楊培民，金廣海，劉義新，王 雷，解 涵，胡宗云

( 遼寧省淡水水產(chǎn)科學研究院，遼寧省水生動物病害防治重點實驗室，遼寧 遼陽 111000 )

瓦氏雅羅魚(Leuciscuswaleckii)俗稱華子魚、滑魚、沙包，屬鯉科、雅羅魚亞科、雅羅魚屬[1]，廣泛分布于我國三北地區(qū)天然水域，在東北地區(qū)屬“三花五羅”中的“五羅”之一，也是遼寧省重要的土著經(jīng)濟魚類[2]，具有較高的經(jīng)濟價值。瓦氏雅羅魚肌肉營養(yǎng)成分均衡，味道鮮美[3-4]；此外，該魚具有優(yōu)良的耐鹽堿、耐寒特性[4]，在提升鹽堿水域開發(fā)利用效率上極具推廣價值。目前，有關瓦氏雅羅魚的研究主要集中在池塘養(yǎng)殖[5-6]、漁業(yè)生物學[7-8]、耐鹽堿機制研究[9-11]、群體遺傳學[12-13]等方面，有關瓦氏雅羅魚早期生活史的研究尚未見報道。筆者對瓦氏雅羅魚的胚后發(fā)育和早期生長進行研究，以期為豐富瓦氏雅羅魚仔、稚魚生物學特性提供參考。

1 材料與方法

1.1 瓦氏雅羅魚仔、稚魚獲取和飼養(yǎng)

本試驗在遼寧省淡水水產(chǎn)科學研究院試驗基地進行，親魚源自鴨綠江水系，全長(28.00±1.41) cm，體質(zhì)量(275.74±44.72) g。2019年3月26日按如下劑量注射催產(chǎn)激素：每千克雌魚注射促黃體素釋放激素類似物2號15 μg、絨毛膜促性腺激素2000 IU及馬來酸地歐酮15 mg，雄魚劑量減半。在水溫10.4～13.8 ℃、溶解氧3.9～10.4 mg/L的環(huán)境下，注射激素48～52 h后采用干法受精獲得受精卵，脫黏處理后置于40目篩絹錐體孵化桶內(nèi)孵化。受精卵經(jīng)13 d孵出仔魚，隨機挑選1000尾仔魚，置于架設在池塘(面積0.8 hm2，平均水深2.0 m)內(nèi)的一個2.0 m×1.0 m×1.5 m的40目篩絹網(wǎng)箱內(nèi)培育，放養(yǎng)密度為450尾/m3。培育期間采用水質(zhì)在線監(jiān)測系統(tǒng)(魚兒樂X5，南京祿輝物聯(lián)科技有限公司)記錄池塘水溫和溶解氧含量的變化(圖1)。試驗全程采用山東升索漁用飼料研發(fā)中心生產(chǎn)的微粒子配合飼料：前期(6～35日齡)采用S1型微顆粒飼料(粒徑150～300 μm，粗蛋白含量>50%)；后期(36～67日齡)投喂S2型微顆粒飼料(粒徑300～600 μm，粗蛋白含量>50%)。每日于8：00、11：00、14：00和17：00各投喂1次，前期按3～5 g/(千尾·次)投喂，后期按5～8 g/(千尾·次)投喂。為保持網(wǎng)箱的透水性，每隔20 d更換網(wǎng)箱1次。

圖1 試驗期間水溫和溶解氧質(zhì)量濃度的日變化

1.2 形態(tài)觀察和生長性狀測量

參照文獻[14]的方法，將仔、稚魚形態(tài)發(fā)育劃分為卵黃囊期仔魚、后期仔魚和稚魚3個階段。根據(jù)仔、稚魚形態(tài)發(fā)育規(guī)律，0～10日齡時，每天取樣1次，11～30日齡，每2 d取樣1次；31日齡后，3～5 d取樣1次。每次取樣數(shù)不低于20尾，樣品置于載玻片或培養(yǎng)皿中，在體視顯微鏡(SZ66，重慶奧特)下進行活體觀察和拍照(Canon Power shot G11，日本)。以臺微尺為參照配合圖像處理軟件ImageJ(Version 1.52a)測量全長、體長、卵黃囊長徑及短徑等參數(shù)，精確至0.01 mm。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2016軟件計算各次測量參數(shù)的平均值和標準差，全長的生長曲線以及卵黃囊體積變化分別采用Excel 2016 擬合、作圖，以決定系數(shù)r2最大或殘差平方和最小為擬合標準。

卵黃囊體積(V，mm3)計算公式為：

V=πRr2/6

式中，R為卵黃囊長徑(mm)，r為卵黃囊短徑(mm)。

全長特定生長率(RSG，%/d)計算公式為：

RSG=(lnL2-lnL1)/(t2-t1)×100%

式中，t1、t2為日齡(d)，L1、L2分別為t1、t2時的全長(mm)。

2 結 果

2.1 瓦氏雅羅魚胚后發(fā)育

瓦氏雅羅魚產(chǎn)具有黏性的沉性卵，卵呈圓形，帶有橄欖色(圖2a)，卵徑(2.53±0.09) mm，卵膜較厚，胚體不易觀察。在10.4～13.8 ℃環(huán)境下，孵化期為13 d。根據(jù)仔、稚魚形態(tài)特征變化，瓦氏雅羅魚胚后發(fā)育可細分為卵黃囊期(0～8日齡)、后期仔魚期(9～54日齡)及稚魚期(55～67日齡)。

2.1.1 卵黃囊期(初孵仔魚至卵黃囊吸收完全，0～8日齡)

0日齡：全長(7.04±0.30) mm，身體呈半透明狀，后半部由透明鰭膜包裹。頭部略帶淡黃色，眼睛外凸呈黑色，耳石、鰓弓及胸鰭芽輪廓清晰，頭背部有少量黑色素沉著；腹部有一長梨形卵黃囊：前部膨大呈球形，后部細長呈棒狀；心臟位于卵黃囊前端，呈囊狀，平均心率為81次/分，卵黃囊前端和尾柄腹側可見明顯的紅色血細胞流動；肌節(jié)41～43對，呈“V”排列(圖2b)。初孵仔魚常側臥水底，無明顯運動。

2日齡：全長(7.60±0.42) mm，鰾原基出現(xiàn)，卵黃囊前端明顯縮小，胸鰭擴張呈扇形；仔魚頭部、背部及卵黃囊與軀體交界處有樹枝狀黑色素分布；口裂形成，但上、下頜不能開合；鰾原基下方的消化道形成：前端開闊如喇叭狀，后端細長如管狀(圖3a)；眼睛的晶體呈黑色，外周玻璃體略帶灰褐色(圖2c)。肛凹后緣紅色血流明顯，附近膀胱清晰可見(圖3b)。仔魚常聚集于背光處，受刺激后可做短促“竄動”。

3日齡：全長(7.77±0.42) mm，鰾充氣膨脹呈橢圓形，體表尤其是背部、卵黃囊與脊椎交界處的黑色素明顯增多，上、下頜可以開合，肛門后緣腹側紅色血流仍很明顯(圖2d)。消化道前端內(nèi)壁褶皺明顯(圖3c)，后端與肛門貫通。此時，仔魚運動能力增強，常做上浮運動。

6日齡：全長(8.49±0.34) mm，仔魚開口攝食，50%以上個體腸道內(nèi)充塞著食物；以鰾為界，卵黃囊被分割成前后兩部分：前部呈塊狀，后部呈三角形；頭部和背部略帶淡黃色，尾柄腹側紅色的血流變得模糊(圖2e)。此時，仔魚可以“平游”。

8日齡：全長(8.90±0.27) mm，卵黃囊消失，鰾膨大呈狹長形，腹側肛門前部鰭褶仍較寬大，背部及尾柄腹側鰭褶收縮明顯(圖2f)。頂面觀，仔魚頭的背部略帶黃色；眼睛外凸，外側包裹一層透明的膜，胸鰭末端可延伸至鰾的前部1/4處(圖3d)。此時，仔魚攝食旺盛，可上浮至水面吞食粉料。

圖2 瓦氏雅羅魚仔、稚魚形態(tài)發(fā)育

2.1.2 后期仔魚期(卵黃囊吸收完畢至各鰭條發(fā)育完善，鱗片出現(xiàn)，9～54日齡)

10日齡：全長(9.19±0.42) mm，脊索末端開始向上彎曲，仔魚背部、尾柄腹側及脊索末端黑色素明顯增多；在反射光下，仔魚軀體呈淡黃色(圖2g)。尾鰭有放射狀彈性絲生成(圖3e)。

13日齡：全長(9.62±0.40) mm，仔魚背鰭、臀鰭開始分化，脊索末端上彎至約15°角(圖2h)；尾鰭下葉有鰭條出現(xiàn)(圖3f)。

18日齡：全長(11.68±1.28) mm，鰾前室形成，背部和尾柄處鰭褶消失，背鰭條和臀鰭條出現(xiàn)：背鰭條4～5枚、臀鰭條3～4枚(圖2i)。脊索末端上彎至約45°角，尾下骨出現(xiàn)(圖3g)。

25日齡；全長(14.19±1.18) mm，尾鰭中央內(nèi)凹，尾鰭條分節(jié)；腹鰭芽出現(xiàn)，腸道上方體表開始有虹彩細胞生成，腹側局部呈銀色(圖2j)。

29日齡：全長(16.74±1.87) mm，腹鰭鰭條形成，腹部鰭褶明顯收縮；虹彩細胞擴展至鰓蓋和整個腹部，鰾、腸道等內(nèi)部器官不可觀察；眼睛晶體外周玻璃體呈亮銀色(圖2k)。

39日齡：全長(22.72±3.11) mm，各鰭發(fā)育完善，僅在肛門至腹鰭基存在小部分鰭褶；體側的銀色區(qū)域擴展至尾柄的脊椎位置。仔魚背部呈青色，軀體肌肉明顯增加，脊椎和肋骨不宜觀察(圖2l)。

2.1.3 稚魚期(鱗片出現(xiàn)至全身被鱗，55～67日齡)

55日齡：全長(25.92±2.66) mm，鱗片出現(xiàn)在尾柄處脊椎骨附近的體表，初生鱗為近圓形，帶有1～2 個鱗紋(圖3h)，長徑和短徑分別為(0.54±0.02) mm、(0.35±0.03) mm。自然光下，魚體頭背部略帶淺黃色，背部呈青色，體側大部由銀色反光物質(zhì)覆蓋(圖2m)。

圖3 瓦氏雅羅魚仔、稚魚局部特征

59日齡：全長(25.98±2.74) mm，鰓蓋后緣、魚體腹部出現(xiàn)鱗片，其中腹部鱗片近圓形，帶有2～3個鱗紋(圖3i)，直徑(0.36±0.05) mm。魚體頭部黃色減淡，肉眼可觀察到體側的鱗片(圖2n)。

67日齡：全長(29.84±3.21) mm，除頭部外，魚體全身被鱗；魚體背部和頭部略帶青黃色，體側和尾柄呈銀白色(圖2o)。此時，稚魚外部形態(tài)與成魚相近，即將進入幼魚階段。

2.2 瓦氏雅羅魚卵黃囊的吸收

瓦氏雅羅魚初孵仔魚的卵黃囊體積為(1.65±0.37) mm3，6日齡開口攝食時，卵黃囊體積減小為(0.35±0.22) mm3，仔魚在內(nèi)源營養(yǎng)期消耗卵黃囊體積的78.79%。經(jīng)回歸分析，卵黃囊體積(V)與日齡(t)的關系可以用以下方程來描述：V=0.0057t2-0.2604t+1.723(r2=0.8035，n=123)(圖4)。

圖4 瓦氏雅羅魚仔魚卵黃囊吸收過程

2.3 瓦氏雅羅魚仔、稚魚生長

經(jīng)67 d培育，瓦氏雅羅魚全長由(7.04±0.30) mm 增至(29.87±4.37) mm，全長特定生長率為2.16%/d，其中仔魚期特定生長率為2.42%/d，高于稚魚期(1.16%/d)(表1)。不同時期全長特定生長率存在差異：卵黃囊期生長率最高(2.89%/d)，后期仔魚次之(2.34%/d)，稚魚期最低。曲線擬合可知，全長(L)與日齡(t)呈指數(shù)函數(shù)關系，相關方程為L=7.6529e0.0231t(r2=0.9393，n=522)。

表1 瓦氏雅羅魚仔、稚魚不同階段全長特定生長率

圖5 瓦氏雅羅魚仔、稚魚全長的生長

3 討 論

3.1 瓦氏雅羅魚的胚后發(fā)育

3.2 瓦氏雅羅魚與其他雅羅魚亞科魚類胚后發(fā)育的比較

由幾種雅羅魚仔、稚魚形態(tài)發(fā)育比較可知(表2)，瓦氏雅羅魚卵徑略大于大頭歐雅魚(L.cephalus)[27]，與雅羅魚(L.leuciscus)[28]相近，而初孵仔魚較雅羅魚[28-29]、高體雅羅魚(L.idus)[30]要小，僅大于大頭歐雅魚[28]。初孵仔魚規(guī)格通常與卵徑大小正相關[31]，而卵徑的大小除與物種屬性有關之外，還受親魚規(guī)格[32]、營養(yǎng)水平[33]及產(chǎn)卵批次影響[34]。因此，3種雅羅魚卵徑的大小范圍可能是交錯重疊的，彼此間沒有絕對的大小關系。盡管如此，具有低溫繁殖習性的雅羅魚亞科魚類的卵徑較一些棲息于熱帶或亞熱帶的魚類要大，比如唐魚(Tanichthysalbonubes)[35](1.017 mm)、粘皮鯔蝦虎魚(Mugilogobiusmyxodermus)[36](0.4～0.6 mm)及印度鲇[37](Heteropneustesfossilis)(1.1～1.2 mm)。這可能是雅羅魚亞科魚類適應低溫環(huán)境的一種繁殖策略：在較低溫度條件下，孵化期長、代謝率低，對大卵有利[14]。同時，較大卵徑意味著含有更多的能量和營養(yǎng)物質(zhì)，有利于應對繁殖季節(jié)水溫低、餌料生物匱乏的惡劣條件[38]。

表2 瓦氏雅羅魚與其他雅羅魚亞科魚類仔、稚魚形態(tài)發(fā)育比較

幾種雅羅魚亞科魚類的器官、行為發(fā)生的先后順序是一致的，但在開口攝食、卵黃囊消失、鰭和鱗片發(fā)生時間及生長速度上存在較大差異。如瓦氏雅羅魚仔魚6日齡時開口攝食，開口時間較高體雅羅魚、雅羅魚和大頭歐雅魚要晚；瓦氏雅羅魚卵黃囊期仔魚全長特定生長率為2.89%，在幾種雅羅魚中處于較低水平；而后期仔魚全長特定生長率達到2.34%，僅高于雅羅魚在12 ℃培育溫度下全長特定生長率(1.55%/d～1.61%/d)。仔魚開口時間一方面受卵黃囊大小影響，一般情況下，卵黃囊體積越大，開口攝食時間越晚[39]；另一方面也受培育溫度影響，因為不同水溫條件下仔魚卵黃囊吸收速度不同，從而對初次攝食時間產(chǎn)生了影響[40]。此外，溫度也會影響生長速度，這是因為魚類作為變溫動物，一般情況下溫度會強烈影響代謝，進而影響生長[41]；當培育溫度增加時，發(fā)育速度和生長速率也會增加[42]。試驗期間，卵黃囊期全長特定生長率最大，后期仔魚期次之，稚魚期最低，仔魚期生長速度要快于稚魚期。這與唇[21]、四川華鳊(Sinibramataeniatus)[39]的相關研究結果一致。這可能是因為卵黃作為內(nèi)源性營養(yǎng)物質(zhì)主要用于仔魚快速生長；仔魚開口攝食后，對餌料有一個適應階段，生長速度有所下降；稚魚期時，攝食所獲取的能量部分用于鱗片的生成，一定程度上影響了其生長速度[39]。

3.3 瓦氏雅羅魚的早期培育

瓦氏雅羅魚繁殖時池塘水溫約10 ℃，此溫度下清塘后通常約需20 d才能達到輪蟲高峰期[43]。生產(chǎn)實踐中要統(tǒng)籌考慮環(huán)境溫度、仔魚開口時間及發(fā)塘時間多個因素來安排生產(chǎn)，確保仔魚下塘后有足夠的生物餌料供給。此外，本試驗中，全程采用粗蛋白50%以上的微粒子飼料(前期粒徑150～300 μm，后期粒徑300～600 μm)成功進行了瓦氏雅羅魚仔、稚魚的早期培育，微粒子飼料的粒徑和粗蛋白含量與常見輪蟲相當：輪蟲大小為150～360 μm，粗蛋白含量為58.2%[44]。這表明投喂的微粒子飼料在適口性和營養(yǎng)水平上基本滿足了瓦氏雅羅魚仔、稚魚的需求，具備替代生物餌料潛力。同時，這也說明瓦氏雅羅魚仔、稚魚易飼性較高，適合在生產(chǎn)中推廣。

4 結 論

在12.7～26.7 ℃水溫條件下，瓦氏雅羅魚胚后發(fā)育經(jīng)歷3個時期，即卵黃囊期(0～8日齡)、后期仔魚期(9～54日齡)和稚魚期(55～67日齡)。就特定生長率而言，卵黃囊期最高(2.89%/d)，后期仔魚期次之(2.34%/d)，稚魚期最低(1.16%/d)。