吳 婷

(嘉興市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院桐鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，浙江 桐鄉(xiāng) 314500)

狂犬病是由狂犬病病毒引起的人獸共患病[1]，多見(jiàn)于犬、狼、貓等肉食動(dòng)物，人都因被病獸咬傷而感染。人患狂犬病后的病死率幾近100%，犬類接種疫苗是預(yù)防人類狂犬病最具成本效益的方法[2]。通過(guò)大規(guī)模犬只免疫，提高犬只免疫密度，是實(shí)現(xiàn)狂犬病有效控制的主要手段，也是防止人感染狂犬病的有效措施?？梢杂行Ц淖儭肮啡静?，人打苗”的局面，實(shí)現(xiàn)以科學(xué)方式、較低投入控制狂犬病的目的。

2021年10月1號(hào)起施行的《浙江省動(dòng)物防疫條例》規(guī)定本省對(duì)犬只狂犬病實(shí)施免費(fèi)免疫[3]。犬只飼養(yǎng)人攜帶犬只到畜牧獸醫(yī)主管部門確定的狂犬病免疫點(diǎn)免費(fèi)接種狂犬病國(guó)產(chǎn)疫苗。本試驗(yàn)通過(guò)比較狂犬病國(guó)產(chǎn)疫苗(SAD株)與進(jìn)口疫苗(G52株)犬只免疫后不同階段抗體水平及消長(zhǎng)規(guī)律，為今后犬類免疫中狂犬病疫苗的選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物 隨機(jī)選取在桐鄉(xiāng)市某寵物診所進(jìn)行狂犬病疫苗免疫的無(wú)臨床疾病癥狀的健康犬只。

1.1.2狂犬病疫苗來(lái)源 進(jìn)口疫苗為國(guó)外企業(yè)生產(chǎn)的狂犬病滅活疫苗(G52株)，生產(chǎn)日期：20191118，保持期36個(gè)月，免疫有效期：12個(gè)月。

國(guó)產(chǎn)疫苗為國(guó)內(nèi)企業(yè)生產(chǎn)的狂犬病滅活疫苗(SAD株)，生產(chǎn)日期：20201005，保持期24個(gè)月，免疫有效期：12個(gè)月。

1.1.3試劑 狂犬病病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，批號(hào)：RV20210907E，購(gòu)自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司。

1.1.4儀器 Eppendorf單、雙道可調(diào)移液器；精宏DNP-9162電熱式恒溫培養(yǎng)箱；TECAN Infinite F50酶標(biāo)儀。

1.2方法

1.2.1狂犬病免疫方法 采用皮下注射的方法，免疫劑量為1頭份/只。注射時(shí)嚴(yán)格消毒，遵守操作規(guī)范。

1.2.2血樣采集 經(jīng)狂犬病國(guó)產(chǎn)疫苗或進(jìn)口疫苗免疫的犬只分別在免疫后的21-60 d、150-180 d、330-360 d經(jīng)靜脈采血，分離血清。三個(gè)階段分別采集血樣各15份。

1.2.3實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 狂犬病抗體采用ELISA抗體檢測(cè)，按試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。檢測(cè)的是抗狂犬病IgG總抗體。判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品A值/臨界對(duì)照A值平均值≥1.0，抗體陽(yáng)性；樣品A值/臨界對(duì)照A值平均值<1.0，抗體陰性。

2 結(jié)果

2.1不同時(shí)間階段的免疫效果評(píng)價(jià) 不同時(shí)間階段的狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可以看出，在狂犬疫苗免疫后的21-60 d已經(jīng)能保持較高的抗體水平，國(guó)產(chǎn)疫苗(SAD株)合格率為93.33%，進(jìn)口疫苗(G52株)合格率為86.67%；150-180 d抗體水平合格率分別為93.33%和100%，說(shuō)明抗體水平整體平穩(wěn)；330-360 d抗體水平合格率為93.33%和60%。通過(guò)近一年時(shí)間的追蹤分析，國(guó)產(chǎn)疫苗(SAD株)免疫效果比較穩(wěn)定，進(jìn)口疫苗(G52株)后期抗體水平明顯下降；兩者總體免疫合格率雖仍維持在70%以上，但此時(shí)應(yīng)加強(qiáng)補(bǔ)免。

表1 狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2免疫抗體水平及消長(zhǎng)規(guī)律 不同時(shí)間階段的狂犬病疫苗免疫抗體水平及消長(zhǎng)規(guī)律見(jiàn)圖1。按照ELISA抗體檢測(cè)試劑盒標(biāo)注的判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品A值/臨界對(duì)照A值平均值≥1.0為抗體陽(yáng)性；樣品A值/臨界對(duì)照A值平均值<1.0為抗體陰性進(jìn)行判定。由圖1可以看出，在免疫后第21天起兩種疫苗均產(chǎn)生了較高水平的抗體，進(jìn)口疫苗(G52株)的抗體水平整體略高于國(guó)產(chǎn)疫苗(SAD株)；在60-150 d，兩種疫苗的抗體水平呈平穩(wěn)向上態(tài)勢(shì)，特別是進(jìn)口疫苗(G52株)免疫抗體水平上升明顯，到150-180 d左右達(dá)到峰值；330-360 d國(guó)產(chǎn)疫苗(SAD株)依然保持較高的抗體水平，進(jìn)口疫苗(G52株)的抗體水平有所下降。

不同來(lái)源的狂犬病疫苗免疫抗體水平消長(zhǎng)曲線見(jiàn)圖2，總體來(lái)說(shuō)國(guó)產(chǎn)疫苗(SAD株)免疫的抗體水平整體較平穩(wěn)，抗體陽(yáng)性率一直保持在90%以上。進(jìn)口疫苗(G52株)在免疫后的第21天已產(chǎn)生較高的抗體水平，抗體水平持續(xù)上升至180 d左右達(dá)到峰值100%，隨后抗體水平在330-360 d回落至60%。

3 分析與討論

3.1國(guó)產(chǎn)疫苗整體表現(xiàn)優(yōu)異 從桐鄉(xiāng)市某寵物診所隨機(jī)抽取的犬免疫國(guó)產(chǎn)狂犬疫苗(SAD株)和進(jìn)口狂犬疫苗(G52株)后的免疫效果來(lái)看，兩種疫苗均能達(dá)到預(yù)期的免疫效果。國(guó)產(chǎn)疫苗(SAD株)從免疫抗體產(chǎn)生的時(shí)間、抗體水平保持的時(shí)間，抗體消長(zhǎng)規(guī)律上表現(xiàn)都不比進(jìn)口疫苗(G52株)差。

3.2本次試驗(yàn)中可能存在的不足之處

3.2.1樣品來(lái)源 本試驗(yàn)樣品來(lái)自寵物診所隨機(jī)采取的無(wú)臨床疾病癥狀的健康犬只。犬只年齡沒(méi)有統(tǒng)一，有初次免疫，也有歷次免疫?？赡艽嬖诓糠秩辉诒敬慰袢∫呙缑庖咔翱贵w水平；犬只品種沒(méi)有統(tǒng)一，有寵物犬，也有田園犬。田園犬更適應(yīng)本地的氣候與環(huán)境，身體素質(zhì)普遍高于其他犬種。存在個(gè)體差異。

3.2.2疫苗來(lái)源 本試驗(yàn)采用的進(jìn)口疫苗生產(chǎn)日期是2019年11月18日，而國(guó)產(chǎn)疫苗生產(chǎn)日期是2020年10月5日。滅活苗在長(zhǎng)時(shí)間保存后，可能會(huì)出現(xiàn)佐劑包裹力下降、抗原蛋白變性等情況，會(huì)直接影響疫苗免疫效果[4]。

近年來(lái)受到宣傳、習(xí)慣等影響，犬只飼養(yǎng)人對(duì)國(guó)產(chǎn)疫苗的接受程度并不高，多數(shù)還是選擇進(jìn)口疫苗。但從本次試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，國(guó)產(chǎn)疫苗和進(jìn)口疫苗免疫效果相差不大，且國(guó)產(chǎn)疫苗在免疫后期仍能保持較高的抗體水平。但國(guó)產(chǎn)疫苗還是存在一些短板比如質(zhì)量有效期比進(jìn)口疫苗短，適用動(dòng)物僅適用于犬，未包括貓。因此，不同來(lái)源的狂犬病疫苗免疫效果評(píng)價(jià)仍是值得日后進(jìn)一步探討研究的課題。