胡紅永 張燦梅

作者單位：671000 云南大理白族自治州，大理白族自治州人民醫(yī)院核醫(yī)學科（胡紅永），檢驗科（張燦梅）

羅氏Cobas 6000e系列電化學發(fā)光免疫分析儀因性能穩(wěn)定、檢測敏感度高、精密度好等優(yōu)點而被廣泛應用于臨床檢驗和科研工作中。在檢測過程中所有項目都需使用ProCell M和CleanCell M液，同時為消除潛在干擾，一些項目在測量前需要使用PreClean M液［1］。配套洗液在測試過程中消耗量巨大，由于其售價昂貴，經測算每個測試的耗占比約為15%～20%。而國產配套預清洗液、緩沖液和清洗液價格相對低廉，可以降低醫(yī)療成本，為醫(yī)療改革提供支持。本研究采用國產配套預清洗液、緩沖液和清洗液代替羅氏原裝 PreClean M、ProCell M和CleanCell M液，評估和比較檢測效果。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 羅氏Cobas 6000 e601電化學發(fā)光免疫分析儀以及PreClean M、ProCell M、CleanCell M液、配套試劑和校準品均由羅氏診斷產品（上海）有限公司提供。國產預清洗液、緩沖液和清洗液由深圳瑞萊柏生物科技有限公司提供。

1.2 研究方法

1.2.1 國產配套洗液性能測試 根據性能測試操作步驟，在羅氏Cobas 6000 e601電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)試劑盤1、2號位分別放置Blankcell試劑，3、 4號位分別放置Cellcheck試劑，5號位放置血清淀粉樣蛋白P（serum amyloid P，SAP）檢測試劑。再在“香蕉架”上5個位置分別放置相應的儀器性能測定驗證檢測試劑，在主機維修管理軟件上執(zhí)行“Assay Performance Check（APC）”程序后，進行相應的性能驗證測試，測試完成后采用相應的性能測試管理軟件分析測試數據，自動得到測試結果。

1.2.2 交叉污染及敏感度檢測 性能驗證合格后，分別采用原裝PreClean M、ProCell M和CleanCell液 以及替代的國產檢測預清洗液、緩沖液和清洗液進行“APC”交叉污染及敏感度檢測程序，通過主機維修軟件分析得到變異系數（coefficient of variation，CV）、交叉污染值和敏感度。要求性能驗證參數AB3、iSAP、CO的CV分別為≤5%、≤2%、≤5%，交叉污染值≤1.5×10-4，敏感度≤6.0×10-15，比較結果差異是否有統(tǒng)計學意義。

1.2.3 檢測指標與方法 根據所選檢測及質控項目，使用不同的配套預清洗液、緩沖液和清洗液，采用夾心法檢測高敏促甲狀腺素（hypersensitive thyroid stimulating，h-TSH）、糖類抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）和癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA），采用競爭法檢測孕酮（progesterone，P）、游離三碘甲狀腺原氨酸（free triiodothyronine，FT3）和雌二醇（estradiol，E2）。E2檢測需要用到PreClean M液， 其余項目則無需使用PreClean M液。先使用羅氏原裝PreClean M、ProCell M和CleanCell M液及原裝試劑進行校準和測定，再使用國產預清洗液、緩沖液和清洗液分別替換原裝PreClean M、ProCell M和CleanCell M液，重新校準后測試相同項目。

1.2.4 室內質控及室間質評評價 采用美國伯樂公司的質控品（批號：40390），設置高、低2個濃度水平，分別以國產預清洗液、緩沖液和清洗液與羅氏原裝PreClean M、ProCell M和CleanCell M液對7個項目〔FT3、h-TSH、總三碘甲狀腺原氨酸（total triiodothyronine，TT3）、孕酮（P）、促卵泡生成素（follicle stimulating hormone，FSH）、促黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、睪酮（testosterone，T）〕進行1個月的室內質控檢測。以本實驗室原有室內L-J質控圖進行數據統(tǒng)計，監(jiān)測不同項目的每日質控結果，根據1S，3S質控判斷規(guī)則分析室內質控結果。采用國產洗液對2021年第二次國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心提供的腫瘤標志物Ⅰ室間質評質控品進行復測，根據國家衛(wèi)生健康委臨床檢驗中心提供的靶值，計算檢測偏倚。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0軟件分析數據。符合正態(tài)分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 交叉污染率和敏感度檢測 國產預清洗液、緩沖液和清洗液的交叉污染率和敏感度與原裝預清 洗液、緩沖液和清洗液比較，均符合標準要求，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。見表1～2。

表1 原裝洗液交叉污染率及敏感度檢測結果

2.2 原裝PreClean M、ProCellM、CleanCell M液與國產預清洗液、緩沖液和清洗液的準確性驗證 按照《用患者樣本進行方法比較和偏倚評估：批準指南第二版》（EP9-A2文件）［2］要求，每日收集10份患者 樣本，共收集5 d。分別使用羅氏原裝PreClean M、ProCell M、CleanCell M液和國產預清洗液、緩沖液和清洗液對每個樣本進行重復測定，取平均值作為最終測定值。更換國產配套洗液后，重新進行儀器的清洗和灌注，并經再次較準，完成相同項目的重復測試。見表3。結果表明，采用原裝PreClean M、 ProCell M和CleanCell M液與國產預清洗液、緩沖液和清洗液測定的h-TSH、FT3、E2、P、CA125、CEA結果均較為接近，計量資料采用配對t檢驗，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05，r＞0.99），呈高度正相關。

表2 國產洗液交叉污染及敏感度檢測結果

表3 采用國產洗液與羅氏原裝洗液檢測6種指標結果比較（±s）

表3 采用國產洗液與羅氏原裝洗液檢測6種指標結果比較（±s）

注：h-TSH為高敏促甲狀腺素，FT3為游離三碘甲狀腺原氨酸，E2為雌二醇，P為孕酮，CA125為糖類抗原125，CEA為癌胚抗原

洗液類型 樣本數（份）h-TSH（mU/L） FT3（pmol/L） E2（ng/L） P（μg/L） CA125（kU/L） CEA（μg/L）原裝洗液 50 3.94±0.60 5.42±0.23 566.2±104.1 14.39±2.02 21.96±5.92 2.84±0.38國產洗液 50 3.98±0.59 5.47±0.23 563.6±102.9 14.19±2.00 22.22±6.06 2.85±0.38 t值 1.704 2.700 2.888 2.193 1.691 0.544 P值 0.095 0.864 0.105 0.103 0.413 0.356 r值 1.000 0.996 1.000 0.999 1.000 0.999

2.3 精密度驗證 使用美國伯樂公司提供的質控品（批號：54690）配制為2個濃度水平的溶液，復溶后充分混勻，分裝成20份。

2.3.1 批內精密度驗證 使用已復溶好的高、低濃度質控品，每個樣本連續(xù)重復測定20次，記錄測定結果，分別計算均值、標準差及CV。結果判斷標準：批內精密度＜1/4允許總誤差（total allowable error，TEa），參考美國臨床檢驗室內質量控制文件（CLIA'88），比對結果為符合。

2.3.2 批間精密度驗證 使用已復溶好的低、高濃度質控品，每日測試2批，每批測定1次，兩批間隔時間2 h以上，連續(xù)測定10 d，每個樣本記錄20次測定結果，分別計算均值、標準差、CV。批間精密度＜1/3TEa，參考CLIA'88文件，比對結果為符合。采用國產配套洗液和羅氏原裝洗液檢測各項目，均值和標準差比較差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。采用國產預清洗液、緩沖液和清洗液檢測的各項目批內CV均＜3.76%，批間CV均＜5.86%，符合儀器所需試劑CV要求。

2.4 分析測量范圍驗證 采用EP-6A方案收集臨床患者低濃度血清（L；接近最低檢測限）和高濃度血清（H；接近檢測范圍高限），將低值（L）、高值（H）血清按一定比例配制成系列濃度的混合血清，各取份數按照5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H的比例配制混合，得到6個濃度的標本。使用國產預清洗液、緩沖液、清洗液與原裝PreClean M、ProCell M和CleanCell M液分別對所有濃度標本在2 h內隨機重復檢測3次，計算每個濃度的均值。見表4。結果表明，國產預清洗液、緩沖液、清洗液與原裝PreClean M、ProCell M、CleanCell M液的敏感度及測量范圍比較差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。

表4 采用國產洗液與羅氏原裝洗液分析測量范圍比較

2.5 室內質控及室間質評 將羅氏配套PreClean M、ProCell M、CleanCell M液更換為國產配套清洗液、清洗液和緩沖溶液并灌注后，檢測7個項目的質控品，采用質控軟件統(tǒng)計，繪制均值為現用質控圖均值。羅氏原裝配液與國產配液全部質控結果都在±s范圍內，比較均值及CV值差異無統(tǒng)計學意義。見表5。采用國產洗液對2021年第二次國家衛(wèi)生健康委腫瘤標志物Ⅰ室間質評的質控品進行復測，所有項目結果偏倚均在±5%以內。

表5 羅氏原裝配套溶液與國產配套溶液室內質控對比

3 討論

電化學發(fā)光法具有精密度、敏感度高、檢測線性范圍廣、結果穩(wěn)定等優(yōu)點，且配套試劑穩(wěn)定性較好，保存時間較長［3］。在醫(yī)學檢驗及科研工作中得到廣泛應用。電化學發(fā)光檢測原理以三聯(lián)吡啶釕為標記物，與三丙胺（tripropylamine，TPrA）共同構成電化學發(fā)光系統(tǒng)，三聯(lián)吡啶釕催化TPrA在電極表面發(fā)生特異性電化學發(fā)光反應［4］，與酶促發(fā)光法、直接發(fā)光法等方法比較，具有較大優(yōu)勢。

電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)中，PreClean M液用于清除可能干擾信號檢測的物質［4］；CleanCell M液用于為電極提供緩沖環(huán)境，在每次測定后清洗試管系統(tǒng)和檢測元件；而ProCell M液中的TPrA參與電極表面的氧化還原反應［5］，因此ProCell M液在檢測過程中作為電子供體很重要［6］。國產清洗液若與羅氏原裝ProCell M液存在明顯差異，會導致發(fā)光信號值的差異。羅氏電化學發(fā)光免疫檢測分析系統(tǒng)中，主要檢驗原理是競爭法和夾心法，因使用洗液的變化可導致檢測結果出現偏低或偏高［7］。

本研究以羅氏Cobas 6000 e 601電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)為檢測平臺，比較國產配套洗液與羅氏原裝洗液的性能測試結果，對儀器分別進行性能驗證，交叉污染率及敏感度對比。采用不同檢測方法檢測 6個項目，結果比較差異均無統(tǒng)計學意義。對7個免疫項目經過1個月室內質控跟蹤，所有測量項目的高低濃度水平質控全部在本實驗室繪制質控指標的x±2s之內，且CV值均與羅氏原裝溶液相近。復測2021年國家衛(wèi)生健康委室間質評第二次腫瘤標志物Ⅰ樣品，結果顯示偏倚在±5%以內。

綜上所述，國產配套洗液在羅氏Cobas 6000 e系列電化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)中各性能指標驗證結果均合格，臨床對比標本結果根據EP9-A2文件要求均可接受。在實際檢測分析應用中可替代羅氏原裝配套洗液，有研究表明在實際應用中無需重新校準，可直接替換原裝洗液使用［8-10］。使用國產洗液能為醫(yī)院降低耗材使用成本，減輕患者的經濟負擔。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突