易 飛 張 軍 蔣莎莎 何 琴

成都市第三人民醫(yī)院1藥學(xué)部，2腫瘤科，成都 610031

2011年發(fā)布的《醫(yī)療機構(gòu)藥事管理規(guī)定》中指出：倡導(dǎo)醫(yī)療機構(gòu)根據(jù)臨床需要建立靜脈用藥調(diào)配中心(室)，危害藥品靜脈用藥應(yīng)當(dāng)實行集中調(diào)配供應(yīng)。此處危害藥品一般指細胞毒性藥品。細胞毒性藥品是指在生物學(xué)方面具有危害性的藥物，多為抗癌藥物。這類藥品通過皮膚接觸或吸入等方式攝入低劑量就能造成包括泌尿、肝腎系統(tǒng)的毒害，還可能致畸或損害生育功能[1]。目前有50余種細胞毒性藥物用于腫瘤的臨床治療[2]，但該50余種細胞毒性藥物并未包括抗腫瘤中成藥注射劑。抗腫瘤中成藥注射劑應(yīng)該按照一般靜脈用藥配置，還是細胞毒性藥物配置，目前還沒有依據(jù)。目前國家標(biāo)準(zhǔn)中藥治療腫瘤疾病的注射劑品種共計16個[3]，其中四川省可掛網(wǎng)采購的有6個品種，包括艾迪注射液、康萊特注射液、鴉膽子油乳注射液、康艾注射液(用于抗腫瘤或增效放、化療作用)以及復(fù)方苦參注射液和參芪扶正注射液(用于抗腫瘤輔助治療)。其中艾迪注射液、鴉膽子油乳注射液、康艾注射液及復(fù)方苦參注射液靜脈輸注前需要進行稀釋配置。

毒性程度怎樣的藥品需要進行靜脈用藥集中調(diào)配，目前尚無客觀標(biāo)準(zhǔn)，也無評價規(guī)范。參照醫(yī)療器械生物學(xué)評價-體外細胞毒性試驗操作流程及評價標(biāo)準(zhǔn)[4]，藥物配置時對人體接觸部位的直接毒性可類比于醫(yī)療器械(如乳膠手套)表面接觸部位的直接毒性。乳膠手套的直接細胞毒性是用其浸提液測試細胞的直接毒性，一般使用MTT法，其特點是快速靈敏，試驗周期短[5]。但在“醫(yī)療器械生物學(xué)評價-體外細胞毒性試驗操作流程及評價標(biāo)準(zhǔn)”中，還可用細胞相對增殖率來進行細胞毒性分級，其中0級/≥100%為無細胞毒性；1級/80%～99%為輕微細胞毒性；2級/50%～79%為輕度細胞毒性；3級/30%～49%為中度細胞毒性；4級/0～29%為重度細胞毒性[6]。無細胞毒性可參照一般靜脈用藥配置；輕微及輕度細胞毒性可使用第1類生物安全柜進行靜脈用藥配置；中度細胞毒性及重度細胞毒性可使用第2類生物安全柜進行靜脈用藥配置[7]。本實驗擬通過CCK8實驗測定艾迪注射液、鴉膽子油乳注射液、康艾注射液及復(fù)方苦參注射液的細胞相對增殖率，鑒定此4種常用抗腫瘤中成藥的直接細胞毒性，以指導(dǎo)是否需要用生物安全柜進行靜脈配置。

1 材料與方法

1.1 實驗樣品

鴉膽子油乳注射液(沈陽藥大雷允上藥業(yè)有限責(zé)任公司)、艾迪注射液(貴州益佰制藥股份有限公司)、康艾注射液(長白山制藥股份有限公司)及復(fù)方苦參注射液(山西振東制藥股份有限公司)均參照藥品說明書中建議配置的濃度范圍設(shè)置稀釋濃度區(qū)間。中成藥注射液為復(fù)合物，其稀釋濃度均為溶液體積配比。其中鴉膽子油乳注射液稀釋的體積配比梯度為10/250 mL，15/250 mL，20/250 mL，25/250 mL，30/250 mL；艾迪注射液稀釋的體積配比梯度為56/500 mL，63/500 mL，71/500 mL，83/500 mL，100/500 mL，125/500 mL；康艾注射液稀釋的體積配比梯度為40/500 mL，60/500 mL，80/500 mL，100/500 mL，120/500 mL；艾迪注射液稀釋的體積配比為20/200 mL。

1.2 實驗用細胞系

小鼠成纖維細胞L929：購自中國科學(xué)院細胞庫，是L母細胞亞克隆，系W.R.Earle于1940年采取連續(xù)細胞培養(yǎng)建立的最早細胞株之一。L細胞株來自100天雄性C3H/An小鼠正常成纖維細胞。

1.3 主要器材和試劑

酶聯(lián)免疫檢測儀(PerkinElmer)，96孔酶標(biāo)板(costar)，CO2恒溫孵箱(Thermo)，無菌超凈臺(Heal Force)，體外培養(yǎng)用玻璃器皿(HyClone)。

CCK8試劑(biosharp)，細胞培養(yǎng)液(HyClone)，新鮮胎牛血清(四季青)等。

1.4 實驗方法

將制備好的細胞懸液接種于96孔板內(nèi)，待細胞著床后加入供試液，于37℃ 5% CO2孵箱中培養(yǎng)48 h，然后加入CCK8試劑。繼續(xù)在37℃ 5% CO2孵箱內(nèi)培養(yǎng)1 h。用酶聯(lián)免疫檢測儀采用雙波長的方法測定光密度，通過與對照組的比較得到實驗組的增殖率。各對照組均為不加藥物處理組，實驗組與對照組均平行設(shè)置6個復(fù)孔。

2 結(jié)果

2.1 鴉膽子油乳注射液的體外細胞相對增殖率及毒性

相對空白對照組，鴉膽子油乳注射液稀釋體積比為10/250 mL及15/250 mL時，細胞相對增殖率在80%～99%區(qū)間，為輕微細胞毒性；藥品稀釋體積比為20/250 mL、25/250 mL及30/250 mL時，細胞相對增殖率在50%～79%區(qū)間，為輕度細胞毒性。見表1。

2.2 艾迪注射液的體外細胞相對增殖率及毒性

相對空白對照組，艾迪注射液稀釋體積比為56/500 mL及63/500 mL時，細胞相對增殖率在80%～99%區(qū)間，為輕微細胞毒性；藥品稀釋體積比為71/500 mL、83/500 mL、100/500 mL及125/500 mL時，細胞相對增殖率在50%～79%區(qū)間，為輕度細胞毒性。見表2。

2.3 康艾注射液的體外細胞相對增殖率及毒性

相對空白對照組，康艾注射液稀釋體積比為40/500 mL、60/500 mL、80/500 mL及100/500 mL時，細胞相對增殖率≥100%，無細胞毒性；藥品稀釋體積比為120/500 mL時，細胞相對增殖率在80%～99%區(qū)間，為輕微細胞毒性。見表3。

2.4 復(fù)方苦參注射液的體外細胞相對增殖率及毒性

相對空白對照組，復(fù)方苦參注射液稀釋體積比為20/200 ml時，細胞相對增殖率在30%～49%區(qū)間，為中度細胞毒性。見表4。

表1 鴉膽子油乳注射液各稀釋體積比的吸光度值及細胞相對增殖率

表2 艾迪注射液各稀釋體積比的吸光度值及細胞相對增殖率

表3 康艾注射液各稀釋體積比的吸光度值及細胞相對增殖率

表4 復(fù)方苦參注射液稀釋體積比的吸光度值及細胞相對增殖率

3 討論

本研究以各藥品說明書建議的稀釋體積比設(shè)實驗組，相對空白對照組，復(fù)方苦參注射液的細胞相對增殖率在30%～49%區(qū)間；鴉膽子油乳注射液、艾迪注射液的細胞相對增殖率在50%～99%區(qū)間；康艾注射液大部分的細胞相對增殖率≥100%；提示康艾注射液40～60 mL配置到250～500 mL液體中，細胞相對增殖率顯示為輕微或無細胞毒性；其作為一個益氣扶正、增強免疫功能的藥物，可以進行一般靜脈用藥配置。鴉膽子油乳注射液說明書建議配置方法為10～30 mL加入滅菌生理鹽水250 mL；艾迪注射液說明書建議配置方法為50～100 mL，加入生理鹽水或5%～10%葡萄糖注射液400～450 mL中；該2種藥品細胞相對增殖率均顯示低濃度時為輕微細胞毒性，稍高濃度為輕度細胞毒性，建議可使用第1類生物安全柜進行靜脈用藥配置。復(fù)方苦參注射液說明書建議藥品稀釋體積比為20/200 mL，細胞相對增殖率顯示為中度細胞毒性，建議可使用第2類生物安全柜進行靜脈用藥配置。

CCK8法測定細胞相對增殖率只是檢測抗腫瘤中成藥的直接細胞毒性，而評價一個藥物生物學(xué)方面的危害除了直接細胞毒性外，評價皮膚接觸或吸入等方式攝入低劑量所造成的毒害，以及致畸性或?qū)ιδ艿膿p害可能更有價值；這些方面的評價需要進行動物實驗研究，但目前醫(yī)藥行業(yè)內(nèi)均無相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)范，有待進一步通過毒理學(xué)實驗進行探討。