楊培民,金廣海,劉義新,王 雷,解 涵,胡宗云
( 遼寧省淡水水產(chǎn)科學(xué)研究院,遼寧省水生動(dòng)物病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧 遼陽(yáng) 111000 )
瓦氏雅羅魚(yú)(Leuciscuswaleckii)俗稱(chēng)華子魚(yú)、滑魚(yú)、沙包,屬鯉科、雅羅魚(yú)亞科、雅羅魚(yú)屬[1],廣泛分布于我國(guó)三北地區(qū)天然水域,在東北地區(qū)屬“三花五羅”中的“五羅”之一,也是遼寧省重要的土著經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)[2],具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。瓦氏雅羅魚(yú)肌肉營(yíng)養(yǎng)成分均衡,味道鮮美[3-4];此外,該魚(yú)具有優(yōu)良的耐鹽堿、耐寒特性[4],在提升鹽堿水域開(kāi)發(fā)利用效率上極具推廣價(jià)值。目前,有關(guān)瓦氏雅羅魚(yú)的研究主要集中在池塘養(yǎng)殖[5-6]、漁業(yè)生物學(xué)[7-8]、耐鹽堿機(jī)制研究[9-11]、群體遺傳學(xué)[12-13]等方面,有關(guān)瓦氏雅羅魚(yú)早期生活史的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。筆者對(duì)瓦氏雅羅魚(yú)的胚后發(fā)育和早期生長(zhǎng)進(jìn)行研究,以期為豐富瓦氏雅羅魚(yú)仔、稚魚(yú)生物學(xué)特性提供參考。
本試驗(yàn)在遼寧省淡水水產(chǎn)科學(xué)研究院試驗(yàn)基地進(jìn)行,親魚(yú)源自鴨綠江水系,全長(zhǎng)(28.00±1.41) cm,體質(zhì)量(275.74±44.72) g。2019年3月26日按如下劑量注射催產(chǎn)激素:每千克雌魚(yú)注射促黃體素釋放激素類(lèi)似物2號(hào)15 μg、絨毛膜促性腺激素2000 IU及馬來(lái)酸地歐酮15 mg,雄魚(yú)劑量減半。在水溫10.4~13.8 ℃、溶解氧3.9~10.4 mg/L的環(huán)境下,注射激素48~52 h后采用干法受精獲得受精卵,脫黏處理后置于40目篩絹錐體孵化桶內(nèi)孵化。受精卵經(jīng)13 d孵出仔魚(yú),隨機(jī)挑選1000尾仔魚(yú),置于架設(shè)在池塘(面積0.8 hm2,平均水深2.0 m)內(nèi)的一個(gè)2.0 m×1.0 m×1.5 m的40目篩絹網(wǎng)箱內(nèi)培育,放養(yǎng)密度為450尾/m3。培育期間采用水質(zhì)在線(xiàn)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)(魚(yú)兒樂(lè)X5,南京祿輝物聯(lián)科技有限公司)記錄池塘水溫和溶解氧含量的變化(圖1)。試驗(yàn)全程采用山東升索漁用飼料研發(fā)中心生產(chǎn)的微粒子配合飼料:前期(6~35日齡)采用S1型微顆粒飼料(粒徑150~300 μm,粗蛋白含量>50%);后期(36~67日齡)投喂S2型微顆粒飼料(粒徑300~600 μm,粗蛋白含量>50%)。每日于8:00、11:00、14:00和17:00各投喂1次,前期按3~5 g/(千尾·次)投喂,后期按5~8 g/(千尾·次)投喂。為保持網(wǎng)箱的透水性,每隔20 d更換網(wǎng)箱1次。
圖1 試驗(yàn)期間水溫和溶解氧質(zhì)量濃度的日變化
參照文獻(xiàn)[14]的方法,將仔、稚魚(yú)形態(tài)發(fā)育劃分為卵黃囊期仔魚(yú)、后期仔魚(yú)和稚魚(yú)3個(gè)階段。根據(jù)仔、稚魚(yú)形態(tài)發(fā)育規(guī)律,0~10日齡時(shí),每天取樣1次,11~30日齡,每2 d取樣1次;31日齡后,3~5 d取樣1次。每次取樣數(shù)不低于20尾,樣品置于載玻片或培養(yǎng)皿中,在體視顯微鏡(SZ66,重慶奧特)下進(jìn)行活體觀察和拍照(Canon Power shot G11,日本)。以臺(tái)微尺為參照配合圖像處理軟件ImageJ(Version 1.52a)測(cè)量全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、卵黃囊長(zhǎng)徑及短徑等參數(shù),精確至0.01 mm。
采用Excel 2016軟件計(jì)算各次測(cè)量參數(shù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差,全長(zhǎng)的生長(zhǎng)曲線(xiàn)以及卵黃囊體積變化分別采用Excel 2016 擬合、作圖,以決定系數(shù)r2最大或殘差平方和最小為擬合標(biāo)準(zhǔn)。
卵黃囊體積(V,mm3)計(jì)算公式為:
V=πRr2/6
式中,R為卵黃囊長(zhǎng)徑(mm),r為卵黃囊短徑(mm)。
全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率(RSG,%/d)計(jì)算公式為:
RSG=(lnL2-lnL1)/(t2-t1)×100%
式中,t1、t2為日齡(d),L1、L2分別為t1、t2時(shí)的全長(zhǎng)(mm)。
瓦氏雅羅魚(yú)產(chǎn)具有黏性的沉性卵,卵呈圓形,帶有橄欖色(圖2a),卵徑(2.53±0.09) mm,卵膜較厚,胚體不易觀察。在10.4~13.8 ℃環(huán)境下,孵化期為13 d。根據(jù)仔、稚魚(yú)形態(tài)特征變化,瓦氏雅羅魚(yú)胚后發(fā)育可細(xì)分為卵黃囊期(0~8日齡)、后期仔魚(yú)期(9~54日齡)及稚魚(yú)期(55~67日齡)。
2.1.1 卵黃囊期(初孵仔魚(yú)至卵黃囊吸收完全,0~8日齡)
0日齡:全長(zhǎng)(7.04±0.30) mm,身體呈半透明狀,后半部由透明鰭膜包裹。頭部略帶淡黃色,眼睛外凸呈黑色,耳石、鰓弓及胸鰭芽輪廓清晰,頭背部有少量黑色素沉著;腹部有一長(zhǎng)梨形卵黃囊:前部膨大呈球形,后部細(xì)長(zhǎng)呈棒狀;心臟位于卵黃囊前端,呈囊狀,平均心率為81次/分,卵黃囊前端和尾柄腹側(cè)可見(jiàn)明顯的紅色血細(xì)胞流動(dòng);肌節(jié)41~43對(duì),呈“V”排列(圖2b)。初孵仔魚(yú)常側(cè)臥水底,無(wú)明顯運(yùn)動(dòng)。
2日齡:全長(zhǎng)(7.60±0.42) mm,鰾原基出現(xiàn),卵黃囊前端明顯縮小,胸鰭擴(kuò)張呈扇形;仔魚(yú)頭部、背部及卵黃囊與軀體交界處有樹(shù)枝狀黑色素分布;口裂形成,但上、下頜不能開(kāi)合;鰾原基下方的消化道形成:前端開(kāi)闊如喇叭狀,后端細(xì)長(zhǎng)如管狀(圖3a);眼睛的晶體呈黑色,外周玻璃體略帶灰褐色(圖2c)。肛凹后緣紅色血流明顯,附近膀胱清晰可見(jiàn)(圖3b)。仔魚(yú)常聚集于背光處,受刺激后可做短促“竄動(dòng)”。
3日齡:全長(zhǎng)(7.77±0.42) mm,鰾充氣膨脹呈橢圓形,體表尤其是背部、卵黃囊與脊椎交界處的黑色素明顯增多,上、下頜可以開(kāi)合,肛門(mén)后緣腹側(cè)紅色血流仍很明顯(圖2d)。消化道前端內(nèi)壁褶皺明顯(圖3c),后端與肛門(mén)貫通。此時(shí),仔魚(yú)運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng),常做上浮運(yùn)動(dòng)。
6日齡:全長(zhǎng)(8.49±0.34) mm,仔魚(yú)開(kāi)口攝食,50%以上個(gè)體腸道內(nèi)充塞著食物;以鰾為界,卵黃囊被分割成前后兩部分:前部呈塊狀,后部呈三角形;頭部和背部略帶淡黃色,尾柄腹側(cè)紅色的血流變得模糊(圖2e)。此時(shí),仔魚(yú)可以“平游”。
8日齡:全長(zhǎng)(8.90±0.27) mm,卵黃囊消失,鰾膨大呈狹長(zhǎng)形,腹側(cè)肛門(mén)前部鰭?cǎi)奕暂^寬大,背部及尾柄腹側(cè)鰭?cǎi)奘湛s明顯(圖2f)。頂面觀,仔魚(yú)頭的背部略帶黃色;眼睛外凸,外側(cè)包裹一層透明的膜,胸鰭末端可延伸至鰾的前部1/4處(圖3d)。此時(shí),仔魚(yú)攝食旺盛,可上浮至水面吞食粉料。
圖2 瓦氏雅羅魚(yú)仔、稚魚(yú)形態(tài)發(fā)育
2.1.2 后期仔魚(yú)期(卵黃囊吸收完畢至各鰭條發(fā)育完善,鱗片出現(xiàn),9~54日齡)
10日齡:全長(zhǎng)(9.19±0.42) mm,脊索末端開(kāi)始向上彎曲,仔魚(yú)背部、尾柄腹側(cè)及脊索末端黑色素明顯增多;在反射光下,仔魚(yú)軀體呈淡黃色(圖2g)。尾鰭有放射狀彈性絲生成(圖3e)。
13日齡:全長(zhǎng)(9.62±0.40) mm,仔魚(yú)背鰭、臀鰭開(kāi)始分化,脊索末端上彎至約15°角(圖2h);尾鰭下葉有鰭條出現(xiàn)(圖3f)。
18日齡:全長(zhǎng)(11.68±1.28) mm,鰾前室形成,背部和尾柄處鰭?cǎi)尴?,背鰭條和臀鰭條出現(xiàn):背鰭條4~5枚、臀鰭條3~4枚(圖2i)。脊索末端上彎至約45°角,尾下骨出現(xiàn)(圖3g)。
25日齡;全長(zhǎng)(14.19±1.18) mm,尾鰭中央內(nèi)凹,尾鰭條分節(jié);腹鰭芽出現(xiàn),腸道上方體表開(kāi)始有虹彩細(xì)胞生成,腹側(cè)局部呈銀色(圖2j)。
29日齡:全長(zhǎng)(16.74±1.87) mm,腹鰭鰭條形成,腹部鰭?cǎi)廾黠@收縮;虹彩細(xì)胞擴(kuò)展至鰓蓋和整個(gè)腹部,鰾、腸道等內(nèi)部器官不可觀察;眼睛晶體外周玻璃體呈亮銀色(圖2k)。
39日齡:全長(zhǎng)(22.72±3.11) mm,各鰭發(fā)育完善,僅在肛門(mén)至腹鰭基存在小部分鰭?cǎi)?;體側(cè)的銀色區(qū)域擴(kuò)展至尾柄的脊椎位置。仔魚(yú)背部呈青色,軀體肌肉明顯增加,脊椎和肋骨不宜觀察(圖2l)。
2.1.3 稚魚(yú)期(鱗片出現(xiàn)至全身被鱗,55~67日齡)
55日齡:全長(zhǎng)(25.92±2.66) mm,鱗片出現(xiàn)在尾柄處脊椎骨附近的體表,初生鱗為近圓形,帶有1~2 個(gè)鱗紋(圖3h),長(zhǎng)徑和短徑分別為(0.54±0.02) mm、(0.35±0.03) mm。自然光下,魚(yú)體頭背部略帶淺黃色,背部呈青色,體側(cè)大部由銀色反光物質(zhì)覆蓋(圖2m)。
圖3 瓦氏雅羅魚(yú)仔、稚魚(yú)局部特征
59日齡:全長(zhǎng)(25.98±2.74) mm,鰓蓋后緣、魚(yú)體腹部出現(xiàn)鱗片,其中腹部鱗片近圓形,帶有2~3個(gè)鱗紋(圖3i),直徑(0.36±0.05) mm。魚(yú)體頭部黃色減淡,肉眼可觀察到體側(cè)的鱗片(圖2n)。
67日齡:全長(zhǎng)(29.84±3.21) mm,除頭部外,魚(yú)體全身被鱗;魚(yú)體背部和頭部略帶青黃色,體側(cè)和尾柄呈銀白色(圖2o)。此時(shí),稚魚(yú)外部形態(tài)與成魚(yú)相近,即將進(jìn)入幼魚(yú)階段。
瓦氏雅羅魚(yú)初孵仔魚(yú)的卵黃囊體積為(1.65±0.37) mm3,6日齡開(kāi)口攝食時(shí),卵黃囊體積減小為(0.35±0.22) mm3,仔魚(yú)在內(nèi)源營(yíng)養(yǎng)期消耗卵黃囊體積的78.79%。經(jīng)回歸分析,卵黃囊體積(V)與日齡(t)的關(guān)系可以用以下方程來(lái)描述:V=0.0057t2-0.2604t+1.723(r2=0.8035,n=123)(圖4)。
圖4 瓦氏雅羅魚(yú)仔魚(yú)卵黃囊吸收過(guò)程
經(jīng)67 d培育,瓦氏雅羅魚(yú)全長(zhǎng)由(7.04±0.30) mm 增至(29.87±4.37) mm,全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率為2.16%/d,其中仔魚(yú)期特定生長(zhǎng)率為2.42%/d,高于稚魚(yú)期(1.16%/d)(表1)。不同時(shí)期全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率存在差異:卵黃囊期生長(zhǎng)率最高(2.89%/d),后期仔魚(yú)次之(2.34%/d),稚魚(yú)期最低。曲線(xiàn)擬合可知,全長(zhǎng)(L)與日齡(t)呈指數(shù)函數(shù)關(guān)系,相關(guān)方程為L(zhǎng)=7.6529e0.0231t(r2=0.9393,n=522)。
表1 瓦氏雅羅魚(yú)仔、稚魚(yú)不同階段全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率
圖5 瓦氏雅羅魚(yú)仔、稚魚(yú)全長(zhǎng)的生長(zhǎng)
由幾種雅羅魚(yú)仔、稚魚(yú)形態(tài)發(fā)育比較可知(表2),瓦氏雅羅魚(yú)卵徑略大于大頭歐雅魚(yú)(L.cephalus)[27],與雅羅魚(yú)(L.leuciscus)[28]相近,而初孵仔魚(yú)較雅羅魚(yú)[28-29]、高體雅羅魚(yú)(L.idus)[30]要小,僅大于大頭歐雅魚(yú)[28]。初孵仔魚(yú)規(guī)格通常與卵徑大小正相關(guān)[31],而卵徑的大小除與物種屬性有關(guān)之外,還受親魚(yú)規(guī)格[32]、營(yíng)養(yǎng)水平[33]及產(chǎn)卵批次影響[34]。因此,3種雅羅魚(yú)卵徑的大小范圍可能是交錯(cuò)重疊的,彼此間沒(méi)有絕對(duì)的大小關(guān)系。盡管如此,具有低溫繁殖習(xí)性的雅羅魚(yú)亞科魚(yú)類(lèi)的卵徑較一些棲息于熱帶或亞熱帶的魚(yú)類(lèi)要大,比如唐魚(yú)(Tanichthysalbonubes)[35](1.017 mm)、粘皮鯔蝦虎魚(yú)(Mugilogobiusmyxodermus)[36](0.4~0.6 mm)及印度鲇[37](Heteropneustesfossilis)(1.1~1.2 mm)。這可能是雅羅魚(yú)亞科魚(yú)類(lèi)適應(yīng)低溫環(huán)境的一種繁殖策略:在較低溫度條件下,孵化期長(zhǎng)、代謝率低,對(duì)大卵有利[14]。同時(shí),較大卵徑意味著含有更多的能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),有利于應(yīng)對(duì)繁殖季節(jié)水溫低、餌料生物匱乏的惡劣條件[38]。
表2 瓦氏雅羅魚(yú)與其他雅羅魚(yú)亞科魚(yú)類(lèi)仔、稚魚(yú)形態(tài)發(fā)育比較
幾種雅羅魚(yú)亞科魚(yú)類(lèi)的器官、行為發(fā)生的先后順序是一致的,但在開(kāi)口攝食、卵黃囊消失、鰭和鱗片發(fā)生時(shí)間及生長(zhǎng)速度上存在較大差異。如瓦氏雅羅魚(yú)仔魚(yú)6日齡時(shí)開(kāi)口攝食,開(kāi)口時(shí)間較高體雅羅魚(yú)、雅羅魚(yú)和大頭歐雅魚(yú)要晚;瓦氏雅羅魚(yú)卵黃囊期仔魚(yú)全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率為2.89%,在幾種雅羅魚(yú)中處于較低水平;而后期仔魚(yú)全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率達(dá)到2.34%,僅高于雅羅魚(yú)在12 ℃培育溫度下全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率(1.55%/d~1.61%/d)。仔魚(yú)開(kāi)口時(shí)間一方面受卵黃囊大小影響,一般情況下,卵黃囊體積越大,開(kāi)口攝食時(shí)間越晚[39];另一方面也受培育溫度影響,因?yàn)椴煌疁貤l件下仔魚(yú)卵黃囊吸收速度不同,從而對(duì)初次攝食時(shí)間產(chǎn)生了影響[40]。此外,溫度也會(huì)影響生長(zhǎng)速度,這是因?yàn)轸~(yú)類(lèi)作為變溫動(dòng)物,一般情況下溫度會(huì)強(qiáng)烈影響代謝,進(jìn)而影響生長(zhǎng)[41];當(dāng)培育溫度增加時(shí),發(fā)育速度和生長(zhǎng)速率也會(huì)增加[42]。試驗(yàn)期間,卵黃囊期全長(zhǎng)特定生長(zhǎng)率最大,后期仔魚(yú)期次之,稚魚(yú)期最低,仔魚(yú)期生長(zhǎng)速度要快于稚魚(yú)期。這與唇[21]、四川華鳊(Sinibramataeniatus)[39]的相關(guān)研究結(jié)果一致。這可能是因?yàn)槁腰S作為內(nèi)源性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要用于仔魚(yú)快速生長(zhǎng);仔魚(yú)開(kāi)口攝食后,對(duì)餌料有一個(gè)適應(yīng)階段,生長(zhǎng)速度有所下降;稚魚(yú)期時(shí),攝食所獲取的能量部分用于鱗片的生成,一定程度上影響了其生長(zhǎng)速度[39]。
瓦氏雅羅魚(yú)繁殖時(shí)池塘水溫約10 ℃,此溫度下清塘后通常約需20 d才能達(dá)到輪蟲(chóng)高峰期[43]。生產(chǎn)實(shí)踐中要統(tǒng)籌考慮環(huán)境溫度、仔魚(yú)開(kāi)口時(shí)間及發(fā)塘?xí)r間多個(gè)因素來(lái)安排生產(chǎn),確保仔魚(yú)下塘后有足夠的生物餌料供給。此外,本試驗(yàn)中,全程采用粗蛋白50%以上的微粒子飼料(前期粒徑150~300 μm,后期粒徑300~600 μm)成功進(jìn)行了瓦氏雅羅魚(yú)仔、稚魚(yú)的早期培育,微粒子飼料的粒徑和粗蛋白含量與常見(jiàn)輪蟲(chóng)相當(dāng):輪蟲(chóng)大小為150~360 μm,粗蛋白含量為58.2%[44]。這表明投喂的微粒子飼料在適口性和營(yíng)養(yǎng)水平上基本滿(mǎn)足了瓦氏雅羅魚(yú)仔、稚魚(yú)的需求,具備替代生物餌料潛力。同時(shí),這也說(shuō)明瓦氏雅羅魚(yú)仔、稚魚(yú)易飼性較高,適合在生產(chǎn)中推廣。
在12.7~26.7 ℃水溫條件下,瓦氏雅羅魚(yú)胚后發(fā)育經(jīng)歷3個(gè)時(shí)期,即卵黃囊期(0~8日齡)、后期仔魚(yú)期(9~54日齡)和稚魚(yú)期(55~67日齡)。就特定生長(zhǎng)率而言,卵黃囊期最高(2.89%/d),后期仔魚(yú)期次之(2.34%/d),稚魚(yú)期最低(1.16%/d)。