衛(wèi)麗 刁曉艷 梁涯

作者單位： 810007 青海西寧，青海省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科（衛(wèi)麗、刁曉艷）

510006 廣東廣州，廣州市中醫(yī)醫(yī)院同德圍分院檢驗(yàn)科（梁涯）

白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）是一種多效性細(xì)胞因子，且在人體中功能較多。大量研究顯示，IL-6不僅對(duì)B細(xì)胞有生理活性作用，對(duì)T細(xì)胞、造血干細(xì)胞、肝細(xì)胞和腦細(xì)胞也有生理活性作用［1］。 在外科手術(shù)后、患腫瘤時(shí)以及發(fā)生內(nèi)外傷、感染、腦死亡或其他急性炎癥反應(yīng)時(shí)，機(jī)體會(huì)快速產(chǎn)生IL-6［2-3］。 手術(shù)患者的IL-6水平對(duì)是否會(huì)發(fā)生手術(shù)并發(fā)癥有一定預(yù)測(cè)作用［4-5］。對(duì)重癥監(jiān)護(hù)病房（intensive care unit，ICU）患者的IL-6水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)能有效評(píng)估疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后情況〔如系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）、 膿毒癥、膿毒性休克等〕［6-8］。另外有研究表明，IL-6可作為膿毒癥的早期預(yù)警指標(biāo)［9-11］，與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等慢性炎癥疾病也有關(guān)［12-13］。本實(shí)驗(yàn)室將國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織（International Organization for Standardization， ISO）制定的ISO15189：2007《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》［14］作為工作質(zhì)量的管理標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)IL-6項(xiàng)目全面驗(yàn)證和評(píng)價(jià)羅氏Cobas E602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的檢測(cè)性能（包括儀器檢測(cè)精密度、線(xiàn)性、方法學(xué)比較等），現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究檢測(cè)的血清標(biāo)本（高、中、低值濃度）來(lái)自青海省人民醫(yī)院門(mén)診、住院、體檢中心患者的新鮮血清（無(wú)溶血、黃疸和脂血）。低值標(biāo)本在正常參考值范圍內(nèi)，未經(jīng)稀釋的高值標(biāo)本高于正常參考值范圍的上限，但可被本儀器正常檢出。

1.2 儀器與試劑 使用德國(guó)羅氏診斷公司Cobas E602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及原裝試劑。校準(zhǔn)品和質(zhì)控品均為儀器原裝配套定標(biāo)液和血清基質(zhì)復(fù)合質(zhì)量控制（質(zhì)控）血清。

1.3 研究方法

1.3.1 準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 對(duì)不同于當(dāng)前使用校準(zhǔn)品批號(hào)的另一個(gè)校準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，與當(dāng)前使用的被檢校準(zhǔn)品的靶值比較，計(jì)算相對(duì)偏差［15］。判斷標(biāo)準(zhǔn)為相對(duì)偏差在±12.5%以?xún)?nèi)。

1.3.2 精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)［16］選擇低、中、高值IL-6水平（分別為25.10、127.01、688.92 ng/L）的新鮮血清，連續(xù)檢測(cè)20次，計(jì)算平均值（x）、標(biāo)準(zhǔn)差（standard deviation，SD）、變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）， 并計(jì)算批內(nèi)精密度。同時(shí)將高、中、低值血清標(biāo)本各分裝20份，儲(chǔ)存于2～8 ℃冰箱中，每日分別測(cè)量2次，持續(xù)10 d，計(jì)算批間精密度。評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果判定：計(jì)算出的批間精密度結(jié)果小于生產(chǎn)廠(chǎng)家所提供的參考范圍（CV＜8.5%），即為驗(yàn)證合格。

1.3.3 檢測(cè)線(xiàn)性范圍評(píng)價(jià) 參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，NCCLS）制定的標(biāo)準(zhǔn)EP6-A評(píng)價(jià)方案［16］，選取各 1份高值（H）和低值血清樣本（L），樣本的IL-6水平與儀器生產(chǎn)廠(chǎng)家說(shuō)明的檢測(cè)范圍相近，將樣本按不同比例（5L、4L+H、3L+2H、2L+3H、L+4H、5H）混 合，得到6份樣品，每份重復(fù)測(cè)定4次，計(jì)算均值。橫 坐標(biāo)x為理論值，縱坐標(biāo)y為實(shí)測(cè)值，列出回歸方程，繪制線(xiàn)性范圍，并計(jì)算相關(guān)系數(shù)。判斷線(xiàn)性范圍的標(biāo)準(zhǔn)：回歸方程為y＝bx+a，若b在0.97～1.03，a值 接近0則說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果可達(dá)到驗(yàn)證高限。

1.3.4 交叉污染率評(píng)估實(shí)驗(yàn) 將1份低值濃度標(biāo)本和1份高值濃度標(biāo)本分別連續(xù)測(cè)定3次，結(jié)果分別為L(zhǎng)1、L2、L3和H1、H2、H3。按以下公式計(jì)算：交叉污染率＝（L1-L3）/（H3-L3）×100%。

2 結(jié)果

2.1 準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 檢測(cè)系統(tǒng)使用批號(hào)168763的IL-6校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，再檢測(cè)批號(hào)169837和178635的IL-6校準(zhǔn)品，比較測(cè)定值與靶值，相對(duì)偏差為-3.01%～3.84%，表明檢測(cè)系統(tǒng)準(zhǔn)確度較高。準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 IL-6的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 羅氏Cobas E602全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光自動(dòng)免疫分析儀檢測(cè)IL-6高、中、低值濃度標(biāo)本的批內(nèi)和批間精密度均符合要求。見(jiàn)表2。

表2 IL-6精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 線(xiàn)性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn) 進(jìn)行回歸分析，得到回歸方程：y＝1.0081x-1.0009（R2＝0.99996），從而證實(shí)預(yù) 期值與實(shí)際測(cè)得值的相關(guān)性較好。因此，IL-6在線(xiàn)性 范圍內(nèi)呈線(xiàn)性，接近廠(chǎng)家提供的參考范圍，見(jiàn)表3。線(xiàn)性回歸圖見(jiàn)圖1。

表3 IL-6線(xiàn)性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 IL-6的線(xiàn)性范圍及線(xiàn)性回歸圖

2.4 交叉污染率評(píng)估 低值和高值濃度標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果分別為L(zhǎng)1＝24.26 ng/L，L3＝23.76 ng/L，H3＝627.0 ng/L，按公式計(jì)算可得IL-6的攜帶污染率為0.077%，符合標(biāo)準(zhǔn)（交叉污染率＜3.0%）。

3 討論

本研究采用羅氏Cobas E602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀定量檢測(cè)IL-6，該儀器具有敏感度和特異度高、重復(fù)性好、無(wú)放射性危害等優(yōu)點(diǎn)［17-18］，近年來(lái)廣泛被臨床使用。羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀根據(jù)夾心法，采用羅氏公司的封閉檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)IL-6進(jìn)行檢測(cè)，所有試劑和消耗品都來(lái)自德國(guó)羅氏診斷公司。全自動(dòng)免疫分析儀的廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)中提供的儀器指標(biāo)參數(shù)均在最佳檢測(cè)條件下完成，與實(shí)際操作實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和條件有差異，因此，本實(shí)驗(yàn)室旨在驗(yàn)證羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對(duì)IL-6的檢測(cè)性能，并評(píng)價(jià)該儀器的分析功能。

精密度是指在規(guī)定條件下不同批次檢測(cè)結(jié)果間的一致程度，是反映儀器檢測(cè)功能的重要指標(biāo)，也是進(jìn)行其他方法學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的前提。為驗(yàn)證檢測(cè)儀器的精密度，可選擇已經(jīng)檢測(cè)過(guò)的樣本、質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品作為標(biāo)本。本研究采用低值、中值、高值3個(gè)IL-6水平的患者新鮮血清，設(shè)計(jì)天數(shù)和重復(fù)次數(shù)進(jìn)行精密度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，從而得到批內(nèi)和批間精密度，方法簡(jiǎn)單，適合用于臨床實(shí)驗(yàn)室。結(jié)果顯示，IL-6的驗(yàn)證結(jié)果符合廠(chǎng)商要求。在NCCLS制定的標(biāo)準(zhǔn)EP6-A2中，線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)的多項(xiàng)式回歸統(tǒng)計(jì)方法要求檢測(cè)結(jié)果具有較高的精密度，否則會(huì)降低統(tǒng)計(jì)功效，因此，實(shí)驗(yàn)前一般先使用集合分差（set difference，SDr）來(lái)判斷檢測(cè)的精密度。結(jié)果顯示，IL-6的SDr＜5%目標(biāo)允許總誤差（allowable total error，TEa）時(shí)線(xiàn)性評(píng)價(jià)有意義。SPSS 13.0軟件擬合結(jié)果顯示，IL-6檢測(cè)的線(xiàn)性范圍為0.24～70.00 ng/L，基本接近說(shuō)明書(shū)提供的＜7.00 ng/L范圍。

綜上，羅氏Cobas E602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對(duì)IL-6的檢測(cè)性能驗(yàn)證結(jié)果與廠(chǎng)商聲明的基本一致，同時(shí)，該儀器也具有檢測(cè)速度快、敏感度高、線(xiàn)性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，符合臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)質(zhì)量的目標(biāo)要求，可以正式投入實(shí)驗(yàn)室使用，應(yīng)用于臨床標(biāo)本檢測(cè)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突