李婉婉 范長民 孫配龍 張 斌

(吉林金域醫(yī)學(xué)檢驗所有限公司 吉林 長春 130000)

真菌性鼻竇炎是臨床常見的一種特異性感染性疾病，因其不但感染鼻竇，也侵犯鼻腔，所以學(xué)者們提議改名為真菌性鼻-鼻竇炎(fungal rhinosinusitis，F(xiàn)RS)。根據(jù)組織學(xué)發(fā)現(xiàn)，依據(jù)真菌是否侵及黏膜，大致可其分為侵襲性及非侵襲性兩大類[1, 2]。以往真菌性鼻竇炎被人們認(rèn)為極為少見的一種疾病，但是隨著臨床用藥的廣泛性使用，抗生素、糖皮質(zhì)激素等被大量使用在治療各種疾病中，使機(jī)體的對各種病菌的免疫能力不斷降低，真菌性鼻竇炎也不斷增多。其患病癥狀在臨床上沒有特殊的特異性癥狀，患者個體表現(xiàn)的癥狀也輕重不一，初期癥狀表現(xiàn)與化膿性鼻竇炎癥狀相類似甚至相同，臨床醫(yī)師診斷時很容易被誤導(dǎo)，耽誤患者的盡早治療[3]。組織病理學(xué)是將活檢組織或者手術(shù)標(biāo)本制作成切片在顯微鏡下觀察組織細(xì)胞形態(tài)變化，從而診斷疾病的一種手段，本文介紹一個非侵襲性真菌性鼻-鼻竇炎的病例，從組織病理學(xué)角度進(jìn)行分析討論。

1 資料與方法

1.1資料 一名48歲女性醫(yī)院門診就診，單側(cè)鼻阻塞，頭疼，流膿涕，行鼻內(nèi)鏡鼻竇開放術(shù)手術(shù)治療，取出病灶送檢病理。

1.2試劑 蘇木素-伊紅染色(Hernatoxylin and Eosin Stain,HE)試劑，高碘酸雪夫(PAS)染色液(珠海貝索生物有限公司)，六胺銀(Gomori)染色液(珠海貝索生物有限公司)

1.3方法 組織常規(guī)取材、10%中性緩沖甲醛溶液固定、常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，70℃烤臺烤片30min。行HE染色、PAS染色及六胺銀染色。PAS染色中真菌呈紫紅色，背景由Mayer蘇木素對比染色，細(xì)胞核呈淡藍(lán)色；六胺銀染色中真菌菌絲及孢子呈黑褐色，背景伊紅染色呈紅色。具體染色步驟如下：

1.3.1HE染色[4]

(1)將已入蒸餾水后的切片置入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘。

(2)酸水及氨水中進(jìn)行分色，各進(jìn)行數(shù)秒鐘。

(3)流水沖洗一個小時候入蒸餾水?dāng)?shù)分鐘。

(4)入70%和90%酒精中脫水各進(jìn)行10分鐘

(5)入酒精伊紅染色液染色2-3分鐘。

(6)染色后切片經(jīng)使用純酒精進(jìn)行脫水，再經(jīng)二甲苯使切片透明。

(7)將已透明的切片滴上加拿大樹膠，蓋上蓋玻片封固，略干，貼簽，即可使用。

1.3.2六胺銀染色[5](1)切片經(jīng)二甲苯5min*2、無水乙醇5min*2、95%乙醇5min*2、85%乙醇5min、70%乙醇5min完成脫蠟。脫蠟后自來水沖洗5min。

(2)加入1%過碘酸水溶液中作用10min。自來水沖洗。后使用蒸餾水沖洗二次，每次3min。

(3)六胺銀液預(yù)熱至65℃，切片放入其中浸染75min，蒸餾水沖洗二次，每次3min。

(4)用0.1%氯化金調(diào)色處理5min,蒸餾水沖洗二次，每次3min。

(5)用5%硫代硫酸鈉處理5min,蒸餾水沖洗二次，每次3min。

(6)用0.5%亮綠復(fù)然細(xì)胞質(zhì)。

(7)切片再經(jīng)70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇各1min；經(jīng)95%乙醇1min,換液重復(fù)一次；無水乙醇2min,換液重復(fù)一次快速脫水，后用二甲苯透明5min,換液重復(fù)一次。

(8)蓋上蓋玻片，滴入適量中性樹膠，封片。

1.3.3PAS染色[6]

(1)石蠟切片脫蠟放置自來水、蒸餾水中沖洗，70%酒精沖洗，每次3min。

(2)進(jìn)入高碘酸酒精溶液10min,溶液溫度控制在17-20℃為宜。

(3)70%酒精沖洗后，入還原液1min，溶液溫度控制在17-20℃為宜。

(4)70%酒精再次沖洗后，入無色鹽基性品紅溶液60-90min,室內(nèi)溫度較低時，放入37℃恒溫箱中進(jìn)行。

(5)流水沖洗10min,用Mayer蘇木素復(fù)染液復(fù)染細(xì)胞核3-5min,再用1%鹽酸酒精進(jìn)行分化。

(6)流水再次沖洗，脫水，透明，封固。

2 結(jié)果

2.1 HE染色 HE染色真菌菌絲及孢子不著色，能看到菌絲輪廓，黏膜未見菌絲侵犯(圖1)。

圖1 HE染色結(jié)果(左200X，右400X)

2.2 PAS染色 結(jié)果顯示PAS陽性，見真菌菌絲團(tuán)塊，大量菌絲纏繞(圖2)。

圖2 PAS結(jié)果(左200X，右400X)

2.3 Gomori染色 結(jié)果顯示真菌菌絲及孢子呈陽性，其中能看到大量真菌團(tuán)塊(圖3)。

3 討論

隨著我國醫(yī)療資源的不斷發(fā)展壯大，臨床用藥也越來越豐富多樣，對于各種疾病的治療，大量的藥物逐漸被投放在臨床治療應(yīng)用中，這其中包括抗生素、糖皮質(zhì)激素具體強(qiáng)大殺菌消炎效果的藥物，這些藥物的使用也增加了一部分人體的對不同菌屬的出現(xiàn)耐藥情況，隨著我國經(jīng)濟(jì)騰飛，我國國人整體生活水平大大提高，生活工作節(jié)奏也逐漸加快，人們的生活豐富多彩，生活不規(guī)律、工作壓力大也屢屢發(fā)生在身邊，導(dǎo)致多數(shù)人都處于亞健康狀態(tài)，身體免疫能力出現(xiàn)不同程度的下降，抵抗細(xì)菌、真菌、病毒的侵害的能力下降。人們機(jī)體免疫功能及機(jī)體代謝能力的差異化，各類菌屬的應(yīng)變能力、侵襲能力不斷增強(qiáng)，也會出現(xiàn)不同病理變化，導(dǎo)致不同的臨床結(jié)果[7]。

真菌廣泛存在于自然界中，而對機(jī)體有致病的真菌便有300多個種類，臨床上真菌類病變多發(fā)，也引起了臨床醫(yī)師對真菌疾病的廣泛關(guān)注。鼻炎是耳鼻喉科最常見的疾病之一，因鼻腔黏膜受到炎癥因子長期刺激而導(dǎo)致，當(dāng)機(jī)體為即使治療致使病情反復(fù)發(fā)作，便會繼續(xù)發(fā)展成鼻竇炎，其發(fā)生與細(xì)菌病毒等感染、鼻腔鼻竇等組織發(fā)生病變、周圍的組織感染等均有關(guān)。真菌性鼻-鼻竇炎根據(jù)真菌侵犯范圍及組織受損程度不同分為非侵襲性真菌性鼻-鼻竇炎(Noninvasive fungal rhinosinusitis,NIFS)和侵襲性真菌性鼻-鼻竇炎(Invasive fungal rhinosinusitis,IFS),其中以NIFS多見[8-9]。非侵襲性真菌性鼻-鼻竇炎包括侵襲性包括真菌球型鼻-鼻竇炎(fungus ball，F(xiàn)B)、變應(yīng)性真菌性鼻-鼻竇炎(allergic fungal rhinosinusitis，AFRS)[10]，F(xiàn)B常見于中老年女性，多表現(xiàn)為單側(cè)鼻塞、涕有異味、膿涕，還可伴有頭痛等癥狀，具有較為典型的CT表現(xiàn)，以骨質(zhì)增生、破壞并存為主，真菌感染以曲霉菌屬多于其他菌屬[11]，真菌球的主要治療手段是鼻內(nèi)鏡手術(shù)和清創(chuàng)術(shù)，能完整清除病灶的同時，清除阻塞因素，重建正常解剖結(jié)構(gòu)，保護(hù)竇腔粘膜，恢復(fù)正常生理功能[12]，一般不予抗真菌藥物治療，預(yù)后良好，不易復(fù)發(fā)[2]，若出現(xiàn)復(fù)發(fā)現(xiàn)象，可給予上頜竇沖洗即能有效控制病情。AFRS多見于青年及有特應(yīng)性體質(zhì)的人，常伴有支氣管哮喘、鼻息肉，其臨床癥狀與FB相似[10]。真菌性鼻-鼻竇炎多數(shù)是在機(jī)體長期使用糖皮質(zhì)激素、抗生素、免疫抑制劑或接受放射治療等情況下發(fā)生，也可在一些慢些消耗性疾病導(dǎo)致機(jī)體抵抗力下降時發(fā)生[13]。

臨床對真菌的快速診斷方法有很多，包括常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色、六胺銀染色法和過碘酸雪夫染色(PAS)法等，本實驗采用三種檢測方法共同檢測，從研究結(jié)果來看，HE染色著色較淺甚至部分未著色，菌體較小時難以辨認(rèn)，真菌菌絲及孢子不著色，能看到菌絲輪廓，黏膜未見菌絲侵犯。而六胺銀染色法和PAS法均對真菌有良好的顯色效果，而六胺銀染色比PAS染色的效果更敏感，對各種霉菌均著色，使菌絲和孢子呈明顯的黑褐色，顏色形態(tài)對比清晰，在鏡下極易辨認(rèn)，也有利于長久保存[14]。六胺銀染色真菌的原理是將真菌內(nèi)的多糖化合物進(jìn)行氧化后暴露醛基，醛基將六胺銀液中銀還原，變成黑色的金屬銀，使真菌著色，菌絲和孢子成明顯黑褐色。

本病例組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示送檢組織內(nèi)見大量真菌團(tuán)塊，真菌細(xì)胞未侵犯黏膜，結(jié)合病史及臨床癥狀符合真菌球型鼻-鼻竇炎。