張文雋 雷 萍 李雅茹 馬婧嘉 吳亞召

（陜西省微生物研究所，陜西西安710043）

平菇Pleurotus ostreatus隸屬擔子菌門Basidio‐mycota，傘菌綱Agaricomycetes，傘菌目Agaricales，側耳科Pleurotaceae，側耳屬Pleurotus，又名鳳尾菇、黑牡丹菇、側耳、糙皮側耳、蠔菇等[1]，具有栽培技術簡單、生產成本低、產量高、易成功等優(yōu)點，是我國栽培量排名第三的食用菌品種。平菇味道鮮美，營養(yǎng)價值較高，蛋白質含量高為20%左右，氨基酸種類齊全，必需氨基酸含量高為8.38%，還含有豐富的多糖、B族維生素、多種礦物質等[2]。平菇具有降血脂、免疫調節(jié)、抗腫瘤等藥用價值，作為功能性食品越來越受到人們的關注[3]。

近年來，人們不斷嘗試平菇工廠化栽培，但目前仍以農戶栽培為主[4-6]。無論哪種栽培模式，性能優(yōu)良的菌株都是極為重要的，良種選育始終是產業(yè)良性發(fā)展的關鍵。野生平菇菌株具有許多優(yōu)良的性狀，是選育優(yōu)良菌種的基礎。筆者對采自陜西省西安市臨潼區(qū)行者街辦（東經109°12′21″，北緯34°23′46″）后院枯樹樁上的一株野生平菇進行生物學特性研究，并初步人工栽培試驗，以期為平菇優(yōu)良品種選育提供種質資源。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）供試菌株

采自陜西省西安市臨潼區(qū)1棵枯樹樁基部的野生平菇子實體，組織分離獲得純菌絲，編號為“陜平1015”。

（2）培養(yǎng)基

PDA 培養(yǎng)基：馬鈴薯（去皮、浸汁）200 g，葡萄糖20 g，瓊脂粉20 g，蒸餾水1 000 mL，pH 自然。基礎培養(yǎng)基：葡萄糖20 g，蛋白胨5 g，磷酸二氫鉀1 g，硫酸鎂0.5 g，維生素B110 mg，瓊脂粉20 g，蒸餾水1 000 mL，pH 自然。栽培料配方：棉籽殼78%，麩皮20%，蔗糖1%，石膏1%，料水比1∶1.3~1∶1.4。

1.2 試驗方法

1.2.1 溫度試驗

采用直徑90 mm 的培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿分別加入20 mLPDA 培養(yǎng)基，制備平板培養(yǎng)基。平板中央接入0.5 cm 的菌塊，于5 ℃、8 ℃、14 ℃、20 ℃、26 ℃、32 ℃、35 ℃、38 ℃溫度下恒溫培養(yǎng)，觀察記錄菌絲生長情況。每個溫度重復6次，每次1個平板。

1.2.2 碳源試驗

分別以20 g/L 的葡萄糖、蔗糖、D-麥芽糖、乳糖、甘露醇、可溶性淀粉、玉米粉作為碳源配置基礎培養(yǎng)基。采用直徑90 mm 的培養(yǎng)皿，每個培養(yǎng)皿分別加入20 mL 培養(yǎng)基，然后將0.5 cm 的菌塊接入平板中央，26 ℃恒溫培養(yǎng)，觀察記錄菌絲生長情況。每個處理重復6次，每次1個平板。

1.2.3 氮源試驗

分別以5 g/L 的蛋白胨、酵母膏、硫酸銨、硝酸銨、硝酸鉀、麩皮、黃豆粉作為氮源配置基礎培養(yǎng)基。接種、培養(yǎng)方法同1.2.2。

1.2.4 無機鹽試驗

分別以1.0 g/L 磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、硫酸鈉作為無機鹽配置基礎培養(yǎng)基，以不添加無機鹽為對照（CK）。接種、培養(yǎng)方法同1.2.2。

1.2.5 初始pH試驗

采用PDA 培養(yǎng)基，用1 mol/L HCl 和1 mol/L NaOH 調節(jié)培養(yǎng)基pH 分別為：5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。接種、培養(yǎng)方法同1.2.2。

1.2.6 正交優(yōu)化試驗

在單因素篩選的基礎上，選擇最佳碳源、氮源、無機鹽及初始pH 進行四因素三水平正交試驗，試驗因素及水平見表1。

表1 L9（34）正交試驗的因素及水平表

1.3 出菇試驗

配置栽培培養(yǎng)基，拌勻后裝入23 cm×48 cm×0.005 cm 的聚炳烯袋中，每袋裝料折干1 kg，126 ℃高壓滅菌3 h 后自然冷卻至室溫，無菌條件下接入一塊黃豆粒大小“陜平1015”試管菌種，于26 ℃遮光培養(yǎng)至菌絲長滿袋，常規(guī)管理出菇。觀察記錄子實體生長情況。重復3次，每次50袋。

1.4 指標測定

平板培養(yǎng)時待菌絲萌發(fā)2 d 后，采用十字交叉法測量菌落直徑，繼續(xù)培養(yǎng)3 d 再測量一次并計算菌絲平均生長速度；出菇栽培中待子實體成熟后，輕輕采摘并稱重，計算生物學效率。計算公式如下：

1.5 數據分析

采用SPSS 17.0數據處理系統(tǒng)，對相關試驗數據進行差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 溫度對“陜平1015”菌絲生長的影響

由表2 可以看出，培養(yǎng)溫度5~38 ℃“陜平1015”菌絲均能生長，試驗培養(yǎng)溫度間菌絲平均長速差異較顯著。當培養(yǎng)溫度為26 ℃時，菌絲生長最快（8.99 mm/d），且菌絲長勢佳；當培養(yǎng)溫度為32 ℃時，菌絲生長速度次之（8.21 mm/d），菌絲長勢較佳；當培養(yǎng)溫度為5 ℃時，菌絲生長速度最慢（1.55 mm/d），且長勢弱。因此，“陜平1015”菌絲生長的最適溫度為26 ℃。

表2 培養(yǎng)溫度對“陜平1015”菌絲生長的影響

2.2 碳源對“陜平1015”菌絲生長的影響

由表3 可以看出，“陜平1015”菌絲在7 種供試碳源培養(yǎng)基上均能生長。其中以葡萄糖、玉米粉為碳源時菌絲平均生長速度均較快，分別為9.10 mm/d和9.04 mm/d，兩者之間無顯著差異，但葡萄糖為碳源培養(yǎng)的菌絲長勢較佳；以蔗糖和可溶性淀粉為碳源時次之，菌絲生長速度分別為8.73 mm/d、8.67 mm/d，兩者之間差異不明顯，但可溶性淀粉為碳源培養(yǎng)的菌絲長勢較佳；以乳糖作為碳源時，菌絲生長速度最慢，長勢也最弱。因此，綜合菌絲生長速度和長勢，“陜平1015”菌絲生長的最適碳源為葡萄糖。

表3 供試碳源對“陜平1015”菌絲生長的影響

2.3 氮源對“陜平1015”菌絲生長的影響

由表4 可以看出，在7 種供試氮源培養(yǎng)基上“陜平1015”菌絲均能生長，且各處理間差異顯著。以酵母膏為氮源時菌絲平均生長速度最快（9.12 mm/d），菌絲潔白、粗壯有力、濃密、邊緣整齊；以蛋白胨為氮源時菌絲生長速度次之（8.90 mm/d），菌絲長勢佳；以硝酸鉀或硝酸銨為氮源時，菌絲生長速度均最差，分別為5.92 mm/d、5.87 mm/d，兩者之間無顯著差異，菌絲長勢較佳。因此，“陜平1015”菌絲生長的最適氮源為酵母膏。

表4 供試氮源對“陜平1015”菌絲生長的影響

2.4 無機鹽對“陜平1015”菌絲生長的影響

由表5 可以看出，在含有6 種供試無機鹽培養(yǎng)基上“陜平1015”菌絲均能生長，不添加任何無機鹽培養(yǎng)基上菌絲仍然可以正常生長，各處理間差異顯著。其中，以磷酸二氫鉀為無機鹽時“陜平1015”菌絲生長速度最快（7.63 mm/d），菌絲潔白、粗壯有力、濃密、邊緣整齊；以硫酸鎂為無機鹽時菌絲生長速度次之（7.05 mm/d），菌絲長勢佳；以氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣為無機鹽時，菌絲生長速度均較不添加任何無機鹽時還要差，以氯化鉀效果最差，菌絲生長速度僅為4.71 mm/d。因此，“陜平1015”菌絲生長的最適無機鹽為磷酸二氫鉀。

2.5 初始pH對“陜平1015”菌絲生長的影響

由表6 可以看出，培養(yǎng)基初始pH5.0~9.0“陜平1015”菌絲均能生長，當初始pH 為7.0 時菌絲平均生長速度最快（9.01 mm/d），菌絲潔白、粗壯有力、濃密、邊緣整齊；初始pH 為7.5、6.5 時次之，菌絲生長速度分別為8.66 mm/d、8.40 mm/d，兩處理間差異不顯著，菌絲長勢較好；當初始pH 為9.0 時，菌絲生長速度最慢（5.56 mm/d），菌絲長勢差。因此，“陜平1015”菌絲菌絲生長的最適培養(yǎng)基初始pH為7.0。

表6 初始pH對“陜平1015”菌絲生長的影響

2.6 正交優(yōu)化試驗結果

根據單因素篩選試驗結果，選取最佳碳源、氮源、無機鹽及初始pH 進行四因素三水平正交試驗，結果見表7。由表7 可以看出，影響“陜平1015”菌絲生長的試驗因素依次為B（氮源）＞A（碳源）＞D（初始pH）＞C（無機鹽），其中碳源均值由大至小依次為X2＞X1＞X3，氮源為X2＞X1＞X3，無機鹽為X3＞X2＞X1，初始pH為X1＞X3＞X2，可得出最佳因子組合為A2B2C3D1，即“陜平1015”菌絲的最佳培養(yǎng)條件為葡萄糖20 g/L，酵母膏5.0 g/L，磷酸二氫鉀1.5 g/L，初始pH6.5，在此條件下菌絲生長速度快、長勢佳。

表7 L9（34）正交試驗結果

2.7 出菇試驗結果

出菇試驗“陜平1015”子實體如圖1。“陜平1015”子實體叢生，覆瓦狀，大朵，生長整齊，大小較均勻，菌蓋直徑5.5~13.4 cm，扇形，灰色，菌柄短，肉質嫩，韌性好；采收三潮菇生物學效率為

圖1 陜平1015菌株出菇狀態(tài)及子實體

149.27%。

3 小結

對采集分離的野生平菇菌株“陜平1015”生物學特性研究結果表明：菌絲生長最適溫度為26 ℃，最適碳、氮源分別為葡萄糖、酵母膏，最適無機鹽為磷酸二氫鉀，培養(yǎng)基最適初始pH 為7.0。在單因素試驗基礎上進行正交優(yōu)化，得到菌絲生長最佳因子組合為葡萄糖20 g/L，酵母膏5.0 g/L，磷酸二氫鉀1.5 g/L，初始pH6.5。人工栽培的子實體生長整齊，大小較均勻，菌柄短，肉質嫩，韌性好，采收三潮菇生物學效率達149.27%?！瓣兤?015”是一株優(yōu)良的平菇生產菌株，值得示范推廣。