劉慧純，劉群會，賈 敏，李文靜

出血轉(zhuǎn)化(hemorrhagic transformation，HT)是臨床較為常見的急性腦梗死(acute cerebral infarction，ACI)病人梗死繼發(fā)性出血，是ACI嚴(yán)重并發(fā)癥之一，可使病情進(jìn)一步加重，因此，早期評估ACI病人發(fā)生HT的風(fēng)險具有重大意義[1]。目前，HT病理機(jī)制雖尚未完全明確，其發(fā)病可能與再灌注損傷、氧化應(yīng)激、血管反應(yīng)、基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metallo proteinases，MMP)、炎癥反應(yīng)等因素?fù)p傷血腦屏障(blood-brain barrier，BBB)及紅細(xì)胞溢出相關(guān)[2-3]。纖維膠凝蛋白-3(Ficolin-3)屬于纖維蛋白膠凝素(Ficolin)家族，主要表達(dá)于肺及肝臟，可影響補(bǔ)體系統(tǒng)，激活炎癥反應(yīng)[4]。有關(guān)研究顯示，F(xiàn)icolin-3在創(chuàng)傷性腦損傷中表達(dá)下調(diào)，其可一定程度反映疾病嚴(yán)重程度，F(xiàn)icolin-3可能是診斷、預(yù)后評估創(chuàng)傷性腦損傷引起繼發(fā)性腦損傷的潛在標(biāo)志物[5]。但Ficolin-3是否可作為ACI病人發(fā)生HT的預(yù)測指標(biāo)鮮有文獻(xiàn)報(bào)道?；诖?，本研究分析ACI病人血清Ficolin-3水平，評估其對HT的預(yù)測價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年8月—2019年12月我院收治的156例ACI病人。ACI診斷標(biāo)準(zhǔn)：參考《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》[6]有關(guān)ACI判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合ACI診斷標(biāo)準(zhǔn)；②為首次發(fā)病，且在發(fā)病24 h內(nèi)住院；③臨床病例資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近期有外傷、外科大手術(shù)者；②合并深靜脈血栓形成、膿毒血癥者；③合并惡性腫瘤、慢性阻塞性肺病、嚴(yán)重肝腎功能不全者；④合并系統(tǒng)性紅斑狼瘡等免疫系統(tǒng)疾病者。

收集兩組病人年齡、性別、高血壓、糖尿病、高血脂、心房顫動、收縮壓、舒張壓、總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白等臨床資料。所有病人家屬均簽署知情同意書，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)會赫爾辛基宣言》有關(guān)要求，獲得本院倫理委員會批準(zhǔn)后進(jìn)行。

1.2 主要試劑與儀器 Ficolin-3酶聯(lián)免疫吸附劑法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒(貨號：ZN2180)購于北京百奧萊博科技有限公司；基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)ELISA試劑盒(貨號：111010)購于廣州蕊特生物科技有限公司；白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)ELISA試劑盒(貨號：FK-R0049)購于上海延慕實(shí)業(yè)有限公司。酶標(biāo)儀(型號：AMR-100)購于杭州奧盛儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣本收集 收集所有病人發(fā)病24 h內(nèi)外周靜脈血3～4 mL，靜置25～35 min，室溫條件下以4 200 r/min離心8 min，分離血清，于-80 ℃冰箱中保存，備用。

1.3.2 ELISA法檢測血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平 從-80 ℃冰箱中取出適量凍存血清樣本，解凍，嚴(yán)格按照Ficolin-3、MMP-9、IL-6試劑盒說明書檢測兩組血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平。

2 結(jié) 果

2.1 兩組一般資料比較 將156例ACI病人分為HT組(33例)和非HT組(123例)，病人首次影像學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)腦出血，于發(fā)病14 d內(nèi)復(fù)查頭顱CT，顯示低密度區(qū)內(nèi)高密度影為HT。與非HT組相比，HT組糖尿病比例、心房顫動比例、三酰甘油、低密度脂蛋白水平均明顯升高(P<0.05)。詳見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平比較 與非HT組相比，HT組血清Ficolin-3水平明顯降低(P<0.05)，MMP-9、IL-6水平均明顯升高(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平比較 (±s)

2.3 HT病人血清Ficolin-3水平與MMP-9、IL-6的相關(guān)性 Pearson法分析顯示，HT病人血清Ficolin-3水平與MMP-9、IL-6均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.462，P<0.05；r=-0.543，P<0.05)。詳見圖1、圖2。

圖1 HT病人血清Ficolin-3水平與MMP-9的相關(guān)性

圖2 HT病人血清Ficolin-3水平與IL-6的相關(guān)性

2.4 血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平對HT的預(yù)測價值 以MMP-9、IL-6為對照，評估血清Ficolin-3對HT的預(yù)測價值，ROC曲線顯示，血清Ficolin-3、MMP-9診斷HT的曲線下面積(area under curve，AUC)分別為0.867，0.840，診斷價值較高，當(dāng)血清Ficolin-3水平<13.78 μg/mL時，其診斷HT的靈敏度為84.8%，特異度為79.7%，診斷效能高于IL-6。血清Ficolin-3與MMP-9聯(lián)合檢測HT 的AUC為0.935，特異度明顯提高。詳見表3、圖3。

表3 各項(xiàng)指標(biāo)對HT的診斷效能

圖3 血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6診斷HT的ROC曲線

2.5 ACI病人發(fā)生HT的影響因素分析 以ACI病人是否發(fā)生HT為因變量，以糖尿病、心房顫動、三酰甘油、低密度脂蛋白、Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平為自變量，進(jìn)行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，糖尿病、心房顫動、MMP-9、IL-6是ACI病人發(fā)生HT的危險因素(P<0.05)，F(xiàn)icolin-3是ACI病人發(fā)生HT的保護(hù)因素(P<0.05)。詳見表4。

表4 Logistic回歸分析ACI病人發(fā)生HT的影響因素

3 討 論

ACI是神經(jīng)內(nèi)科常見危重急癥之一，具有起病急、發(fā)病率及致死率高的特點(diǎn)[7]。HT是ACI常見并發(fā)癥，可引發(fā)致死性腦出血，預(yù)后較差[8]。因此，尋找可早期評估ACI發(fā)生HT風(fēng)險的指標(biāo)，及時監(jiān)測并干預(yù)，是臨床防治HT及改善病人預(yù)后的關(guān)鍵。本研究顯示，HT組病人糖尿病比例、心房顫動比例、三酰甘油、低密度脂蛋白水平均明顯高于非HT組，提示三酰甘油、低密度脂蛋白水平升高，合并糖尿病/心房顫動可能會增加ACI病人發(fā)生HT風(fēng)險。

Ficolin-3是由FCN3基因編碼，可介導(dǎo)細(xì)胞凋亡、識別糖類、調(diào)理吞噬等過程，并在滅活補(bǔ)體系統(tǒng)的凝集素途徑中起重要作用，且Ficolin-3水平降低伴隨著補(bǔ)體激活增加，與各類急慢性神經(jīng)病變性疾病的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)[9-10]。楊永康等[5]發(fā)現(xiàn)Ficolin介導(dǎo)的補(bǔ)體凝集素途徑的激活可促進(jìn)創(chuàng)傷性腦外傷補(bǔ)體依賴性炎癥反應(yīng)過程，且其激活與腦損傷后的炎癥損傷及繼發(fā)性出血相關(guān)，F(xiàn)icolin-3為Ficolin家族重要成員之一，在嚴(yán)重顱腦外傷病人血清中呈低水平表達(dá)，與格拉斯哥昏迷量表評分具有一定相關(guān)性，其有望成為評估病人病情及預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)[11]。以上研究表明，異常水平的Ficolin-3與神經(jīng)類疾病及HT關(guān)系密切。本研究中HT組病人血清Ficolin-3水平明顯低于非HT組，提示Ficolin-3可能參與并影響HT病理發(fā)展過程。推測，低水平Ficolin-3通過激活補(bǔ)體凝集素途徑，加重炎癥反應(yīng)，進(jìn)而在HT發(fā)生發(fā)展中起一定作用，但其具體機(jī)制有待深入研究證實(shí)。

MMP-9是MMP家族成員之一，參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)，與動脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊、神經(jīng)功能缺損、炎癥反應(yīng)有關(guān)[12-13]。研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9在缺血性腦卒中疾病中表達(dá)水平明顯升高，其可降解血管外基質(zhì)成分，損壞BBB，破壞細(xì)胞與基質(zhì)間的微環(huán)境，引發(fā)神經(jīng)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致神經(jīng)功能性障礙，與缺血性腦卒中的發(fā)生、HT密切有關(guān)，MMP-9對急性缺血性腦卒中后的HT有較高預(yù)測價值[14]；另外，IL-6等炎性因子可促進(jìn)MMP-9合成及炎癥細(xì)胞遷移，釋放更多炎性因子，引起血管損傷，使炎癥細(xì)胞從血管內(nèi)滲入神經(jīng)組織，促使神經(jīng)細(xì)胞壞死及腦組織發(fā)生HT[15-16]。本研究中HT組病人血清MMP-9、IL-6均明顯高于非HT組，提示MMP-9、IL-6均可能與HT疾病進(jìn)展相關(guān)。究其原因，MMP-9、IL-6可能通過影響B(tài)BB及炎癥反應(yīng)等，從而在HT病情進(jìn)展中起重要作用。

本研究中HT病人血清Ficolin-3水平與MMP-9、IL-6均呈負(fù)相關(guān)，提示Ficolin-3可能與MMP-9、IL-6相互影響，從而共同影響HT發(fā)生發(fā)展，但仍需進(jìn)一步探究其機(jī)制。本研究顯示，血清Ficolin-3診斷HT的AUC為0.867，當(dāng)血清Ficolin-3水平<13.78 μg/mL時，ACI病人繼發(fā)HT的風(fēng)險率較高，提示Ficolin-3對ACI病人繼發(fā)HT有一定診斷價值，且其診斷效能高于MMP-9、IL-6，血清Ficolin-3有望成為診斷ACI病人繼發(fā)HT的潛在標(biāo)志物。為更好地診斷ACI病人發(fā)生HT，本研究采用Ficolin-3與MMP-9聯(lián)合診斷ACI病人繼發(fā)HT的風(fēng)險，結(jié)果顯示，血清Ficolin-3、MMP-9聯(lián)合預(yù)測ACI病人繼發(fā)HT的AUC為0.935，靈敏度、特異度分別為82.0%、93.5%，提示血清Ficolin-3與MMP-9聯(lián)合預(yù)測ACI病人繼發(fā)HT的價值高于Ficolin-3，MMP-9可一定程度提高診斷ACI病人繼發(fā)HT的特異度，可更好地篩選ACI繼發(fā)HT病人。進(jìn)一步研究顯示，糖尿病、心房顫動、MMP-9、IL-6是ACI病人發(fā)生HT的危險因素，F(xiàn)icolin-3是ACI病人發(fā)生HT的保護(hù)因素，提示血清MMP-9、IL-6水平升高，F(xiàn)icolin-3水平降低，患有糖尿病、心房顫動均可能會增加ACI病人繼發(fā)HT的風(fēng)險，及時監(jiān)測血清Ficolin-3、MMP-9、IL-6水平有助于早期評估ACI病人發(fā)生HT的風(fēng)險。

綜上所述，ACI并發(fā)HT病人血清Ficolin-3水平明顯下調(diào)，其可能與MMP-9、IL-6相互作用，進(jìn)而參與HT發(fā)展，F(xiàn)icolin-3聯(lián)合MMP-9有助于準(zhǔn)確診斷HT病人。但本研究選取樣本較少，后期將增加樣本量進(jìn)行更為深入的研究。