楊宗英，姚 毅，曾柳根，嚴(yán)保華，雷小青，熊春賢，許亮清

(南昌市農(nóng)業(yè)科學(xué)院，江西 南昌 330038)

隨著稻田養(yǎng)殖克氏原螯蝦(小龍蝦)規(guī)模日益擴(kuò)大，小龍蝦病害逐年增多，白斑綜合征病毒(WSSV)引起的暴發(fā)性疾病已經(jīng)成為制約稻田小龍蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素之一。筆者通過(guò)在江西省鄱陽(yáng)湖區(qū)實(shí)地調(diào)查稻田蝦白斑綜合征的發(fā)病情況，結(jié)合定點(diǎn)取樣及水質(zhì)因子的測(cè)定，初步找出了WSSV 致病的相關(guān)環(huán)境因子，以期為養(yǎng)殖戶防控小龍蝦WSSV暴發(fā)提供技術(shù)指導(dǎo)。

一、研究方法

稻田養(yǎng)殖克氏原螯蝦的大規(guī)模放苗時(shí)間一般從3 月初開(kāi)始，規(guī)格較大的苗種在5 月即可上市。調(diào)查期間，筆者對(duì)江西省鄱陽(yáng)湖區(qū)稻田養(yǎng)殖小龍蝦情況進(jìn)行了實(shí)地跟蹤，利用便攜式水質(zhì)分析儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)水體pH、溫度、溶氧、氨氮等水質(zhì)指標(biāo)。在發(fā)現(xiàn)病蝦時(shí)，除了記錄發(fā)病癥狀，還通過(guò)優(yōu)勢(shì)菌的分離、回感、寄生蟲(chóng)鏡檢以及WSSV 的定性和定量檢測(cè)等方法來(lái)確定病因。

二、發(fā)病癥狀

2021年5月初，筆者發(fā)現(xiàn)部分稻田開(kāi)始出現(xiàn)病蝦。癥狀表現(xiàn)主要是吃食量下降、活動(dòng)能力減弱、趴邊、外殼顏色加深，蛻殼后的小龍蝦外殼鈣化比較慢、殼薄且脆、肝胰腺顏色變淡，嚴(yán)重者肝胰腺呈糨糊狀。

筆者對(duì)發(fā)病小龍蝦(圖1)的肝胰腺和鰓等組織進(jìn)行優(yōu)勢(shì)菌的分離和16S rDNA 測(cè)序分析，獲得的優(yōu)勢(shì)菌分別是庫(kù)特氏菌和弗氏檸檬酸桿菌，且回感均未出現(xiàn)癥狀；鏡檢僅在鰓上發(fā)現(xiàn)了少量的固著類纖毛蟲(chóng)，且病蝦和正常蝦差異不大；WSSV 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)病蝦攜帶的WSSV 量顯著高于正常蝦，由此判定此次小龍蝦發(fā)病是由于WSSV感染導(dǎo)致。

圖1 病蝦

三、WSSV攜帶情況

連續(xù)3個(gè)月采集江西省鄱陽(yáng)湖區(qū)恒湖墾殖場(chǎng)稻田養(yǎng)殖小龍蝦150 尾，來(lái)自15 塊稻田。檢測(cè)發(fā)現(xiàn)4月小龍蝦的WSSV攜帶率為15.8%，肝胰腺WSSV平均攜帶量為0.33拷貝/微克DNA，鰓的WSSV平均攜帶量為0.38 拷貝/微克DNA；5 月小龍蝦WSSV 攜帶率為23.6%，肝胰腺平均攜帶量為0.47 拷貝/微克DNA，鰓平均攜帶量為0.54 拷貝/微克DNA；6 月小龍蝦WSSV 攜帶率為33.9%，肝胰腺平均攜帶量為0.76 拷貝/微克DNA，鰓平均攜帶量為0.85 拷貝/微克DNA。

四、定點(diǎn)監(jiān)測(cè)

筆者選擇3塊發(fā)病稻田和3塊正常稻田進(jìn)行定點(diǎn)監(jiān)測(cè)，從發(fā)病稻田和正常稻田中選擇病蝦和健康蝦進(jìn)行兩個(gè)月持續(xù)的WSSV 定性和定量檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無(wú)論是發(fā)病蝦還是健康蝦都存在攜帶WSSV的情況，且在6月，無(wú)論是病蝦還是正常蝦的WSSV攜帶量普遍高于5 月，鰓的WSSV 攜帶量始終高于肝胰腺的WSSV攜帶量(表1)。

表1 定點(diǎn)監(jiān)測(cè)小龍蝦WSSV攜帶情況

五、發(fā)病與環(huán)境因子的相關(guān)性分析

經(jīng)過(guò)4、5、6月的調(diào)查跟蹤，筆者發(fā)現(xiàn)發(fā)病稻田和正常稻田水質(zhì)的顯著性差異是氨氮和溶氧，而pH、溫度等指標(biāo)差異性不大，由此看出小龍蝦感染W(wǎng)SSV后發(fā)病與水質(zhì)環(huán)境關(guān)系密切，且與水體的氨氮、溶氧量直接相關(guān)(表2)。

表2 定點(diǎn)監(jiān)測(cè)稻田的水質(zhì)變化情況

六、總結(jié)與討論

通過(guò)本研究可知，稻田養(yǎng)殖小龍蝦感染W(wǎng)SSV 的情況也已經(jīng)非常普遍。WSSV 易感宿主種類繁多，如枝角類、橈足類等都能夠成為該病毒的中間宿主，小龍蝦養(yǎng)殖過(guò)程中也可能通過(guò)攝食中間宿主感染W(wǎng)SSV。除此之外，水體中的浮游微藻也能夠攜帶WSSV。本研究發(fā)現(xiàn)與水體直接接觸的鰓組織病毒載量高于肝胰腺的病毒載量，可能與存在于水環(huán)境中的WSSV有關(guān)。

稻田養(yǎng)殖小龍蝦感染W(wǎng)SSV 發(fā)病和水質(zhì)環(huán)境關(guān)系密切，本研究發(fā)現(xiàn)影響小龍蝦WSSV 發(fā)病的直接環(huán)境因子為高氨氮和低溶氧。郝晨光(2020)研究表明高氨氮和高亞硝態(tài)氮脅迫會(huì)促進(jìn)WSSV 在蝦體內(nèi)增殖，加速克氏原螯蝦的死亡。徐日俊等(2020)研究表明溶氧、pH 及氨氮等環(huán)境因素同WSSV 的發(fā)生直接相關(guān)，溶氧、氨氮及亞硝態(tài)氮等水環(huán)境指標(biāo)可作為WSSV 發(fā)生的預(yù)警因子。值得注意的是，小龍蝦存在帶毒不發(fā)病的情況，本研究就發(fā)現(xiàn)了高病毒載量但在優(yōu)質(zhì)水體環(huán)境中不發(fā)病的情況。因此針對(duì)稻田養(yǎng)殖小龍蝦WSSV 的防控，應(yīng)該多從生態(tài)防控方面入手，制定高效防控策略，保護(hù)生態(tài)環(huán)境。

1.嚴(yán)控苗種來(lái)源 由于目前小龍蝦“帶毒”的現(xiàn)象已經(jīng)非常普遍，因此在選擇苗種時(shí)應(yīng)該盡量從非疫區(qū)引進(jìn)，有條件的養(yǎng)殖者可取樣進(jìn)行苗種WSSV的檢測(cè)，做到心里有數(shù)。

2.精細(xì)化日常管理 除了小龍蝦攜帶WSSV，水體環(huán)境中也存在WSSV，在苗種下塘前要進(jìn)行全面仔細(xì)的消毒；養(yǎng)殖過(guò)程中要用心保草、護(hù)草，保證水體環(huán)境不發(fā)生劇烈變動(dòng)；遵守“三定”原則進(jìn)行飼料投喂，保證小龍蝦的營(yíng)養(yǎng)供給，以提高其免疫力。

3.發(fā)現(xiàn)病蝦，及時(shí)撈出 出現(xiàn)病蝦時(shí)及時(shí)撈出，防止病蝦被蠶食造成交叉感染；一旦發(fā)現(xiàn)小龍蝦因感染W(wǎng)SSV 而出現(xiàn)暴發(fā)性死亡，應(yīng)該將其全部起捕，防止造成更嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。