劉羨偉,高 楠△,黃 蕾,弓淑媛,張 婷,安 良

1.西安高新醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安 710000;2.西安金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)有限公司，陜西西安 710000

肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率位居全球腫瘤的第6位，病死率居第4位，嚴(yán)重威脅人類生命健康[1]。我國原發(fā)性肝癌的主要病因是乙型肝炎病毒感染。由于我國乙型肝炎患者較多，再加上患者對自身健康的重視不足，導(dǎo)致我國肝癌的發(fā)病率居高不下[2]。原發(fā)性肝癌起病隱匿，進(jìn)展迅速，惡性程度高，就診時(shí)多已發(fā)展為中晚期，治療效果不佳。盡管手術(shù)治療、藥物治療方法發(fā)展迅速，但對于中晚期患者而言，5年生存率仍然很低。因此，早診斷、早治療對提高治愈率，延長患者生存期尤為重要。長鏈非編碼RNA HEIH(LncRNA-HEIH)通過多種機(jī)制參與人體生物學(xué)過程，在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，可作為肝癌發(fā)生、發(fā)展的生物學(xué)標(biāo)志物[3]；高爾基體蛋白73(GP73)是新近發(fā)現(xiàn)的高爾基體上的跨膜蛋白，已作為肝癌早期診斷和預(yù)后評估的指標(biāo)應(yīng)用于臨床[4]；甲胎蛋白(AFP)是一種特異度較高的肝癌標(biāo)志物,與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[5]。本研究主要探討LncRNA-HEIH、GP73、AFP在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)，分析其與患者臨床病理特征的關(guān)系，旨在為原發(fā)性肝癌的診療工作提供新的思路，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2017年1月至2018年8月西安高新醫(yī)院收治的原發(fā)性肝癌患者112例作為肝癌組，其中男68例、女44例，年齡35～70歲、平均(55.4±9.3)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)首次確診，且符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2019年版)》[6]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)均經(jīng)組織病理學(xué)確診；(3)臨床資料完整，依從性高。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)嚴(yán)重肝、腎功能障礙；(2)合并其他惡性腫瘤；(3)合并嚴(yán)重心腦血管疾?。?4)合并免疫系統(tǒng)疾??；(5)預(yù)計(jì)生存期少于3個(gè)月。另收集100例肝硬化患者作為肝硬化組，其中男60例、女40例，年齡35～70歲、平均(55.8±9.5)歲。收集同期體檢中心體檢健康者100例作為對照組，其中男60例、女40例，年齡35～70歲、平均(55.5±9.7)歲。3組研究對象的一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過，符合倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2方法 所有研究對象均空腹8 h以上于次日8:00左右抽取靜脈血2管，1管注入專用試管檢測LncRNA-HEIH，1管注入紅色干燥試管檢測GP73、AFP，均靜置15～30 min后以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液置于-80 ℃超低溫冰箱統(tǒng)一進(jìn)行檢測。LncRNA-HEIH采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)進(jìn)行檢測，儀器為美國ABI7500型熒光定量PCR儀，根據(jù)2-ΔΔCt算法計(jì)算LncRNA-HEIH相對表達(dá)量，相對表達(dá)量>1即判斷為陽性。GP73、AFP采用羅氏Cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及配套試劑進(jìn)行檢測，GP73、AFP參考區(qū)間分別為0～150、0～8 ng/mL。所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，由同一檢驗(yàn)師在同一臺(tái)儀器完成，室內(nèi)、室間質(zhì)控均在控。

2 結(jié) 果

2.13組研究對象的LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平比較 肝癌組患者LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平明顯高于肝硬化組、對照組，肝硬化組以上指標(biāo)水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組研究對象的LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平比較

2.2肝癌組與肝硬化組LncRNA-HEIH、GP73、AFP的陽性率比較 肝癌組LncRNA-HEIH、GP73、AFP的陽性率明顯高于肝硬化組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 肝癌組與肝硬化組LncRNA-HEIH、GP73、AFP的陽性率比較[(%)n/n]

2.3LncRNA-HEIH、GP73、AFP在不同臨床病理特征原發(fā)性肝癌患者中的表達(dá) 根據(jù)不同臨床病理特征對原發(fā)性肝癌患者進(jìn)行分組，結(jié)果顯示，LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平在TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為低分化和有門靜脈癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝外轉(zhuǎn)移的患者中明顯升高(P<0.05)，見表3。

表3 LncRNA-HEIH、GP73、AFP在不同臨床病理特征原發(fā)性肝癌患者中的表達(dá)

2.4LncRNA-HEIH、GP73、AFP與臨床病理特征的相關(guān)性 將2.3中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量納入Spearman相關(guān)進(jìn)行分析可知，LncRNA-HEIH、GP73、AFP與TNM分期、門靜脈癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝外轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)(P<0.05)，與分化程度均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見表4。

表4 LncRNA-HEIH、GP73、AFP與臨床病理特征的相關(guān)性分析

3 討 論

原發(fā)性肝癌是世界范圍為內(nèi)病死率較高的一種惡性疾病，我國每年死于肝癌的患者約有30萬，占全世界因肝癌死亡人數(shù)的一半[7]。早期篩查可以降低肝癌的發(fā)病率及病死率，有效改善預(yù)后。篩選診斷肝癌有效的腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。

AFP是一種多肽類糖蛋白，主要由胎兒肝細(xì)胞及卵黃囊合成，胎兒時(shí)期水平最高，出生后則下降[8]。以往臨床上診斷原發(fā)性肝癌的血清學(xué)指標(biāo)主要是AFP，但AFP也存在缺陷，一部分原發(fā)性肝癌患者AFP呈陰性表達(dá)，容易造成漏診[9]。單獨(dú)將AFP作為篩查和診斷肝癌的標(biāo)志物具有一定的局限性。長鏈非編碼RNA(LncRNA)是長度超過200個(gè)核苷酸的RNA，參與多種生物學(xué)進(jìn)程。LncRNA-HEIH是近年來研究較多的一種LncRNA，在腫瘤組織常呈異常表達(dá)。HEIH是由RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄而來，被多聚腺苷酸化后,位于肝細(xì)胞細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中，在原發(fā)性肝癌患者中被發(fā)現(xiàn)異常表達(dá)[10]。馬慶等[11]的研究表明，LncRNA-HEIH水平在乙型肝炎相關(guān)肝硬化患者及肝癌患者中明顯升高，可用于預(yù)測肝硬化及肝癌的發(fā)生。GP73是高爾基體上的一種跨膜蛋白，其末端的螺旋結(jié)構(gòu)能夠作為蛋白作用的位點(diǎn)，與運(yùn)輸?shù)鞍椎霓D(zhuǎn)運(yùn)、結(jié)合、黏附功能有關(guān)，在肝病患者中高表達(dá)[12]。孫艷華等[13]的研究指出，GP73聯(lián)合其他腫瘤標(biāo)志物檢測可提高診斷的準(zhǔn)確率，對疾病早期診斷、治療、病情監(jiān)測意義重大。本研究結(jié)果顯示，原發(fā)性肝癌患者LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平明顯升高，說明這些指標(biāo)與疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

根據(jù)不同臨床病理特征分組后發(fā)現(xiàn)，LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平在TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為低分化和有門靜脈癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝外轉(zhuǎn)移的患者中明顯升高(P<0.05)。TNM分期是臨床上比較常用的實(shí)體腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)，分期越高，惡性程度越高，血清腫瘤標(biāo)志物水平也越高[14]。分化程度是反映腫瘤細(xì)胞接近正常細(xì)胞的程度，分化程度越低，惡性程度越高[15]。出現(xiàn)門靜脈癌栓的原發(fā)性肝癌患者病灶內(nèi)的癌細(xì)胞團(tuán)與原發(fā)性肝癌的侵犯程度、生長速度有關(guān)，還可能導(dǎo)致癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[16]。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肝外轉(zhuǎn)移也與原發(fā)性肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[17]。本研究所得結(jié)果說明這些指標(biāo)與部分臨床病理特征密切相關(guān)，這與上述研究相契合。本研究中Spearman相關(guān)分析結(jié)果也印證了這一觀點(diǎn)。

綜上所述，原發(fā)性肝癌患者LncRNA-HEIH、GP73、AFP水平明顯升高，且與臨床病理特征密切相關(guān)，以上指標(biāo)檢測對原發(fā)性肝癌患者的早期診斷及病情評估具有重要意義，值得臨床推廣應(yīng)用。但此次研究樣本量較小，且為回顧性分析，有待日后擴(kuò)大樣本量進(jìn)行更深層次的研究來佐證結(jié)果。