高慧穎，姜 帆

（1福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究所，福州 350003；2福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所，福州 350013）

0 引言

龍眼(Dimocarpus longan Lour.)又名桂圓，是中國(guó)南方的特色藥食同源果品，素有“南人參”的美稱，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載久服桂圓可以輕身不老通神明，是深受消費(fèi)者喜愛(ài)的滋補(bǔ)佳品[1-2]。龍眼果肉含有豐富的化學(xué)成分，其中生物活性成分多樣，如多糖、黃酮、多酚等[3]。其藥理活性研究顯示，龍眼具有抗氧化、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、增強(qiáng)免疫力、緩解焦慮等功能[4-5]。疲勞作為機(jī)體內(nèi)在保護(hù)機(jī)制，是一種復(fù)雜代謝活動(dòng)。長(zhǎng)期疲勞會(huì)讓人精神不振，內(nèi)分泌紊亂、免疫力低，身體處于亞健康狀態(tài)，嚴(yán)重時(shí)可引發(fā)器質(zhì)性疾病。緩解疲勞的活性成分是近年國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)。已證實(shí)的具有緩解運(yùn)動(dòng)疲勞的活性成分有生物活性肽類和氨基酸、多糖、多酚、生物堿等，它們都具有較強(qiáng)的抗氧化能力[6-7]。研究推測(cè)運(yùn)動(dòng)疲勞時(shí)人體內(nèi)的氧化還原平衡被破壞，產(chǎn)生的自由基和活性氧不能及時(shí)清除，從而感到疲勞，通過(guò)補(bǔ)充外源性的抗氧化劑達(dá)到緩解疲勞的效果[8]。譚飔等[9]研究表明蜀冠龍眼熱風(fēng)干制后果肉多酚含量明顯降低，抗氧化活性顯著下降。王詩(shī)琪等[10]分析了新鮮和熱風(fēng)干制后儲(chǔ)良龍眼多糖的抗氧化和免疫活性，結(jié)果顯示干制后多糖的清除自由基能力明顯減弱，但免疫活性增強(qiáng)。聶英濤等[11-12]發(fā)現(xiàn)新鮮龍眼多糖在體外試驗(yàn)中可增強(qiáng)抗氧化能力，動(dòng)物試驗(yàn)中明顯延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，小鼠尿素氮、乳酸、丙二醛含量降低，明顯緩解小鼠運(yùn)動(dòng)疲勞。同時(shí)，周嘉華等[13]證實(shí)龍眼干多糖、郭超萍等[14]證實(shí)龍眼干果肉水提取物均具有明顯的抗疲勞作用。宮亞?wèn)|等[15]制備的枸杞龍眼復(fù)合運(yùn)動(dòng)飲料也可顯著延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。前期研究證實(shí)新鮮龍眼和干制龍眼中均含有豐富的緩解疲勞的活性成分，且具有緩解運(yùn)動(dòng)疲勞的效果。但未見(jiàn)對(duì)同一龍眼品種干制前后緩解疲勞差異的對(duì)比報(bào)道。本試驗(yàn)擬通過(guò)給小鼠喂食同一品種的新鮮龍眼和龍眼干粉，對(duì)比小鼠負(fù)重游泳力竭時(shí)間和血清生化指標(biāo)的差異，評(píng)價(jià)龍眼干制前后緩解疲勞的效果，為今后提高龍眼生物活性的加工利用提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品制備

2020年9月福建省莆田市華亭鎮(zhèn)宮利村國(guó)領(lǐng)農(nóng)場(chǎng)采集新鮮龍眼樣品，品種為傳統(tǒng)焙干良種‘烏龍嶺’，挑選成熟、無(wú)病蟲害、正常發(fā)育的果實(shí)用于樣品制備。

鮮龍眼凍干粉的制備：新鮮龍眼快速轉(zhuǎn)移到實(shí)驗(yàn)室去皮去核，-40℃預(yù)凍24 h，冷阱溫度-45℃、真空度10 Pa升華24 h，溫度55℃真空度10 Pa解析干燥5 h[16]。凍干果肉立即破壁粉碎后備用。

龍眼干凍干粉的制備：新鮮龍眼放入80℃熱風(fēng)干燥箱中烘干至恒重，去皮去核得到果肉，真空冷凍干燥方法同鮮龍眼凍干粉。

凍干粉按照1:10加蒸餾水充分混合后，7000 rpm離心10 min，取上清液45℃真空濃縮至3.3 mL/g保存待用。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性ICR小鼠，20～22 g，許可證號(hào)碼SCXK（滬）：2017-0005，合格證號(hào)：0036802，購(gòu)自上海斯萊克試驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司。

動(dòng)物飼養(yǎng)條件：溫度(26±1)℃，濕度50%～60%，12 h交替照明/黑暗，自由攝食、飲水。試驗(yàn)地點(diǎn)為福建省中醫(yī)藥研究院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，于2020年11月完成。

1.3 試劑和儀器

洋參含片，廣東康富來(lái)藥業(yè)有限公司，批號(hào)：KJ003；ELISA試劑盒，上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)：LOT20201211A。

FD-1D-50型冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；HS0950全自動(dòng)料理機(jī)，西屋廚房小家電有限公司；BSA電子分析天平，德國(guó)賽多利斯集團(tuán)；UPW-20N型超純水機(jī)，北京歷元電子儀器有限公司；GL-21M高速冷凍離心機(jī)，長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；RE-5203旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；HWS-24電熱恒溫水浴鍋，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；CLARIO star多功能酶標(biāo)儀，德國(guó)BMG Labtech公司；BS400全自動(dòng)生化儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物分組及給藥 ICR雄性小鼠試驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，按照體重隨機(jī)分成4組，每組10只，分別為空白對(duì)照組（蒸餾水）、陽(yáng)性對(duì)照組（洋參含片，0.2 g/kg）、鮮龍眼組(6 g/kg)、龍眼干組(6 g/kg)。試驗(yàn)過(guò)程中，按0.2 mL/10 g的體積灌胃，每天1次，連續(xù)給藥21天。

1.4.2 小鼠各生化指標(biāo)的測(cè)定

體重測(cè)定[17]：分別在第1、7、14、21天給藥1 h后稱量小鼠的質(zhì)量，計(jì)算凈體重增率，數(shù)據(jù)保留至0.1 g。

負(fù)重游泳試驗(yàn)[17]：于末次給藥1 h后，將為小鼠質(zhì)量4%的鉛塊系于尾部，放入水深40 cm，水溫(25±1)℃的游泳池中負(fù)重游泳。記錄自開(kāi)始至頭部沉入水中，10 s仍不能返回水面的時(shí)間，即小鼠的力竭游泳時(shí)間。

血尿素氮和血乳酸脫氫酶含量測(cè)定[17]：負(fù)重游泳休息60 min后立即眼眶采血，4℃3500 rpm離心10 min，收集血清，按照試劑盒要求檢測(cè)血尿素氮和血乳酸脫氫酶含量。

肝糖原含量測(cè)定[17]：眼眶采血完畢處死小鼠，取肝臟組織勻漿，按照試劑盒的要求檢測(cè)肝糖原含量。

1.5 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)分析選用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件完成，獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)差異顯著性，結(jié)果用x±SD表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 龍眼干和鮮龍眼對(duì)試驗(yàn)小鼠體重的影響

灌胃給藥后各組試驗(yàn)小鼠體重增加呈相同的趨勢(shì)（表1）。給藥21天后龍眼干組的試驗(yàn)小鼠體重從(22.7±0.9)g增加到(33.4±1.6)g，提高了47.1%，高于鮮龍眼組(44.9%)和陽(yáng)性對(duì)照組(46.5%)。但與空白對(duì)照組相比，3個(gè)試驗(yàn)處理組的小鼠體重均差異不顯著(P＞0.05)，說(shuō)明龍眼干制前后對(duì)試驗(yàn)小鼠體重增加無(wú)明顯的影響。

表1 龍眼對(duì)試驗(yàn)小鼠體重的影響

2.2 龍眼干和鮮龍眼對(duì)試驗(yàn)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響

游泳時(shí)間延長(zhǎng)是運(yùn)動(dòng)耐力加強(qiáng)的直接、客觀指標(biāo)，可以直觀反映受試藥品的抗疲勞試驗(yàn)效果[17]。試驗(yàn)小鼠灌胃給藥龍眼后力竭游泳時(shí)間出現(xiàn)不同程度延長(zhǎng)（圖1）。龍眼干組小鼠的力竭游泳時(shí)間為(1322.5±309.3)s，比空白對(duì)照組相比延長(zhǎng)59.3%，達(dá)到極顯著水平(P＜0.01)，接近陽(yáng)性對(duì)照組；而鮮龍眼組小鼠的力竭游泳時(shí)間比空白對(duì)照組相比延長(zhǎng)40.7%(P＜0.05)。表明龍眼可以顯著延長(zhǎng)試驗(yàn)小鼠的力竭游泳時(shí)間，其中龍眼干效果更好，表現(xiàn)出更好的緩解疲勞潛力。

圖1 龍眼對(duì)試驗(yàn)小鼠力竭游泳時(shí)間的影響

2.3 試驗(yàn)小鼠游泳后肝糖原含量的變化

糖原是運(yùn)動(dòng)能量的重要來(lái)源，其含量直接影響機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力，被作為評(píng)價(jià)疲勞發(fā)生快慢或程度的生化指標(biāo)[18]。龍眼干和鮮龍眼均可以提高受試小鼠游泳后血清中肝糖原的含量（圖2）。分析表明，龍眼干組比空白對(duì)照組小鼠血清中肝糖原含量提高34.7%，方差分析達(dá)到極顯著水平(P＜0.01)，明顯高于鮮龍眼組(18.7%)。說(shuō)明龍眼干比鮮龍眼能提供更多的肝糖原，以維持機(jī)體正常的運(yùn)動(dòng)功能。

圖2 試驗(yàn)小鼠游泳后肝糖原含量的變化

2.4 試驗(yàn)小鼠游泳后血尿素氮含量的影響

血尿素氮是運(yùn)動(dòng)后的代謝產(chǎn)物，可以反映機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)的分解、合成代謝狀況和肌肉細(xì)胞大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后的損傷及恢復(fù)情況，被用來(lái)評(píng)價(jià)機(jī)體在運(yùn)動(dòng)情況下體力負(fù)荷的承受能力[18]。試驗(yàn)結(jié)果顯示龍眼干和鮮龍眼均可以有效地降低小鼠血尿素氮的含量（圖3）。龍眼干組試驗(yàn)小鼠的血尿素氮含量比空白對(duì)照組降低13.8%，高于鮮龍眼組(12.1%)，方差分析均達(dá)到顯著差異水平(P＜0.05)，與陽(yáng)性對(duì)照組一致。

圖3 試驗(yàn)小鼠游泳后血尿素含量的變化

2.5 試驗(yàn)小鼠游泳后血乳酸脫氫酶(LDH)含量的影響

乳酸脫氫酶的功能是減少運(yùn)動(dòng)后乳酸在肌肉中的堆積。研究表明，陽(yáng)性對(duì)照組、龍眼干組和鮮龍眼組給藥后均可以提高小鼠血清中LDH的含量（圖4）。分析表明，龍眼干組中LDH含量比空白對(duì)照組提高35.8%(P＜0.05)，而鮮龍眼組則提高35.9%(P＜0.01)。說(shuō)明龍眼能顯著增加小鼠LDH總活力，有效地清除游泳后機(jī)體的代謝產(chǎn)物，延緩疲勞的發(fā)生，鮮龍眼組的效果更佳。

圖4 試驗(yàn)小鼠游泳后LDH含量的變化

3 討論

3.1 龍眼的緩解疲勞功效

疲勞是機(jī)體不能持續(xù)其機(jī)能在一定水平上或不能維持預(yù)定運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的一種狀態(tài)，主要表現(xiàn)為倦怠、乏力、煩躁，工作效率下降，身體與精神狀態(tài)不佳，若長(zhǎng)期積累不及時(shí)消除，可逐漸發(fā)展成為慢性疲勞綜合征，危害身心健康[19]。隨著全球化經(jīng)濟(jì)發(fā)展，快節(jié)奏的生活方式引發(fā)亞健康群體逐漸增大。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，中國(guó)處于亞健康的人群超過(guò)半數(shù)，而且群體數(shù)量還在增加。亞健康人群的最典型特征就是容易產(chǎn)生疲勞感、免疫力低下等[20-21]。龍眼是中醫(yī)中常用于養(yǎng)心安神、強(qiáng)魄健體的一味主藥，近年在治未病方面應(yīng)用較多[22]。本試驗(yàn)結(jié)果表明灌胃干制龍眼果肉小鼠的力竭游泳時(shí)間最長(zhǎng)，與陽(yáng)性對(duì)照洋參含片無(wú)差異，這一結(jié)論為中醫(yī)中用龍眼作為主藥治療亞健康疾病提供理論依據(jù)。

3.2 龍眼干制前后緩解疲勞的差異

研究發(fā)現(xiàn)灌胃新鮮龍眼小鼠的力竭游泳時(shí)間、血乳酸脫氫酶含量顯著高于對(duì)照組，血尿素氮含量顯著低于對(duì)照組，這與聶英濤等[11]試驗(yàn)中新鮮龍眼多糖在低中高劑量組抗疲勞作用的研究結(jié)果一致，也與以龍眼汁為主要成分運(yùn)動(dòng)功能飲料延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的結(jié)論[15]一致。推測(cè)多糖是新鮮龍眼緩解運(yùn)動(dòng)疲勞的主要活性成分之一，也可能和龍眼中豐富的哌啶、氨基酸、黃酮等代謝組分[23]有關(guān)。

課題組前期研究顯示龍眼果肉中的可溶性糖為葡萄糖、果糖、蔗糖，干制后糖組分不變，果糖、葡萄糖的占比提高，蔗糖占比降低[24]。本研究顯示小鼠灌胃龍眼干后，其肝糖原含量極顯著高于新鮮龍眼組，與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)差異，推測(cè)可能與干制后龍眼果實(shí)中糖原合成底物之一的葡萄糖等含量增加有關(guān)。因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間緊張運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致體力的衰竭總是和肌糖原的耗竭同時(shí)發(fā)生[25]，龍眼干可能增加肝糖原儲(chǔ)備或/和減少運(yùn)動(dòng)時(shí)肝糖原的消耗來(lái)提供更多能量，從而抵抗疲勞的產(chǎn)生。

本研究中龍眼干組的試驗(yàn)劑量為6 g/kg，該劑量條件下可以極顯著促進(jìn)肝糖原積累，延長(zhǎng)負(fù)重游泳時(shí)間，與郭超萍等[14]高劑量組(9 g/kg)的結(jié)論一致。而在降低血尿素氮含量，提高乳酸脫氫酶含量的指標(biāo)上，與郭超萍等[14]中劑量組(4.5 g/kg)的結(jié)論一致，比高劑量組的效果差。體外試驗(yàn)結(jié)果顯示龍眼干制后多糖、多酚的DPPH、ABTS、FRAP和清除羥自由基能力均有減弱的結(jié)論[9-10]不一致。但與韓苗苗等[26]的研究結(jié)果龍眼干燥處理后多糖的DPPH、羥自由基清除能力、FRAP能力增強(qiáng)的結(jié)論一致。推測(cè)干燥過(guò)程中高溫促進(jìn)美拉德反應(yīng)的發(fā)生，果肉中的蛋白質(zhì)和多糖或美拉德產(chǎn)物進(jìn)一步聚合，生成噻吩、噻唑、吡咯等雜環(huán)化合物增強(qiáng)清除自由基的效果，還可能生成吡咯酮、還原酮類、脫氧果糖嗪等來(lái)提高總抗氧化能力[27-28]。龍眼中已經(jīng)鑒定出9大類23個(gè)亞類共706種成分[23,29]，今后將對(duì)龍眼干制前后代謝成分進(jìn)行分析和功能鑒定，也將探討干制過(guò)程中美拉德反應(yīng)產(chǎn)物的變化，以期明確龍眼的緩解疲勞機(jī)制并篩選出對(duì)應(yīng)的功能因子。

4 結(jié)論

本研究通過(guò)小鼠的負(fù)重游泳試驗(yàn)說(shuō)明龍眼果肉干制前后均對(duì)小鼠的體重?zé)o影響，均具有明顯的緩解運(yùn)動(dòng)疲勞效果。龍眼干制后緩解運(yùn)動(dòng)疲勞的效果顯著優(yōu)于新鮮龍眼，兩者緩解疲勞的機(jī)制存在差異。新鮮龍眼主要通過(guò)顯著降低血尿素氮的含量和血乳酸脫氫酶的積累來(lái)延長(zhǎng)小鼠的力竭游泳時(shí)間達(dá)到緩解運(yùn)動(dòng)疲勞。龍眼干則主要通過(guò)顯著提高小鼠血清中的肝糖原含量，降低血尿素氮含量來(lái)延長(zhǎng)力竭游泳時(shí)間達(dá)到緩解運(yùn)動(dòng)疲勞。該試驗(yàn)結(jié)果也佐證了傳統(tǒng)藥典以龍眼干果肉入藥的合理性。