王佳琪，夏慶欣，陳瑜，張冰

河南省腫瘤醫(yī)院病理科，鄭州 450000

結(jié)直腸癌是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤，流行病學(xué)調(diào)查顯示，中國(guó)2015年結(jié)直腸癌發(fā)病率居全部惡性腫瘤的第三位，病死率居第五位，且發(fā)病率呈持續(xù)升高趨勢(shì)[1]。目前，隨著臨床醫(yī)學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制進(jìn)行了廣泛研究，多種生物標(biāo)志物被證實(shí)可用于結(jié)直腸癌的診斷、病情評(píng)估及預(yù)后預(yù)測(cè)，為臨床治療提供了一定參考。人轉(zhuǎn)膠蛋白（transgelin）于1987年被首次提出，其在不同物種中的表達(dá)高度保守，主要表達(dá)于細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)中，可與凝膠劑進(jìn)行反應(yīng)并發(fā)揮穩(wěn)定作用。研究表明，transgelin與肌動(dòng)蛋白絲束有一定相關(guān)性，而肌動(dòng)蛋白絲束可形成足體，促使組織侵襲性增加[2-3]。目前，已有臨床研究指出，宮頸癌、消化系統(tǒng)惡性腫瘤中可檢測(cè)到transgelin蛋白表達(dá)的下調(diào)，其表達(dá)水平與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4-5]。目前，已有部分研究針對(duì)結(jié)腸癌transgelin蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行了研究，但其與結(jié)腸癌患者臨床特征、預(yù)后的關(guān)系仍需進(jìn)一步研究證實(shí)。本研究探討transgelin在結(jié)腸癌中的表達(dá)，并分析其與患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，旨在為結(jié)腸癌患者的病情和預(yù)后評(píng)估提供參考，也為分子靶向標(biāo)志物的深入研究提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2018年2月河南省腫瘤醫(yī)院收治的475例結(jié)腸癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均為首次接受治療；②經(jīng)病理學(xué)檢查確診為結(jié)腸癌；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重器質(zhì)性病變；②合并自身免疫性疾病。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入475例結(jié)腸癌患者，其中男256例，女219例；年齡45～73歲，中位年齡58歲；腫瘤直徑2～7 cm，平均（3.12±0.85）cm；分化程度：低分化122例，中分化163例，高分化190例；浸潤(rùn)深度：未累及漿膜222例，累及漿膜253例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移178例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移297例；Dukes分期：A期142例，B期146例，C期134例，D期53例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 免疫組化法檢測(cè)transgelin蛋白的表達(dá)情況

取475例結(jié)腸癌患者的結(jié)腸癌組織及50例距病灶5 cm以外的癌旁組織。組織標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片，厚度4μm，脫蠟水化后加入5%牛血清白蛋白37℃孵育10 min。加入一抗（稀釋濃度為1∶200），4℃孵育過(guò)夜，室溫放置10 min后磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗 3次；加入二抗（稀釋濃度為 1∶1000），37 ℃孵育30 min，PBS清洗3次；加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，PBS清洗3次。二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色5 min，鏡檢掌握染色程度，自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封固等，然后在顯微鏡下觀察。

結(jié)果判定：transgelin蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜，細(xì)胞質(zhì)著色或細(xì)胞核出現(xiàn)黃染顆粒判定為陽(yáng)性細(xì)胞，采用半定量法進(jìn)行評(píng)定[6]：依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評(píng)分，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例＜10%計(jì)1分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例10%～50%計(jì)2分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例＞50%計(jì)3分；依據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分，無(wú)著色計(jì)0分，黃色染色計(jì)1分，淺棕色染色計(jì)2分，棕褐色染色計(jì)3分。將染色強(qiáng)度評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分相乘，≤4分判定為陰性表達(dá)，＞4分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 隨訪

采用門診及電話隨訪的方式對(duì)所有患者進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間截至2020年4月，記錄患者的總生存期（overall survival，OS）和無(wú)進(jìn)展生存期（progression-free survival，PFS），OS指明確診斷至全因性死亡的時(shí)間，PFS指明確診斷至隨訪復(fù)發(fā)的時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，-組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)；結(jié)腸癌患者預(yù)后的影響因素采用多因素Cox回歸分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 transgelin蛋白表達(dá)情況的比較

結(jié)腸癌組織中transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為42.32%（201/475），低于癌旁組織的88.00%（44/50），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=37.934，P＜0.01）。（圖1）

圖1 結(jié)腸癌組織中transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)免疫組化染色圖

2.2 不同臨床特征結(jié)腸癌患者transgelin蛋白表達(dá)情況的比較

不同年齡、性別、腫瘤大小和分化程度結(jié)腸癌患者結(jié)腸癌組織中transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。浸潤(rùn)深度累及漿膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期為C～D期結(jié)腸癌患者結(jié)腸癌組織中transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別明顯低于浸潤(rùn)深度未累及漿膜、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期為A～B期患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 不同臨床特征結(jié)腸癌患者transgelin蛋白表達(dá)情況的比較（ n=475）

2.3 預(yù)后情況的比較

所有患者均獲得隨訪，隨訪時(shí)間16～51個(gè)月，中位隨訪38個(gè)月，transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者的平均 PFS 為46.081個(gè)月（95%CI：44.717～47.445），明顯長(zhǎng)于transgelin蛋白陰性表達(dá)患者的43.050個(gè)月（95%CI：41.899～44.200），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=33.256，P＜0.01）；transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)患者的平均OS為47.128個(gè)月（95%CI：45.824～48.432），明顯長(zhǎng)于transgelin蛋白陰性表達(dá)患者的44.241個(gè)月（95%CI：43.053～45.428），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=18.003，P＜0.01）。（圖2、圖3）

圖2 transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)（ n=201）和transgelin蛋白陰性表達(dá)（ n=274）結(jié)腸癌患者的PFS曲線

圖3 transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)（ n=201）和transgelin蛋白陰性表達(dá)（ n=274）結(jié)腸癌患者的OS曲線

2.4 結(jié)腸癌患者預(yù)后影響因素單因素和多因素分析

多因素Cox分析結(jié)果顯示，年齡≥60歲、浸潤(rùn)深度累及漿膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期為C～D期均是結(jié)直腸癌患者PFS、OS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)均是結(jié)腸癌患者PFS、OS的獨(dú)立保護(hù)因素（P＜0.05）。（表2、表3）

表2 結(jié)腸癌患者PFS影響因素的單因素和多因素分析

表3 結(jié)腸癌患者OS影響因素的單因素和多因素分析

3 討論

transgelin蛋白主要分布于平滑肌組織中，是平滑肌分化的早期分子標(biāo)志物。多項(xiàng)研究證實(shí)，transgelin蛋白在惡性腫瘤中表達(dá)水平明顯下調(diào)[7-8]；體外研究也表明，transgelin蛋白表達(dá)下調(diào)有利于細(xì)胞足體的形成，可使細(xì)胞向惡性細(xì)胞方向發(fā)展[9]。既往已有研究探討不同惡性腫瘤組織中transgelin蛋白的表達(dá)情況，但不同研究、不同惡性腫瘤組織transgelin表達(dá)變化存在一定差異，國(guó)外開(kāi)展的全球基因表達(dá)譜研究結(jié)果表明，transgelin蛋白在前列腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌組織中表達(dá)水平明顯降低[10]，但周靜等[11]采用體外實(shí)驗(yàn)分析結(jié)腸癌細(xì)胞系transgelin蛋白的表達(dá)情況及其與細(xì)胞侵襲的關(guān)系，結(jié)果顯示，transgelin蛋白過(guò)表達(dá)細(xì)胞的增殖能力明顯降低。但解燕川等[12]探討transgelin蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及意義，證實(shí)胃腺癌組織中transgelin蛋白表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，且其表達(dá)水平與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小密切相關(guān)。

本研究采用免疫組化法檢測(cè)結(jié)腸癌組織及癌旁組織中transgelin蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，結(jié)腸癌組織中transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為42.32%，低于癌旁組織的88.00%，提示transgelin蛋白表達(dá)下調(diào)可能與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)；此外，本研究中部分患者transgelin蛋白在癌旁組織中呈陰性表達(dá)，這可能是因?yàn)閠ransgelin基因可能在結(jié)腸癌發(fā)生時(shí)被激活，從而產(chǎn)生了大量的transgelin蛋白，陰性表達(dá)可能預(yù)示著惡變傾向。本研究結(jié)果顯示，浸潤(rùn)深度累及漿膜、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期為C～D期結(jié)腸癌患者結(jié)腸癌組織中transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別明顯低于浸潤(rùn)深度未累及漿膜、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期為A～B期患者（P＜0.01），提示transgelin蛋白表達(dá)水平可能與惡性腫瘤侵襲性密切相關(guān)。推測(cè)transgelin蛋白與結(jié)腸癌的發(fā)生及其生物學(xué)行為密切相關(guān)，這可能是因?yàn)閠ransgelin蛋白與肌動(dòng)蛋白活性相關(guān)，transgelin蛋白表達(dá)下調(diào)可能降低肌動(dòng)蛋白活性，引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。研究表明，transgelin蛋白可通過(guò)調(diào)節(jié)ERK活性調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9，MMP9）的表達(dá)，介導(dǎo)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程，從而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展[13]。

為探究transgelin蛋白與結(jié)腸癌患者預(yù)后的關(guān)系，本研究分析了不同transgelin蛋白表達(dá)情況結(jié)腸癌患者的預(yù)后，結(jié)果顯示，transgelin蛋白陽(yáng)性表達(dá)組患者PFS、OS均明顯長(zhǎng)于transgelin蛋白陰性表達(dá)組患者。在校正Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素后，transgelin蛋白陽(yáng)性是結(jié)腸癌患者預(yù)后生存的獨(dú)立保護(hù)因素。transgelin蛋白陰性患者預(yù)后較差可能與以下兩方面原因有關(guān)：①transgelin蛋白陰性表達(dá)患者更易發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后不佳。②transgelin蛋白表達(dá)與部分化療藥物的耐藥性密切相關(guān)，其表達(dá)水平可能通過(guò)影響治療效果來(lái)影響患者預(yù)后[14-15]。

綜上所述，transgelin蛋白表達(dá)與結(jié)腸癌患者臨床特征、預(yù)后密切相關(guān)，臨床可通過(guò)檢測(cè)其表達(dá)水平來(lái)評(píng)估患者的病情及預(yù)后，為臨床治療提供一定參考。但本研究結(jié)果仍需進(jìn)一步驗(yàn)證，且隨訪時(shí)間相對(duì)較短，未來(lái)仍有待進(jìn)一步延長(zhǎng)隨訪時(shí)間進(jìn)行探討。