組血清TAP、bFGF及CDCA5表達(dá)比較

2.2影響老年宮頸癌患者預(yù)后的單因素分析 98例患者中生存年限<2年15例，≥2年83例。單因素分析結(jié)果顯示，初潮時(shí)間、病理類型、FIGO分期、TAP、bFGF及CDCA5的表達(dá)水平在生存年限<2年和≥2年的患者中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)，而年齡、孕次、產(chǎn)次和病理分化程度比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表2。

表2 影響老年宮頸癌患者預(yù)后的單因素分析〔n(%)〕

2.3影響老年宮頸癌患者預(yù)后的多因素分析 病理類型、FIGO分期、TAP、bFGF及CDCA5的表達(dá)水平均為影響老年宮頸癌患者預(yù)后的相關(guān)因素(P<0.05)，見表3。

表3 影響老年宮頸癌患者預(yù)后的多因素分析

3 討 論

隨著人口老齡化的加劇，老年宮頸癌的發(fā)病人數(shù)逐漸增多〔8〕。雖然目前多種治療方式的綜合應(yīng)用明顯改善了宮頸癌患者的治療效果，但老年宮頸癌患者的死亡率仍較高，5年生存率相對(duì)較低，這主要與其臨床和病理特征有關(guān)〔9，10〕。主要原因如下，①老年患者由于雌激素水平降低，發(fā)生宮頸萎縮、鱗柱交界區(qū)上移等改變，故在體檢時(shí)不易發(fā)現(xiàn)異?！?1〕；②大多數(shù)患者在發(fā)現(xiàn)疾病時(shí)就已處在疾病中晚期，治療難度大〔12〕；③腺癌對(duì)放療不敏感，已發(fā)生轉(zhuǎn)移〔13〕；④老年人體質(zhì)弱，不耐受手術(shù)，放化療不良反應(yīng)多，預(yù)后差〔14〕。宮頸癌已嚴(yán)重影響到我國婦女的健康和生存質(zhì)量，若能找到診斷宮頸高敏感性的指標(biāo)，可提高宮頸癌早期診斷率，有效協(xié)助制定方案，改善患者預(yù)后。

大部分腫瘤形成時(shí)常伴有糖鏈的變化，TAP是多種惡性腫瘤發(fā)展過程中產(chǎn)生的糖鏈結(jié)構(gòu)異常的糖蛋白和鈣共同組成的蛋白化合物的總稱，積累到一定程度后釋放入外周血液，血清TAP水平可間接表示癌變的程度，且TAP對(duì)全身腫瘤均具有敏感性，可檢測(cè)90%以上腫瘤形成的異常糖鏈糖蛋白，通過診斷腫瘤“蛋白異常形態(tài)”提高腫瘤檢測(cè)的靈敏性，具有檢測(cè)便利、多種腫瘤信號(hào)易感的特點(diǎn)，對(duì)篩查無臨床癥狀腫瘤患者意義重大〔15，16〕。但關(guān)于TAP是否能作為預(yù)后指標(biāo)的研究較少。有研究〔17〕提出“血管生成的開關(guān)平衡假說”，認(rèn)為血管生成促進(jìn)因子和血管生成抑制因子共同調(diào)控血管生成以來，臨床已分離、純化多種血管生成相關(guān)因子，bFGF為首個(gè)發(fā)現(xiàn)的促微血管生長因子，其特性類似于激素，微量即可促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖，體內(nèi)幾乎所有細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞均能產(chǎn)生bFGF，在人體內(nèi)分布廣泛〔18〕。bFGF可能是通過細(xì)胞膜微小破裂或細(xì)胞死亡而釋放，也可能是由自分泌或旁分泌形式發(fā)揮生物學(xué)作用，并依賴內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基復(fù)合通路將其釋放至細(xì)胞外，作用于靶細(xì)胞。bFGF對(duì)靶細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)主要通過高親和力的酪氨酸激酶受體和低親和力的肝素/硫酸乙酰肝素蛋白聚糖受體發(fā)揮作用，可促分裂、分化、促進(jìn)血管生成和胚胎發(fā)育，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中有重要作用〔19，20〕。腫瘤組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，在腫瘤血管新生過程中，bFGF對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有高度選擇性〔21〕。相關(guān)文獻(xiàn)也表明bFGF可促進(jìn)癌細(xì)胞分裂增殖和血管生成，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用〔22〕。另有研究〔23〕表明，當(dāng)組織發(fā)生炎癥或外傷時(shí)，受損細(xì)胞產(chǎn)生以bFGF為主的多種因子進(jìn)入創(chuàng)傷部位，刺激相關(guān)細(xì)胞快速增殖，合成新的細(xì)胞間質(zhì)和毛細(xì)血管增生，bFGF的高表達(dá)可促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)。CDCA5蛋白是由CDCA5基因編碼的，最初是作為后期促進(jìn)復(fù)合物的一個(gè)底物被發(fā)現(xiàn)，CDCA5是有絲分裂過程中姐妹染色單體結(jié)合和分離的關(guān)鍵因素之一〔24〕。研究〔25〕表明CDCA5在多種腫瘤組織中表達(dá)明顯上調(diào)，如胃癌、肝細(xì)胞癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌和肺癌等。有研究〔26〕報(bào)道了CDCA5的高表達(dá)與尿路上皮癌患者晚期臨床癥狀和不良預(yù)后聯(lián)系密切，但CDCA5在腫瘤細(xì)胞中的分子作用機(jī)制和促癌的潛在機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。最新研究〔27〕發(fā)現(xiàn)，CDCA5的高表達(dá)還可提示胃癌患者預(yù)后不良。本研究結(jié)果表明TAP、bFGF及CDCA5的高表達(dá)可能參與了宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展，且可作為評(píng)估老年宮頸癌患者遠(yuǎn)期預(yù)后的有效指標(biāo)。

綜上，血清TAP、bFGF及CDCA5在老年宮頸癌患者中以較高水平表達(dá)，與癌癥的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切，可作為評(píng)估預(yù)后的有效指標(biāo)。