王立明

（黑龍江職業(yè)學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150080）

有益微生物制劑在消化道繁殖和代謝過(guò)程中可產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸、消化酶和多種B族維生素，具有激發(fā)小腸段上皮細(xì)胞對(duì)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收等功能[1-2]，對(duì)動(dòng)物機(jī)體有益，有望成為抗生素的有效替代品。有研究表明，日糧中適當(dāng)添加有益微生物制劑可改善機(jī)體免疫功能，調(diào)節(jié)腸道功能平衡[3-5]。目前，針對(duì)有益微生物制劑開展的相關(guān)研究多集中于制劑的作用機(jī)制，主要探究畜禽在食用芽孢桿菌微生物制劑飼料后腸道微生物菌群和免疫功能會(huì)受到的影響；但在有益微生物制劑對(duì)飼料養(yǎng)分消化利用方面的研究較少[6-8]。本研究選擇黃羽肉雞作為試驗(yàn)動(dòng)物，在黃羽肉雞日糧添加芽孢桿菌微生物制劑，研究芽孢桿菌對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能、養(yǎng)分（蛋白質(zhì)及氨基酸）利用率以及盲腸菌群數(shù)量的影響，以期為相關(guān)應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)采用芽孢桿菌微生物制劑由枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌混合制成，孢子含量為2×1010CFU/g，由武漢雄峰科技有限公司提供。

黃羽肉雞來(lái)自某基地。采用全封閉雞舍，試驗(yàn)開始前已做好消毒工作。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選取240羽7日齡體重接近、健康狀況良好的快長(zhǎng)型黃羽肉雞，隨機(jī)分為2組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只。試驗(yàn)期49 d，分為2個(gè)階段。7～28日齡為第一階段，29～56日齡為第二階段。對(duì)照組肉雞飼喂基礎(chǔ)日糧；試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中加入250 g/t芽孢桿菌微生物制劑。

1.3 試驗(yàn)日糧

試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧主要原料選用玉米、豆粕、次粉和油糠等食材，原料的配比參考美國(guó)NRC肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（1994）肉雞營(yíng)養(yǎng)需要以及及飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T 33—2004）?；A(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平Tab.1 Basic diet composition and nutritional level

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

試驗(yàn)開始和結(jié)束，試驗(yàn)雞空腹稱重。試驗(yàn)期間觀測(cè)記錄各重復(fù)耗料量以及試驗(yàn)雞生長(zhǎng)狀況，計(jì)算平均日增重、平均日采食量以及料重比。

1.4.2 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率

試驗(yàn)結(jié)束前7 d，每個(gè)重復(fù)選擇1只中等體重雞，置入代謝籠開展行氮代謝試驗(yàn)。預(yù)試期3 d，正式試驗(yàn)期7 d。代謝試驗(yàn)期收集試雞的排泄物，糞便烘干制成風(fēng)干樣品。

參照《飼料分析與飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)》，測(cè)定日糧和排泄物中常規(guī)養(yǎng)分；采用waters pico-TagAA分析儀，測(cè)定排泄物和試驗(yàn)日糧氨基酸的表觀消化率。

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率=(養(yǎng)分?jǐn)z入量-養(yǎng)分排泄量)/養(yǎng)

1.4.3 盲腸菌群數(shù)量

取0.5 g勻質(zhì)的盲腸內(nèi)容物，加入到4.5 mL無(wú)菌生理鹽水，振蕩混勻，取0.5 mL；依次稀釋至10～6倍。選擇3個(gè)合適的稀釋度，由高稀釋度開始，吸取菌液加入各培養(yǎng)基平皿內(nèi)，每個(gè)平皿3個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度做3個(gè)重復(fù)，37℃培養(yǎng)24～48 h，采用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算每克內(nèi)容物所含菌數(shù)。培養(yǎng)基為各細(xì)菌的選擇性培養(yǎng)基，乳酸桿菌采用燭缸法進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，其余均采用需氧培養(yǎng)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件序進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，Duncan's進(jìn)行多重比較和相關(guān)回歸分析。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 芽孢桿菌微生物制劑對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)表2）

由表2可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組肉雞的末重、平均日增重和平均日采食量均顯著升高（P＜0.05）。試驗(yàn)組肉雞的料重比略低于對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05）。

表2 芽孢桿菌微生物制劑對(duì)黃羽肉雞生長(zhǎng)性能的影響Tab.2 Effect of Bacillus microbial preparation on production performance of yellow feather broilers

2.2 芽孢桿菌微生物制劑對(duì)黃羽肉雞蛋白質(zhì)和氨基酸表觀消化率的影響（見(jiàn)表3）

由表3可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組肉雞對(duì)飼料中蛋白質(zhì)、蘇氨酸、甘氨酸、胱氨酸、組氨酸、脯氨酸的表觀消化率均顯著升高（P＜0.05）。兩組肉雞天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸表觀消化率差異不顯著（P＞0.05）。

表3 芽孢桿菌微生物制劑對(duì)黃羽肉雞蛋白質(zhì)和氨基酸表觀消化率的影響Tab.3 Effect of Bacillus microbial preparation on protein and amino acid digestibility of yellow feather broilers 單位：%

2.3 芽孢桿菌微生物制劑對(duì)黃羽肉盲腸微生物菌群的影響（見(jiàn)表4）

由表4可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組肉雞盲腸乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量均顯著升高（P＜0.05），大腸桿菌數(shù)量顯著降低（P＜0.05）。試驗(yàn)組肉雞盲腸腸球菌數(shù)量雖略高于對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05）。

表4 芽孢桿菌制劑對(duì)黃羽肉雞盲腸微生物菌群的影響Tab.4 Effect of Bacillus microbial preparation on intestinal microbiota of yellow feather broilers 單位：lgCFU/g

3 討論

在養(yǎng)殖行業(yè)，長(zhǎng)期使用抗生素可造成的養(yǎng)殖動(dòng)物自身免疫力降低及抗生素殘留等問(wèn)題，尋找合適的抗生素替代品成為研究熱點(diǎn)。有研究表明，乳酸菌、芽孢桿菌等益生菌具有代替抗生素應(yīng)用于畜禽飼料的潛力[9-10]。其中，芽孢桿菌因易于貯藏、運(yùn)輸而逐漸作為抗生素替代品，并取得了較好的應(yīng)用效果[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌以芽孢形式被養(yǎng)殖動(dòng)物攝入有助于促進(jìn)養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)[12-13]。因此，發(fā)展芽孢桿菌的基礎(chǔ)以及應(yīng)用研究具有重要意義。

本研究中，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中添加芽孢桿菌微生物制劑，黃羽肉雞的日增重和飼料轉(zhuǎn)化效率得到提升，表明黃羽肉雞生長(zhǎng)后期采用芽孢桿菌微生物制劑替代抗生素具有一定可行性。微生物制劑能夠刺激腸道局部免疫反應(yīng)，促進(jìn)機(jī)體對(duì)病原細(xì)胞的免疫攻擊和對(duì)病原菌的抵抗力，同時(shí)其代謝產(chǎn)物在消化道形成的酸性環(huán)境能夠抑制有害菌群生存[14]。上述作用均利于促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)。

本研究雖并未開展對(duì)肉雞的相關(guān)免疫指標(biāo)變化情況的研究，但測(cè)定了肉雞后腸道的微生物菌群情況，得到的結(jié)果同樣可以證實(shí)上述觀點(diǎn)。在基礎(chǔ)日糧中添加芽孢桿菌微生物制劑，可對(duì)黃羽肉雞盲腸微生物情況產(chǎn)生有益的影響[15]。本研究中，試驗(yàn)組使用芽孢桿菌微生物制劑，盲腸乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量升高，大腸桿菌數(shù)量顯著降低，但對(duì)腸球菌的影響不大，與上述研究結(jié)果一致。

芽孢桿菌作用于盲腸可抑制有害菌生長(zhǎng)，促進(jìn)有益菌的增殖。有研究發(fā)現(xiàn)，采用添加枯草芽孢桿菌的日糧飼喂AA肉仔雞，結(jié)果顯示，l、3周齡肉仔雞糞便大腸桿菌數(shù)量顯著降低，3周齡仔雞腸道中乳酸桿菌的數(shù)量顯著增加，沙門氏菌的數(shù)量顯著降低，但并未對(duì)大腸桿菌數(shù)量產(chǎn)生顯著影響[16]，結(jié)論與本研究類似。但芽孢桿菌無(wú)法在消化道內(nèi)定植，只有通過(guò)動(dòng)物不斷采食添加芽孢桿菌的飼料才能夠發(fā)揮作用。

4 結(jié)論

有益微生物制劑對(duì)肉雞的生長(zhǎng)以及對(duì)養(yǎng)分的吸收具有較好的應(yīng)用效果。在基礎(chǔ)日糧中加入適量的芽孢桿菌微生物制劑，可有效改善肉雞的腸道微生物菌群情況，降低大腸桿菌數(shù)量，有助于肉雞更好地吸取飼料中的養(yǎng)分，促進(jìn)其健康生長(zhǎng)。