褚云香 王東盛 賈志偉 金 麟 劉曉川

(應(yīng)急總醫(yī)院消化內(nèi)科，北京市 100028，電子郵箱：xwt998112@163.com)

胃癌是一種起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，好發(fā)于50歲以上人群，能發(fā)生在胃的任何部位，多數(shù)患者發(fā)生在胃竇部、胃大彎、胃小彎等[1]。胃癌病因復(fù)雜，目前普遍認(rèn)為與幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，H.pylori)感染、地域環(huán)境及飲食因素等有關(guān)，而在上述原因中H.pylori感染占比較高[2]。研究表明，我國(guó)胃癌高發(fā)地區(qū)成人H.pylori感染率在60.0%以上，主要是由于持續(xù)的H.pylori感染能促使體內(nèi)的硝酸鹽轉(zhuǎn)化成具有致癌作用的亞硝酸鹽和亞硝胺等[3]。同時(shí)，H.pylori感染還能引起胃黏膜慢性炎癥，加劇黏膜上皮細(xì)胞過度增殖[4]；此外，H.pylori的毒性產(chǎn)物CagA、VacA等也具有明顯的促癌作用[5]。晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGE)是蛋白質(zhì)、氨基酸、脂類、核酸等物質(zhì)的游離氨基，與還原糖的羰基經(jīng)過縮合、重排、裂解等一系列反應(yīng)后產(chǎn)生的小骨窗的終末產(chǎn)物，能與氨基酸集團(tuán)形成穩(wěn)定的交聯(lián)結(jié)構(gòu)，不易被酶降解[6]。臨床研究表明，AGE與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，能直接參與腫瘤的發(fā)生和生物學(xué)行為[7]，但關(guān)于其對(duì)患者預(yù)后影響的研究較少。本研究探討AGE在H.pylori感染所致胃癌患者中的表達(dá)水平及其與患者預(yù)后的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年1月至2019年1月我院收治的87例H.pylori感染所致胃癌患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均符合H.pylori感染所致胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，均經(jīng)過手術(shù)病理組織檢查確診；(2)均行手術(shù)治療，手術(shù)過程中取病灶組織及癌旁組織；(3)均完成AGE測(cè)定。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并精神異常、血液系統(tǒng)疾病、器質(zhì)性疾病者；(2)凝血異?；虬橛凶陨砻庖呦到y(tǒng)疾病者；(3)合并其他部位惡性腫瘤、嚴(yán)重?fù)p傷患者。其中男性45例，女性42例；年齡35～78(53.26±6.78)歲；病灶直徑4～9(6.15±1.12)cm；腫瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期47例，Ⅲ～Ⅳ期40例；Lauren分型：腸型33例，彌漫型54例；分化類型：低分化31例，中分化30例，高分化26例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：轉(zhuǎn)移37例，未轉(zhuǎn)移50例；浸潤(rùn)深度：T1～T2期48例，T3～T4期39例。本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施，所有患者及家屬均對(duì)本研究知情并簽署同意書。

1.2 標(biāo)本采集及檢測(cè)方法

1.2.1 標(biāo)本的處理及AGE測(cè)定：所有患者均在術(shù)中分別取病灶組織、癌旁組織(距離病灶≥3 cm)3～5 g，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)病灶組織及癌旁組織中AGE蛋白表達(dá)陽(yáng)性率。向制備好的切片中加入濃度為3%的甲醇雙氧水，持續(xù)處理10 min，封閉內(nèi)源性過氧化物酶，磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffered saline，PBS)連續(xù)洗滌3次，5 min/次；加入PBS調(diào)整溶液pH值為6.0，加入檸檬酸鹽緩沖液5 mL，緩慢加熱至80℃，完成缺損蛋白修復(fù);向標(biāo)本中加入山羊血清(南京生航生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20175715)3 mL封閉20 min，加入AGE蛋白一抗(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20197535；抗體稀釋倍數(shù)1 ∶8)5 mL孵育20 min，PBS洗滌后緩慢加熱至100℃，并加入AGE蛋白二抗(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20194715；抗體稀釋倍數(shù)1 ∶10)，在濕盒內(nèi)孵育30 min，37℃下加入PBS洗滌3次，2 min/次，利用二氨基聯(lián)苯胺顯色后在顯微鏡(Olympus公司)下拍照[9]。

1.2.2 陽(yáng)性細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)：將切片置于倒置顯微鏡下，觀察結(jié)構(gòu)完整、清晰且定位較為明確的細(xì)胞。細(xì)胞漿內(nèi)呈棕黃色，且顏色明顯高于背景為陽(yáng)性細(xì)胞[10]。

1.3 觀察指標(biāo) (1)AGE的表達(dá)陽(yáng)性率。查閱患者病例資料，記錄不同性別、年齡、腫瘤大小、分化類型、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度、Lauren分型的患者的病灶組織AGE表達(dá)陽(yáng)性率。(2)AGE與患者預(yù)后的相關(guān)性。術(shù)后對(duì)患者進(jìn)行12個(gè)月的隨訪，隨訪方式包括門診隨訪、電話隨訪及上門隨訪，每1～3個(gè)月隨訪1次，計(jì)算病灶組織AGE表達(dá)陽(yáng)性患者與病灶組織AGE表達(dá)陰性患者的生存期，分析AGE與患者生存期的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以(x±s)表示，組間比較采用成組設(shè)計(jì)兩樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 AGE蛋白在胃癌病灶組織及癌旁組織中表達(dá)陽(yáng)性率的比較H.pylori感染所致胃癌患者病灶組織的AGE蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為55.17%(48/87)，高于癌旁組織的4.60%(4/87)(χ2=53.100，P<0.001)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，AGE蛋白在H.pylori感染所致胃癌患者的病灶組織中呈棕黃色，顏色相對(duì)較深，而在癌旁組織中顏色較淺或不表達(dá)。見表1和圖1。

圖1 AGE蛋白在胃癌不同組織中的表達(dá)(免疫組化染色，×200)

2.2 不同臨床病理特征的H.pylori感染所致胃癌患者病灶組織中AGE表達(dá)陽(yáng)性率的比較H.pylori感染所致胃癌患者病灶組織中，AGE蛋白表達(dá)陽(yáng)性率與性別、年齡、浸潤(rùn)深度、Lauren分型均無關(guān)(均P>0.05)，而與腫瘤大小、分化類型、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(均P<0.05)，腫瘤直徑≥5 cm、低中分化型、腫瘤Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴轉(zhuǎn)移的患者病灶組織中AGE表達(dá)陽(yáng)性率更高，見表1。

表1 不同臨床病理特征的H. pylori感染所致胃癌患者病灶組織中AGE表達(dá)陽(yáng)性率的比較[n(%)]

2.3 AGE的表達(dá)情況與患者預(yù)后的相關(guān)性 術(shù)后隨訪12個(gè)月，病灶組織中AGE蛋白表達(dá)陽(yáng)性的H.pylori感染所致胃癌患者的中位生存期為7個(gè)月，短于AGE蛋白表達(dá)陰性患者的中位生存期11個(gè)月(χ2=10.592，P=0.015)，生存曲線見圖2。

圖2 H. pylori感染所致胃癌患者的生存曲線

3 討 論

胃癌是臨床上常見的惡性腫瘤，具有發(fā)病率高、復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)[11]。目前，胃癌的病因尚未完全闡明，普遍認(rèn)為與H.pylori感染有關(guān)。胃癌發(fā)病早期缺乏典型性臨床癥狀，隨著病情進(jìn)展，患者會(huì)出現(xiàn)食欲下降、乏力及上腹疼痛加重等癥狀，腫瘤破壞血管可引起嘔血、黑便等消化道癥狀，嚴(yán)重影響患者的身體健康和生活質(zhì)量[12]。因此，加強(qiáng)對(duì)H.pylori感染所致胃癌患者的治療和干預(yù)對(duì)改善患者預(yù)后具有重要意義。

本研究中，H.pylori感染所致胃癌患者病灶組織中的AGE蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為55.17%，高于癌旁組織的4.60%(P<0.05)，說明AGE在H.pylori感染所致胃癌患者中的病灶組織呈高表達(dá)水平，或許直接參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展。有研究表明，AGE能積累在體內(nèi)不同的器官及細(xì)胞中，如晶狀體、肝臟、血管內(nèi)皮細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞等，當(dāng)AGE積累過量時(shí)，會(huì)影響機(jī)體組織器官及細(xì)胞的正常功能，產(chǎn)生一系列病理反應(yīng)[13]。還有研究表明，AGE直接參與糖尿病、尿毒癥、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的發(fā)生，但其在胃癌中的研究較少[14]。本研究中，H.pylori感染所致胃癌患者病灶組織中AGE蛋白表達(dá)陽(yáng)性率與腫瘤大小、分化類型、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(均P<0.05)，其中腫瘤直徑≥5 cm、低中分化型、腫瘤Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴轉(zhuǎn)移的患者病灶組織中AGE表達(dá)陽(yáng)性率更高，說明AGE在H.pylori感染所致胃癌患者中表達(dá)異常，其在病灶組織中的表達(dá)水平能反映患者疾病的嚴(yán)重程度。研究表明，AGE受體為清道夫受體，與炎性反應(yīng)具有較大關(guān)聯(lián)，能直接參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[15]。還有研究表明，AGE能與高遷移率族蛋白B1相互結(jié)合，直接參與胃癌的發(fā)生和發(fā)展[16]，主要是由于AGE能通過高遷移率族蛋白B1-AGE通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，從而抑制腫瘤細(xì)胞凋亡[17]。本研究進(jìn)一步分析AGE的表達(dá)情況與H.pylori感染所致胃癌患者預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果顯示，病灶組織中AGE蛋白表達(dá)陽(yáng)性患者的生存期短于AGE蛋白表達(dá)陰性患者(P<0.05)，這提示H.pylori感染所致胃癌患者的預(yù)后與病灶組織中AGE的表達(dá)情況相關(guān)。因此，H.pylori感染所致胃癌患者治療過程中應(yīng)加強(qiáng)AGE蛋白水平的測(cè)定，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果調(diào)整治療方案，使得患者的治療更具科學(xué)性。

綜上所述，AGE在H.pylori感染所致胃癌患者的病灶組織中呈高表達(dá)水平，其表達(dá)水平能反映患者的疾病嚴(yán)重程度，且與患者預(yù)后相關(guān)，臨床上應(yīng)加強(qiáng)AGE的檢測(cè)以評(píng)估患者預(yù)后。