王 瓊，李 帥

（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州 310003）

抗磷脂綜合征（antiphospholipid syndrome，APS）是一種非炎癥性的自身免疫性疾病，主要表現(xiàn)為動(dòng)、靜脈血栓形成和病態(tài)妊娠，實(shí)驗(yàn)室檢查為持續(xù)的抗磷脂抗體（antiphospholipid antibody，aPL）陽(yáng)性[1-3]。根據(jù)臨床表現(xiàn)可分為血栓性APS（thrombotic APS，TAPS）和產(chǎn)科APS（obstetric APS，OAPS）；根據(jù)發(fā)病原因，可分為原發(fā)性APS 和與其他疾病相關(guān)的APS，后者通常發(fā)生于SLE 等自身免疫病。APS 的診斷主要基于臨床表現(xiàn)和嚴(yán)格定義的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)[4-6]。目前，在國(guó)內(nèi)外APS 的實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)中均提及抗心磷脂抗體（anticardiolipin，aCL）和抗β2糖蛋白Ⅰ抗體（anti-β2glycoproteinⅠ，anti-β2GPⅠ）滴度需大于第99 百分位數(shù)。然而，多數(shù)試劑廠家并未提供抗體滴度的第99 百分位數(shù)值，部分廠家雖然提供了該數(shù)值，但因其來源于不同地域、不同人群導(dǎo)致不一定適用于本實(shí)驗(yàn)室。因此，建立基于本實(shí)驗(yàn)室方法學(xué)及本地區(qū)人群的aCL 和anti-β2GPⅠ特異性參考區(qū)間具有重要價(jià)值。本研究通過對(duì)浙江地區(qū)健康女性aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平進(jìn)行分析，初步建立上述指標(biāo)在本地區(qū)健康女性中的參考區(qū)間，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2020 年1 月-2021 年5 月在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院體檢的健康婦女225例，年齡20～45 歲，平均年齡30.3 歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①有正常生育史；②年齡18～45 歲；③醫(yī)療記錄完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①血栓性或出血性疾病史；②不明原因流產(chǎn)史；③存在自身免疫性疾?。虎軔盒阅[瘤。本研究經(jīng)過浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：IRB-20210199-R），研究對(duì)象知情同意并簽署同意書。

1.2 方法 所有研究對(duì)象采空腹靜脈血3.5 ml，室溫放置30 min，以3000 r/min 離心10 min，分離血清。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)aCL IgM/IgG 和anti-β2GP ⅠIgM/IgG。儀器為山東煙臺(tái)艾德康ELISA600 全自動(dòng)酶免分析儀，檢測(cè)試劑盒由歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷公司提供。按照年齡分為＜30 歲組與≥30 歲組，比較不同年齡段aCL IgM/IgG 和antiβ2GPⅠIgM/IgG 水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。首先采用KoImogorov-smimov 檢驗(yàn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布以中位數(shù)及百分位數(shù)[M（P25～P75）]表示。兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康女性aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平正態(tài)性檢驗(yàn) 對(duì)健康女性aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平進(jìn)行KoImogorov-smimov 檢驗(yàn)結(jié)果顯示，各項(xiàng)目數(shù)據(jù)均呈偏態(tài)分布（P＜0.05），見表1。

表1 健康女性aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平正態(tài)性檢驗(yàn)（n=225）

2.2 不同年齡段aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG水平比較 ＜30 歲組與≥30 歲組aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同年齡段aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平比較［M(P25～P75)］

2.3 浙江地區(qū)健康女性aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平參考區(qū)間 浙江地區(qū)健康女性aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平參考區(qū)間的P90、P95和P99數(shù)據(jù)見表3。

表3 浙江地區(qū)健康女性aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平參考區(qū)間

3 討論

APS 是一種以aPL 持續(xù)陽(yáng)性，以易栓癥和病態(tài)妊娠為主要臨床特點(diǎn)的免疫性疾病[7，8]。aPL 是針對(duì)磷脂及磷脂結(jié)合蛋白的異質(zhì)抗體，主要靶抗原是β2GPⅠ和凝血酶原。aPL 具有高度異質(zhì)性，根據(jù)識(shí)別抗原的不同，主要分為狼瘡抗凝物（LA）、aCL 和anti-β2GPⅠ[9-11]。其中aCL 主要針對(duì)的抗原是雙磷脂酰甘油（心磷脂），實(shí)際是心磷脂和anti-β2GPⅠ形成的復(fù)合物，anti-β2GPⅠ主要針對(duì)的是β2GPⅠ（載脂蛋白H）[12]。健康人群及某些疾病狀態(tài)（梅毒、惡性腫瘤、藥物等）也可出現(xiàn)aPL 低滴度陽(yáng)性。aPL 持續(xù)陽(yáng)性是APS 的血清學(xué)標(biāo)志[13，14]。在APS 的診斷和分類標(biāo)準(zhǔn)中，2006 年國(guó)際血栓與止血學(xué)會(huì)修訂的抗磷脂綜合征分類標(biāo)準(zhǔn)是廣泛接受的標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定診斷APS 必須同時(shí)具備至少1 項(xiàng)臨床標(biāo)準(zhǔn)和至少1項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)。臨床標(biāo)準(zhǔn)包括血栓形成和病理妊娠，實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)包括LA、aCL 和anti-β2GPⅠ。實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)定義為：①血漿中LA 2 次檢測(cè)陽(yáng)性，2 次間隔至少12 周；②采用標(biāo)準(zhǔn)化的ELISA 方法檢測(cè)到血清中存在中-高滴度aCL（aCL IgM 抗體＞40 MPL；aCL IgG 抗體＞40 GPL；或滴度大于99 百分位數(shù)）。至少間隔12 周發(fā)現(xiàn)2 次；③采用標(biāo)準(zhǔn)化的ELISA 方法檢測(cè)到血清中存在中-高滴度anti-β2GPⅠ（滴度大于99 百分位數(shù)）。至少間隔12 周發(fā)現(xiàn)2 次[15]。從上述診斷標(biāo)準(zhǔn)可以看出，aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 滴度的99 百分位數(shù)值對(duì)于APS 的診斷非常重要。然而國(guó)內(nèi)許多實(shí)驗(yàn)室并未建立基于本地人群的參考區(qū)間，這已成為限制aCL IgM/IgG 和antiβ2GPⅠIgM/IgG 臨床應(yīng)用的重要原因。

目前，建立參考區(qū)間國(guó)內(nèi)通用的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)是WS/T 402-2012《臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定》。該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于納入數(shù)據(jù)的分布以及參考個(gè)體的分組均有明確規(guī)定。在本研究中aCL IgM/IgG和anti-β2GPⅠIgM/IgG 數(shù)據(jù)均為非正態(tài)分布，這與既往一些研究報(bào)道有所不同。導(dǎo)致這一差異的重要原因可能是納入人群不同，本研究中納入的均為健康女性，而已有研究納入人群多集中于抗磷脂綜合征、自身免疫病以及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)等患者[2，16]。因?yàn)閿?shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，本研究結(jié)果以百分位數(shù)[M(P25～P75)]表示，參考區(qū)間以P90、P95以及P95表示。

在aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平的影響因素中，自身免疫性疾病、腫瘤、梅毒非特異性抗體、服用某些藥物等是較為明確的因素，對(duì)于年齡因素研究相對(duì)較少[17-19]。根據(jù)WS/T 402-2012《臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定》要求，年齡是參考區(qū)間建立過程中重要的分組因素。目前，aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 檢測(cè)試劑盒在用參考區(qū)間只有基于國(guó)外人群的籠統(tǒng)數(shù)據(jù)，并未根據(jù)年齡進(jìn)行分組，也未明確年齡是否為上述指標(biāo)的影響因素。因此，本研究對(duì)＜30 歲組與≥30 歲組間aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，不同年齡段aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。因此，年齡不作為上述指標(biāo)參考區(qū)間的單獨(dú)分組因素。

本研究根據(jù)浙江地區(qū)健康女性的aCL IgM/IgG和anti-β2GPⅠIgM/IgG 數(shù)據(jù)，初步建立了本地區(qū)上述指標(biāo)的99 百分位數(shù)值：12.67 PL-U/ml（aCL IgM），5.75 PL-U/ml（aCL IgG），36.86 RU/ml（anti-β2GPⅠIgM）和8.44 RU/ml（anti-β2GPⅠIgG）。上述4 個(gè)指標(biāo)中，廠家提供的aCL IgM/IgG 診斷閾值為12 PL-U/ml，anti-β2GPⅠIgM/IgG 診斷閾值為20 RU/ml。除aCL IgM兩者較為接近，其它項(xiàng)目差異均較大，這可能是因?yàn)閺S家數(shù)據(jù)基于國(guó)外人群，而本研究針對(duì)浙江地區(qū)健康女性人群，兩者研究人群不同所致。

OAPS 是APS 的一種重要類型，2020 年發(fā)布的《產(chǎn)科抗磷脂綜合征診斷與處理專家共識(shí)》對(duì)OAPS的診斷及分類做了詳細(xì)說明。該指南明確了非典型OAPS 的診斷標(biāo)準(zhǔn)：具有APS 的臨床表現(xiàn)與不典型的實(shí)驗(yàn)室檢查，或者具有APS 的實(shí)驗(yàn)室檢查與不典型的臨床表現(xiàn)。2 次aPL 陽(yáng)性，但檢測(cè)時(shí)間間隔小于12 周，或者aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平滴度為第95～99 百分位數(shù)可以定義為不典型的實(shí)驗(yàn)室檢查[6]。本研究進(jìn)一步分析了浙江地區(qū)健康女性aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平的95百分位數(shù)，分別為6.04 PL-U/ml，3.44 PL-U/ml，25.57 RU/ml 和6.47 RU/ml。這對(duì)于非典型OAPS 的診斷具有一定的實(shí)用價(jià)值。

總之，本研究通過檢測(cè)健康女性血清aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平，分析了浙江地區(qū)健康女性aCL IgM/IgG 和anti-β2GPⅠIgM/IgG 水平的P90，P95和P99，初步建立了上述項(xiàng)目的參考區(qū)間，這對(duì)于APS，尤其是非典型OAPS 的診斷具有重要價(jià)值。