徐 孟，肖航宇，張 曜，蒲小兵

食管癌好發(fā)于中老年人，大部分患者確診時(shí)已為中晚期，5年生存率≤30%，故盡早確診非常重要[1]。近年發(fā)現(xiàn)微小核糖核酸(miR)表達(dá)失調(diào)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[2]。據(jù)功能miR可分為抑癌miR及致癌miR，其中miR-92a在結(jié)直腸癌等消化道腫瘤中呈致癌效應(yīng)[3]，miR-424在肝細(xì)胞癌、食管鱗癌中也呈致癌效應(yīng)[4]，miR-145則在結(jié)直腸、食管、肺等腫瘤中呈抑癌效應(yīng)[5]?；诖?，本研究分析外周血miR-92a、miR-424、miR-145水平與食管癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年1月—2020年12月我院68例食管癌作為食管癌組。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)手術(shù)病理診斷食管癌；臨床病理、實(shí)驗(yàn)室等檢查資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前行放化療等抗腫瘤治療；術(shù)中死亡；有惡性腫瘤病史及治療史；有藥物或乙醇濫用史；伴心腎等器官功能障礙；妊娠期婦女。另納入68例體檢健康者作為對照組。2組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法 食管癌組在入院次日清晨抽取空腹外周靜脈血4 ml，對照組取體檢當(dāng)日空腹外周靜脈血樣4 ml；3000 r/min離心5 min，棄上清，加入等體積磷酸鹽及淋巴細(xì)胞分離液，2000 r/min離心30 min后，取乳白色層與細(xì)胞洗滌液混合，12 000 r/min離心5 min，獲得沉淀為外周血單個(gè)核細(xì)胞；加入Trizol提取液抽提總RNA，經(jīng)試劑盒逆轉(zhuǎn)錄，采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測miR-92a、miR-424、miR-145；擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)熱10 min，95 ℃變性15 s，60 ℃退火60 s，45個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min；利用紫外光凝膠成像系統(tǒng)攝像觀察，采用2-ΔΔCt法以目的基因與內(nèi)參U6比值作為目的基因mRNA相對表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.12組外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達(dá)量 食管癌組外周血miR-92a、miR-424相對表達(dá)量顯著高于對照組，miR-145相對表達(dá)量低于對照組(P<0.01)，見表1。

表1 食管癌患者和體檢健康者外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達(dá)量比較

2.2外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達(dá)量對食管癌的診斷價(jià)值 ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達(dá)量均對食管癌有較高的診斷價(jià)值，見表2。

表2 外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達(dá)量對食管癌的診斷價(jià)值分析

2.3不同臨床病理特征食管癌患者外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達(dá)量 TNM分期Ⅲ期者外周血miR-92a、miR-424相對表達(dá)量顯著高于Ⅰ～Ⅱ期者，miR-145相對表達(dá)量顯著低于Ⅰ～Ⅱ期者(P<0.05，P<0.01)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者外周血miR-92a、miR-424相對表達(dá)量顯著高于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，miR-145相對表達(dá)量顯著低于非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.01)。見表3。

2.4食管癌臨床病理特征與外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達(dá)量的相關(guān)性 食管癌TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與外周血miR-92a、miR-424相對表達(dá)量呈正相關(guān)(r=0.692、0.511、0.496、0.404，P<0.05)，與miR-145相對表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.475、-0.382，P<0.05)。

3 討論

PENG等[6]指出miR-92a可輔助診斷早期結(jié)直腸癌，且有望成為新型抗腫瘤藥物的作用靶點(diǎn)。ALCANTARA和GARCIA[7]還指出，miR-92a可通過調(diào)控神經(jīng)纖維瘤Ⅱ型表達(dá)，參與結(jié)直腸、肺等腫瘤的發(fā)生發(fā)展。近年FASSAN等[8]發(fā)現(xiàn)，血液miR-92a可用于診斷Barrett食管，有望成為預(yù)測食管癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的生物學(xué)標(biāo)志物。本研究中，食管癌組外周血miR-92a相對表達(dá)量顯著高于對照組，且經(jīng)ROC曲線分析，外周血miR-92a相對表達(dá)量對食管癌診斷有利，提示外周血miR-92a過表達(dá)可能參與了食管癌的發(fā)生。不僅如此，TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與外周血miR-92a相對表達(dá)量呈正相關(guān)，提示miR-92a發(fā)揮致癌效應(yīng)，還可調(diào)控食管癌細(xì)胞侵襲及遷移。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-92a可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制蛋白及信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子表達(dá)，增強(qiáng)細(xì)胞致癌能力[9]。

表3 不同臨床病理特征食管癌患者外周血miR-92a、miR-424、miR-145相對表達(dá)量比較

miR-424與人體血管生成及血管重建功能有關(guān)，在腦缺血性疾病中，miR-424過表達(dá)可保護(hù)腦損傷[10]。本研究也發(fā)現(xiàn)，TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與外周血miR-424相對表達(dá)量呈正相關(guān)，提示miR-424表達(dá)增強(qiáng)對提升食管癌細(xì)胞侵襲遷移能力有利。

miR-145在宮頸、肺、食管等腫瘤中表達(dá)下調(diào)，并通過多種信號途徑調(diào)控靶基因表達(dá)，發(fā)揮抑癌基因作用。本研究中，食管癌組外周血miR-145相對表達(dá)量低于對照組，且其相對表達(dá)量對食管癌診斷有利，提示miR-145可能發(fā)揮抑癌效應(yīng)。本研究也發(fā)現(xiàn)，TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與外周血miR-145相對表達(dá)量呈負(fù)相關(guān)，提示miR-145可能通過調(diào)控靶基因表達(dá)，抑制食管癌細(xì)胞的侵襲及遷移能力。

綜上，食管癌患者外周血miR-92a、miR-424表達(dá)升高，miR-145表達(dá)下降，上述miR與食管癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，有望成為食管癌診療的新靶點(diǎn)。