◎ 胡紫艷，李 丹，史 達(dá)，蔣小文，金 鑫

(南京市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)院，江蘇 南京 210000)

近年來市面上宣稱改善胃腸道功能的食品種類和數(shù)量日益龐大。伴隨著龐大的市場(chǎng)需求以及追求快速顯效的目的，使得此類食品存在較高的非法添加化學(xué)藥物風(fēng)險(xiǎn)，目前已有較多文獻(xiàn)和報(bào)道指出在保健食品和中成藥中發(fā)現(xiàn)非法添加西咪替丁、雷尼替丁等化學(xué)藥物[1-2]。非法添加的化學(xué)藥物生產(chǎn)質(zhì)量得不到保障，用法用量難以控制，消費(fèi)者在不知情的情況下攝入，存在重復(fù)用藥、配伍禁忌、毒副作用等諸多安全隱患，可能對(duì)服用者身體帶來?yè)p害，嚴(yán)重情況下甚至誘發(fā)死亡。雷尼替丁因含有不可接受劑量的2A類致癌物N-亞硝基二甲基胺，在美國(guó)和歐盟等多個(gè)國(guó)家已撤市[3]。

非法添加化學(xué)藥物的趨勢(shì)是多種類化學(xué)藥物混合添加[4]。由于胃腸功能紊亂會(huì)引發(fā)便秘，臨床上多采用西咪替丁、法莫替丁、雷尼替丁、奧美拉唑和莫沙必利等聯(lián)合用藥方式進(jìn)行雙向調(diào)節(jié)，因此改善胃腸道功能的食品中存在較高混合添加的風(fēng)險(xiǎn)[5-7]。含有多種非法添加化學(xué)藥物的食品對(duì)人體的危害更大，且難以風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別和危害溯源。而目前針對(duì)此類食品非法添加的相關(guān)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)并不完善，也缺乏快速檢測(cè)的方法體系，不利于監(jiān)管部門精準(zhǔn)、快速地查處。因此，迫切需要對(duì)調(diào)理胃腸功能和有助于潤(rùn)腸通便類的食品建立檢測(cè)上述風(fēng)險(xiǎn)較高的常見5種物質(zhì)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，并配套建立相關(guān)非法添加物質(zhì)快速、精準(zhǔn)的檢測(cè)方法體系，以填補(bǔ)目前的監(jiān)管盲區(qū)。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

Agilent 1290-G6495液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（配備ESI源，Agilent公司）；ME204電子天平（十萬分之一，METTLER TOLEDO公司）；AllegraX-30R高速離心機(jī)（BECKMAN COULTER公司）；Milli-Q超純水系統(tǒng)（Millipore公司）。

1.2 材料與試劑

標(biāo)準(zhǔn)品枸櫞酸莫沙必利（批號(hào)：100656-201903）、 西咪替丁（批號(hào)：100158-201406）、法莫替?。ㄅ?hào)：100305-201304）、鹽酸雷尼替?。ㄅ?hào)：100163-201607）和奧美拉唑（批號(hào)：100367-201706）均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。甲醇、甲酸為色譜純，購(gòu)自德國(guó)Merck公司；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18RRHD（2.1 mm× 100 mm，1.8 μm）；進(jìn)樣體積：2 μL；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相A：0.1%甲酸水；流動(dòng)相B：甲醇；流速： 0.3 mL·min-1；梯度洗脫程序：0～5.0 min，8% B；5.0～6.0 min，8%→90% B；6.0～8.0 min，90% B；8～9 min，90%→8% B；9～15 min，8% B。

1.3.2 質(zhì)譜條件

離子化方式：電噴霧電離（ESI+）；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Multiple Reaction Monitoring；MRM）模式；霧化氣：N2；干燥氣流速：8 L·min-1；噴霧電壓：500 V；氣流溫度：350 ℃；毛細(xì)管電壓：3 500 V（+）；鞘氣流速：11 L·min-1；鞘氣溫度：250 ℃。具體質(zhì)譜參數(shù)見 表1。

表1 5種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜參數(shù)表

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

取莫沙必利、西咪替丁、法莫替丁、雷尼替丁和奧美拉唑標(biāo)準(zhǔn)品適量，分別用甲醇制成濃度均為 100 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。準(zhǔn)確吸取各貯備液1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇溶解稀釋至刻度，制成濃度為100 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液。再準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液適量，用乙腈-水溶液（9∶1）配 成 各 化 合 物 濃 度 依 次 為1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、 10 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1，作為系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.4 樣品制備

（1）固體試樣。取固體試樣混勻，研細(xì)，精密稱取1.0 g粉末，置50 mL具塞離心管中，加入乙腈-水溶液（9∶1）40 mL，渦旋1 min，超聲提取10 min， 于8 000 r·min-1離心5 min。上清液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用乙腈-水溶液（9∶1）稀釋至刻度，搖勻，過微孔濾膜，取濾液，根據(jù)實(shí)際濃度適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi)。

（2）液體試樣。準(zhǔn)確吸取樣品1.0 mL，置50 mL容量瓶中，加入乙腈-水溶液（9∶1）40 mL，超聲提取10 min，用乙腈-水溶液（9∶1）稀釋至刻度，搖勻，過微孔濾膜，取濾液，根據(jù)實(shí)際濃度適當(dāng)稀釋至線性范圍內(nèi)。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學(xué)考察結(jié)果

2.1.1 專屬性

選擇市場(chǎng)常見的調(diào)理胃腸功能的片劑、固體粉末以及口服液為空白基質(zhì)，按樣品處理方法得到空白基質(zhì)溶液，進(jìn)樣分析，結(jié)果均未檢出5種化合物。分別取空白基質(zhì)溶液，加入混合標(biāo)準(zhǔn)中間工作液適量，作為模擬供試液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果均能檢出5種化合物，表明空白基質(zhì)不干擾檢測(cè)。

2.1.2 線性

取1.3.3項(xiàng)下的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行分析。以化合物的峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度 （X，ng·mL-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。由表2可知，5種化合物在規(guī)定的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.995。提取離子流色譜代表圖見圖1。

2.1.3 精密度

取未檢出的樣品作為空白基質(zhì)，加適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，配成濃度為10 ng·mL-1的樣品溶液，按上述條件重復(fù)測(cè)定6次。由表2可知，5種目標(biāo)化合物的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）為1.52%～3.89%，說明本方法精密度良好。

2.1.4 加樣回收和重復(fù)性

以不含目標(biāo)分析物的片劑、固體粉末和口服溶液作為空白樣品，分別添加標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)最低、中、最高3個(gè)濃度水平，每個(gè)濃度平行制備3份樣品。按1.3.4樣品制備方法處理并進(jìn)行測(cè)定。由表2可知，回收率均在82.3%～108.9%，重復(fù)性的RSD＜7.0%（n=9），均符合要求。

2.1.5 檢出限

取空白基質(zhì)固體樣品1.0 g、液體樣品1.0 mL，加低濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，按樣品制備方法制備檢出限溶液。以信噪比S/N≥3計(jì)算檢出限。5種化合物的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、精密度、回收率和檢出限等參數(shù)見表2。

表2 檢測(cè)5種化合物的參數(shù)表

2.1.6 基質(zhì)效應(yīng)

取調(diào)理胃腸功能的片劑、固體粉末、口服液3種類型的陰性樣品進(jìn)行等質(zhì)量混合作為空白基質(zhì)，精密稱取空白基質(zhì)樣品1 g，加入100 ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液5 mL到空白基質(zhì)中，按1.3.4樣品制備方法處理得到10 ng·mL-1的混合基質(zhì)加標(biāo)溶液，另取 10 ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，同時(shí)上機(jī)測(cè)定。計(jì)算 2種溶液中化合物的響應(yīng)值百分比來考察基質(zhì)效應(yīng)。由表2可知，5種化合物的基質(zhì)效應(yīng)均在85.4%～110.8%，表明3種常見類型的基質(zhì)樣品對(duì) 5種化合物的基質(zhì)效應(yīng)影響較小，在可接受范圍內(nèi)。

2.2 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

2.2.1 提取溶劑的選擇

本研究以調(diào)理胃腸功能的片劑、固體粉末以及口服液等典型基質(zhì)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分別比較了甲醇、乙腈、甲醇-水和乙腈-水的提取效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乙腈的提取效率優(yōu)于甲醇，在提取溶劑中加入一定量的水，使提取溶劑對(duì)樣品的滲透性加強(qiáng)，增大有機(jī)溶劑與樣品的接觸面積，從而提高提取效率，因此選用乙腈-水溶液（9∶1）作為提取溶劑。

2.2.2 提取時(shí)間的考察

稱取空白樣品1.0 g，加適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液作為模擬樣品，置50 mL離心管中，加入乙腈-水溶液（9∶1）40 mL后，分別超聲5 min、10 min、15 min和20 min，8 000 r·min-1離心5 min，澄清液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，取濾液進(jìn)行分析測(cè)定。

由圖2可知，各待測(cè)化合物的提取率在前10 min 內(nèi)與超聲時(shí)間成正比，10 min后繼續(xù)延長(zhǎng)超聲時(shí)間，提取率呈下降趨勢(shì)。因此，選用超聲10 min對(duì)樣品進(jìn)行提取。

3 結(jié)論

食品中非法添加化學(xué)藥物會(huì)對(duì)服用者的身體健康和生命安全造成嚴(yán)重威脅，隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快所造成的飲食不規(guī)律及飲食結(jié)構(gòu)的不合理，市場(chǎng)上調(diào)節(jié)胃腸功能的食品（保健食品）受到越來越多人的青睞。但目前監(jiān)管中尚缺乏對(duì)此類食品中是否非法添加治療胃腸疾病的化學(xué)藥物的檢測(cè)方法。本研究建立的方法樣品前處理簡(jiǎn)單、快速，靈敏度度高，適用于食品中非法添加調(diào)節(jié)胃腸功能類化合物的篩查和測(cè)定。