黃文青

伴隨生活質(zhì)量的不斷提升,人們對(duì)牙體修復(fù)的功能性、舒適度、美觀度等方面提出了更高的需求,在此期間,樹脂粘結(jié)修復(fù)因兼具美觀、舒適等特點(diǎn)被臨床大范圍推廣。牙本質(zhì)富含有機(jī)成分,生存環(huán)境潮濕,故牙本質(zhì)的粘結(jié)一直是臨床研究的重點(diǎn)難點(diǎn)［1,2］。樹脂充填是齲病牙治療的最主要方法。牙本質(zhì)齲分為外層的齲病感染牙本質(zhì)(caries-infected dentin,CID)和內(nèi)層的齲病影響牙本質(zhì)(caries-affected dentin,CAD),齲病影響牙本質(zhì)是指去除外層的感染牙本質(zhì)后所留下的,未被細(xì)菌感染的牙本質(zhì),基本無(wú)細(xì)菌入侵,臨床上一般予以保留。齲病影響牙本質(zhì)雖然無(wú)細(xì)菌入侵,但無(wú)論是膠原蛋白還是礦物質(zhì)都被齲病所改變。因此齲病影響牙本質(zhì)和正常的牙本質(zhì)粘結(jié)效果可能不盡相同［3］?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一類鈣、鋅離子依賴的蛋白水解酶。研究表明,牙本質(zhì)中含有明膠酶［包括基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)］［4］、基質(zhì)溶解素1(MMP-3)［5］、釉質(zhì)溶解素(MMP-20)［6］和膠原酶-2(MMP-8)［7］等?；|(zhì)金屬蛋白酶平時(shí)以無(wú)活化的酶原形式存在,全酸蝕和自酸蝕粘接系統(tǒng)都能夠激活基質(zhì)金屬蛋白酶,活化的基質(zhì)金屬蛋白酶能降解暴露的膠原纖維,導(dǎo)致混合層完整性被破壞。研究［8］發(fā)現(xiàn),齲病影響牙本質(zhì)中的組織蛋白酶含量明顯高于正常牙本質(zhì),提示組織蛋白酶可能也參與了牙本質(zhì)膠原的降解。使用酶抑制劑抑制膠原降解,維持膠原結(jié)構(gòu)的完整性,是提高混合層穩(wěn)定性的關(guān)鍵。目前,使用酶抑制劑來(lái)保護(hù)混合層的完整性是研究的熱點(diǎn)。鑒于此,本研究通過(guò)對(duì)比3 種不同的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑：2%氯己定、表沒食子兒茶素沒食子酸酯 (Epigallocatechin gallate,EGCG),碳二亞胺鹽酸鹽［1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbo-dimide,EDC］對(duì)齲病影響牙本質(zhì)自酸蝕粘強(qiáng)度和微滲漏的影響,以期為臨床提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究方案已取得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。收集2020 年1～12 月在本院口腔頜面外科門診拔除的240 顆有齲離體牙,隨機(jī)分為A 組、B 組、C 組,各80 顆；另選取80 顆無(wú)齲離體牙作為D 組。離體牙的收集均在患者簽訂知情同意書的情況下進(jìn)行。將離體前磨牙沿牙長(zhǎng)軸方向正中磨為近、遠(yuǎn)中兩半,選取的有齲離體牙未進(jìn)行充填及根管治療、齲病未穿髓。去除牙周組織及牙結(jié)石后浸泡保存在4℃的蒸餾水中,且在30 d 內(nèi)使用。

1.2 儀器及材料 本研究涉及的儀器、材料來(lái)源見表1。

表1 儀器及材料

1.3 牙體制備 所有牙樣本使用水門汀凝固后把試樣放在蒸餾水中,所有標(biāo)本放在自制的冷熱循環(huán)設(shè)備上進(jìn)行冷熱循環(huán)實(shí)驗(yàn)。在5℃和55℃水中分別停留30 s,迅速交換,交換時(shí)間≤5 s,如此反復(fù)循環(huán)500 次,以此來(lái)模擬口腔溫度的急劇變化。所有樣本在完成冷熱循環(huán)后在水浴箱中浸泡24 h,之后拿出自然干燥。無(wú)齲牙：使用帶噴水冷卻裝置的高速金剛砂車針完全去除離體牙咬合面釉質(zhì)至釉牙骨質(zhì)界以下,顯微鏡下檢查無(wú)殘留釉質(zhì)層,暴露牙本質(zhì),使用600 目砂紙于水中打磨形成光滑平面。有齲牙：使用帶噴水冷卻裝置的高速金剛砂車針完全去除離體牙咬合面釉質(zhì)至釉牙骨質(zhì)界以下,使用挖匙去除腐質(zhì),沖洗,干燥,在齲洞內(nèi)滴入齲病顯示劑,10 s 后沖洗,然后在顯微鏡下使用慢速球鉆流水冷卻下磨除著色的細(xì)菌入侵牙本質(zhì),重復(fù)該項(xiàng)操作多次直到硬組織不被染色為止。使用Single Bond Universal (3M)粘結(jié)劑進(jìn)行粘接,SonicFill(KERR)光固化樹脂充填,保證樹脂厚度≥5 mm。將粘接好的樣本使用硬組織切割機(jī)分別從近遠(yuǎn)中向、頰舌向切割為橫截面為1 mm×1 mm 的試件。具體分組見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)步驟

1.4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 粘結(jié)強(qiáng)度 采用微拉伸試驗(yàn)［9］進(jìn)行測(cè)定,拉伸試驗(yàn)樣本的制作：樣本兩端分別固定于兩片載玻片上,使用萬(wàn)能試驗(yàn)機(jī)進(jìn)行拉伸測(cè)試,加載頭加載速度：0.5 mm/min,直到牙本質(zhì)-樹脂條斷裂,計(jì)算機(jī)自動(dòng)記錄加載過(guò)程中的最大拉伸力,計(jì)算微拉伸強(qiáng)度(單位：MPa)。微拉伸粘結(jié)強(qiáng)度(MPa)=載荷峰值(N)/粘結(jié)面積(mm2)。

1.4.2 斷裂類型 在掃描電鏡下觀察所有樣本的斷裂情況,使用37%磷酸凝膠酸蝕界面0.5 min,流水沖洗60 s 后吹干、噴金。分為界面破壞、內(nèi)聚破壞和混合破壞3 種類型,其中混合破壞是指既有界面破壞又有內(nèi)聚破壞。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t 檢驗(yàn)；計(jì)量資料多組間比較采用單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組粘結(jié)強(qiáng)度比較 四組粘結(jié)強(qiáng)度由高至低依次為A 組、B 組、C 組、D 組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 四組粘結(jié)強(qiáng)度比較(,MPa)

表3 四組粘結(jié)強(qiáng)度比較(,MPa)

注：四組比較,P<0.05

2.2 四組斷裂類型比較 A 組混合破壞率低于B 組、C 組及D 組,界面破壞率高于B 組、C 組及D 組,內(nèi)聚破壞率低于B組及D組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 四組斷裂類型比較［顆(%)］

3 討論

常規(guī)的牙本質(zhì)樹脂粘接劑多表現(xiàn)為親水性,但因口腔這一特殊環(huán)境,親水性的粘接劑吸水性約10%,容易降解粘結(jié)面膠原,影響牙本質(zhì)的粘結(jié)強(qiáng)度與持久性,故如何提高牙本質(zhì)與粘接劑之間的粘結(jié)強(qiáng)度,延長(zhǎng)耐久性是臨床現(xiàn)階段的研究熱點(diǎn)。

諸多研究指出復(fù)合樹脂與牙本質(zhì)的粘結(jié)主要依賴于粘接劑和牙本質(zhì)之間形成的微機(jī)械鎖扣作用,即混合層,牙本質(zhì)的粘接強(qiáng)度直接取決于混合層的質(zhì)量,而混合層的降解與牙本質(zhì)基質(zhì)金屬蛋白酶的活性密切相關(guān)［10］。本研究通過(guò)對(duì)比2%氯己定、5% EGCG,0.5 mol/L EDC 對(duì)齲病影響牙本質(zhì)微滲漏與粘結(jié)效果的影響。結(jié)果顯示,四組粘結(jié)強(qiáng)度由高至低依次為A 組、B 組、C 組、D 組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明粘結(jié)前對(duì)牙體使用基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑預(yù)處理,可顯著增加粘結(jié)強(qiáng)度。氯己定屬于非特異性的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑,其主要隨著釋放濃度的改變,調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶的活性,依靠纖維間羧酸基團(tuán)的靜電吸附作用達(dá)到固定的作用,但長(zhǎng)期效果不能確定［9］。本研究結(jié)果顯示,A 組混合破壞率低于B 組、C 組及D 組,界面破壞率高于B 組、C 組及D 組,內(nèi)聚破壞率低于B 組及D 組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明粘結(jié)前對(duì)牙體使用2%氯己定進(jìn)行預(yù)處理消毒,利于樹脂滲入。本研究初步探尋了2%氯己定、5% EGCG 及0.5 mol/L EDC 對(duì)齲病影響牙本質(zhì)微滲漏與粘結(jié)效果的影響,但臨床相關(guān)研究較少,研究的可信度還需在未來(lái)開展更多的大樣本研究加以驗(yàn)證,旨在為臨床牙體病變的治療提供科學(xué)參考依據(jù)。

綜上所述,不同基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑預(yù)處理方案對(duì)齲病影響牙本質(zhì)微滲漏與粘結(jié)強(qiáng)度的影響不同,2%氯己定預(yù)處理顯著提高牙體粘結(jié)強(qiáng)度,可在臨床牙體疾病的治療中推廣使用。