蘇碩楠，侯林中

（唐山市工人醫(yī)院，河北唐山 063003）

腸道內(nèi)特定的微生物群可有效維持免疫平衡，并對人體健康起著至關(guān)重要的作用，當(dāng)正常微生物群遭到破壞則打破了腸道免疫系統(tǒng)平衡，可能會引發(fā)疾病[1?2]。益生菌可通過改善腸道微生物構(gòu)成、產(chǎn)生抗炎因子、抑制病原菌群生長，從而預(yù)防和治療一些消化道疾病[3?5]。乳桿菌屬（Lactobacillus）細(xì)菌是腸道正常菌群中益生菌的重要成員，近年來越來越引起食品科學(xué)、微生物學(xué)、微生態(tài)學(xué)等領(lǐng)域的關(guān)注[6?8]。

乳雙歧桿菌V9（Bifidobacterium lactisV9，B.lactisV9）、干酪乳桿菌Zhang（Lactobacillus caseiZhang，L.caseiZhang）、植物乳桿菌P-8 （Lactobacillus plantarumP-8，P-8）均為國內(nèi)外目前用于開發(fā)的重要的Lactobacillus屬細(xì)菌[9?11]。這三種菌株均具有良好的耐酸性，能夠較好的耐受人工胃液、腸液以及膽鹽，是目前國內(nèi)外重點(diǎn)研究開發(fā)的益生菌[12?13]。越來越多研究證明，Lactobacillus屬細(xì)菌對維持腸道微生態(tài)平衡，增強(qiáng)腸道免疫功能尤為重要[5，14]。

不同乳酸菌株的免疫調(diào)節(jié)功能因菌株類型而異。一方面是由于不同菌株細(xì)胞壁構(gòu)成不同，其對免疫細(xì)胞的影響也不同[5]。另外一方面，不同的乳酸菌產(chǎn)生的胞外多糖等代謝產(chǎn)物亦不同，其對免疫力的影響也不同[15?17]。低聚果糖（fructo-oligosaccharide，F(xiàn)OS）是一種不易被小腸吸收的膳食纖維，可促進(jìn)腸道中雙歧桿菌的生長，抑制病原菌生長，從調(diào)節(jié)腸道菌群[18?19]。研究表明，益生菌與低聚果糖等益生因子合用可更好地調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力[20]。但益生菌V9、P-8、Zhang 與FOS 聯(lián)合使用對免疫系統(tǒng)的影響尚未見研究報道。本文重點(diǎn)通過檢測三種益生菌（乳雙歧桿菌V9、干酪乳桿菌Zhang、植物乳桿菌P-8）與低果聚糖復(fù)配的益生復(fù)合粉（BLLF）對小鼠免疫臟器指數(shù)、細(xì)胞免疫、單核-巨噬細(xì)胞功能、體液免疫及NK 細(xì)胞活性的影響，以探討其對小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用，為其開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

乳雙歧桿菌V9（活菌數(shù)2000 億/g）、干酪乳桿菌Zhang（活菌數(shù)2000 億/g）、植物乳桿菌P-8 菌粉（活菌數(shù)2000 億/g）、低聚果糖 金華銀河生物科技有限公司；刀豆蛋白A（ConA）、二硝基氟苯（DNFB）

Sigma 公司；Hank's 液、RPMI1640 培養(yǎng)基、胎牛血清 美國Gibco 公司；MTT 試劑盒、LDH 檢測試劑盒 英國Abcam 公司；淋巴細(xì)胞分離液、0.4%臺盼蘭溶液 北京索萊寶科技有限公司；印度墨汁、YAC-1 細(xì)胞、20%雞紅細(xì)胞 上海源葉生物科技有限公司；1% NP40、0.2 mol/L 的Tris-HCl 緩沖液（pH=8.2） 碧云天生物科技有限公司；C57BL/6J 小鼠（雄性，18~22 g） 購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動物許可證號：SCXK（京）2019-0010，飼養(yǎng)環(huán)境：室溫（23±2）℃，相對濕度：40%~70%。

MS3 基本型旋渦混合器 德國IKA 公司；去離子水發(fā)生器 美國Millipore 公司；Multiskan MK3型酶標(biāo)儀 美國Thermo Scientific 公司；721 型分光光度計 上海精密科學(xué)儀器有限公司；CX33 顯微鏡日本奧林巴斯。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動物及給藥 參考文獻(xiàn)配比比例[15?16]，稱取冷凍干燥保存的乳雙歧桿菌V9、干酪乳桿菌Zhang、植物乳桿菌P-8，按照質(zhì)量比50:25:25 的比例用雙蒸水溶解至所需濃度后，備用。低聚果糖用雙蒸水溶解至所需濃度后，備用。將小鼠隨機(jī)分為8 個免疫組，每個免疫組分為4 個實(shí)驗(yàn)組，即蒸餾水組（空白組）、BLLF 低、中、高劑量組（三聯(lián)菌0.01 mg/kg+低聚果糖0.1 g/kg、三聯(lián)菌0.02 mg/kg+低聚果糖0.1 g/kg、三聯(lián)菌0.06 mg/kg+低聚果糖0.1 g/kg）0.1 mL/10 g 體重，每日灌胃1 次，連續(xù)30 d。按照文獻(xiàn)中增強(qiáng)免疫力的研究方法對BLLF 進(jìn)行評價[21?24]。

1.2.2 小鼠體重及免疫臟器指數(shù)的測定 每周稱量一次各組小鼠的重量，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天稱重結(jié)束后頸椎脫臼處死，無菌取出小鼠的脾臟、胸腺，將周圍組織剝離干凈，用濾紙吸凈組織表面血液后，稱重，分別計算胸腺或脾臟重量（mg）與體重（g）的比值[25]。

1.2.3 ConA 誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn) 無菌取脾，磨碎后過濾，制成濃度為3×106個/mL 的單細(xì)胞懸液。每孔1.0 mL，加至24 孔培養(yǎng)板中，實(shí)驗(yàn)組加75 μL ConA/孔（終濃度為7.5 μg/mL），對照組加75 μL 無菌水，繼續(xù)培養(yǎng)72 h。測定實(shí)驗(yàn)孔和對照孔在570 nm 處的OD 值[26?27]。

1.2.4 DNFB 誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）實(shí)驗(yàn)（耳腫脹法） 小鼠腹部脫毛后，取50 μL 1% DNFB溶液，均勻涂抹在小鼠腹部皮膚進(jìn)行致敏反應(yīng)。5 d后，取20 μL 1% DNFB 溶液均勻涂抹右耳上，左耳作為對照。24 h 后處死小鼠，采用打孔器取相同大小的左右耳片進(jìn)行稱重。以兩耳片的重量之差表示DTH 的程度[28?29]。

1.2.5 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（半體內(nèi)法） 取20%雞紅細(xì)胞懸液1 mL，腹腔注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)。30 min 后脫臼處死，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2 mL，轉(zhuǎn)動鼠板1 min 后，吸出腹腔洗液1 mL，平均分滴于2 片載玻片上，37 ℃保濕孵育30 min。生理鹽水漂洗后，1:1 丙酮-甲醇溶液固定，4%（v/v）Giemsa-磷酸緩沖液染色3 min，蒸餾水漂洗晾干，油鏡下觀察計數(shù)，計算吞噬指數(shù)和吞噬百分率[30]。

1.2.6 小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn) 將用生理鹽水4 倍稀釋的印度墨汁尾靜脈注入小鼠0.1 mL/10 g。于注入墨汁第2、10 min 分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20 μL，加到2 mL 0.1% Na2CO3溶液中。以Na2CO3溶液為空白對照，用分光光度計在600 nm 波長處測定OD 值并計算吞噬指數(shù)α[24，31]。

1.2.7 抗體生成細(xì)胞測定 收集綿羊紅細(xì)胞（SRBC），用生理鹽水配成2%（v/v）的細(xì)胞懸液，每只鼠腹腔注射0.2 mL 進(jìn)行免疫。4d后處死小鼠，無菌條件下取脾臟，制備脾細(xì)胞懸液，用生理鹽水稀釋成5×106個/mL 的脾細(xì)胞懸液。用Jerne 改良玻片法檢測抗體生成細(xì)胞[23]。

1.2.8 血清溶血素測定 同1.2.7 方法免疫小鼠，4 d后，摘除眼球血于離心管中，收集血清。取300 倍稀釋后的血清1.0 mL，依次加入10% SRBC 0.5 mL、補(bǔ)體1.0 mL，反應(yīng)20 min 后，離心取上清1.0 mL，加都氏試劑3.0 mL。以10% SRBC 0.25 mL 加都氏試劑4.0 mL 混勻后作空白對照。540 nm 處測定各管光密度值，計算半數(shù)溶血值（HC50）[22?23]。

1.2.9 小鼠NK 細(xì)胞活性測定 收集YAC-1 細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至4×105個/mL。無菌取脾，制成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107個/mL。取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各100 μL（效靶比50:1），加入U 型96 孔培養(yǎng)板中，以加靶細(xì)胞+培養(yǎng)液各100 μL 的孔作為靶細(xì)胞自然釋放孔，以加靶細(xì)胞+1% NP40 各100 μL的孔作為靶細(xì)胞最大釋放孔。培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h，1500 r/min 離心，每孔吸取上清100 μL 到平底96 孔培養(yǎng)板中，加入LDH 基質(zhì)液100 μL，反應(yīng)3 min，每孔加入1 mol/L 的HCl 30 μL，490 nm 處測定OD 值，計算NK 細(xì)胞活性[24]。

1.3 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，每組n=10，采用SPSS 10.0 軟件分析，多組間比較采用單因素方差分析（ANOVA）檢驗(yàn)，成對組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠體重、胸腺、脾臟指數(shù)測定結(jié)果

實(shí)驗(yàn)期間，各組小鼠一般狀況良好，未發(fā)現(xiàn)納差、腹瀉、中毒或自然死亡等現(xiàn)象。各組小鼠的初始體重和終末體重均無顯著性差異(P>0.05)，提示低、中、高劑量組BLLF 對健康小鼠均無明顯毒性（見表1）。衡量機(jī)體免疫功能的指標(biāo)為免疫器官的臟器系數(shù)，其中，胸腺和脾臟指數(shù)主要以反映免疫器官的發(fā)育和免疫細(xì)胞的功能狀況為主，同時，間接反映了機(jī)體的整體免疫水平[25]。低、中、高劑量組的BLLF 對小鼠免疫臟器指數(shù)的影響結(jié)果詳見表1。結(jié)果顯示，給予小鼠BLLF 連續(xù)灌胃30 d，低、中、高劑量組小鼠的脾臟/體重比值、胸腺/體重比值與空白對照組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果表明BLLF 對小鼠的免疫器官的重量無顯著影響，進(jìn)一步證明了其安全性。

表1 BLLF 對小鼠臟器/體重比值的影響（±s，n=10）Table 1 Effects of BLLF on mice organs ratios to body weight (±s, n=10)

表1 BLLF 對小鼠臟器/體重比值的影響（±s，n=10）Table 1 Effects of BLLF on mice organs ratios to body weight (±s, n=10)

組別 初始體重（g）終末體重（g）脾臟/體重（mg/g）胸腺/體重（mg/g）空白對照組 20.47±1.14 30.14±1.07 2.56±0.74 2.26±0.58低劑量BLLF組 20.15±1.37 29.25±2.01 2.55±0.47 2.54±0.81中劑量BLLF組 20.75±1.50 29.46±1.59 2.84±1.31 2.15±0.95高劑量BLLF組 20.45±1.05 30.36±1.67 2.91±1.14 2.10±0.45

2.2 不同劑量BLLF 對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

T 淋巴細(xì)胞受到ConA 刺激后會轉(zhuǎn)化為母細(xì)胞持續(xù)增殖。通過MTT 法檢測其細(xì)胞增殖能力可以反映細(xì)胞免疫功能的強(qiáng)弱[25]。不同劑量BLLF 對ConA 促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖作用結(jié)果見表2。統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，低、中、高劑量BLLF 組的OD 差值與對照組的OD 差值間均無顯著性差異（P>0.05）。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明BLLF 對小鼠的脾淋巴細(xì)胞的增殖能力無顯著影響。

表2 BLLF 對ConA 誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力及耳廓腫脹度的影響（±s，n=10）Table 2 Effects of BLLF on ConA-induced mouse splenic lymphocyte transformation ability and auricle swelling degree (±s, n=10)

表2 BLLF 對ConA 誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力及耳廓腫脹度的影響（±s，n=10）Table 2 Effects of BLLF on ConA-induced mouse splenic lymphocyte transformation ability and auricle swelling degree (±s, n=10)

注：與空白對照組比較，*P＜0.05；表3~表5同。

組別脾淋巴細(xì)胞增殖能力（OD570 nm）耳廓腫脹度（mg）ConA（?） Con（+） OD差值空白對照組 0.41±0.12 0.85±0.09 0.44±0.11 12.01±1.04低劑量BLLF組 0.42±0.10 0.87±0.08 0.45±0.09 13.18±2.12中劑量BLLF組 0.44±0.07 0.93±0.14 0.49±0.12 15.45±2.04*高劑量BLLF組 0.46±0.09 1.01±0.13 0.55±0.13 16.50±2.25*

DNFB 涂抹于小鼠耳廓后，可引起遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，導(dǎo)致鼠耳局部組織增厚。小鼠耳廓腫脹度可反映小鼠細(xì)胞免疫功能的強(qiáng)弱[25]。表2 中的數(shù)據(jù)顯示，中、高劑量BLLF 組的耳廓腫脹度顯著（P＜0.05）高于空白對照組。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明BLLF 可增強(qiáng)DNFB 誘發(fā)的遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，正向調(diào)控小鼠的細(xì)胞免疫功能。研究表明，益生菌可影響腸道黏膜免疫細(xì)胞群的數(shù)量和分布，增強(qiáng)腸道免疫功能。低果聚糖在腸道不可被消化吸收，也可以促進(jìn)腸道有益菌的增殖，進(jìn)而增強(qiáng)益生菌免疫調(diào)控作用[19]。

2.3 不同劑量BLLF 對小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能的影響

單核-巨噬細(xì)胞是具有抗感染、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的免疫細(xì)胞，反映了機(jī)體非特異性免疫反應(yīng)的強(qiáng)弱。當(dāng)機(jī)體受到病原體或異物侵入時，這些巨噬細(xì)胞能向這些部位募集，并通過胞吞作用吞噬并消化分解異物[26]。由表3 可知，給予小鼠低、中、高劑量的BLLF 30 d 后，與對照組相比，高劑量組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)均顯著（P＜0.05）升高。

表3 BLLF 對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響（±s，n = 10）Table 3 Effects of BLLF on the function of monocyte macrophage of the mice (±s, n=10)

表3 BLLF 對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響（±s，n = 10）Table 3 Effects of BLLF on the function of monocyte macrophage of the mice (±s, n=10)

組別單核-巨噬細(xì)胞功能 小鼠碳廓清能力吞噬率（%） 吞噬指數(shù) 吞噬指數(shù)（α）空白對照組 16.57±3.68 0.23±0.10 6.18 ±1.34低劑量BLLF組 18.26±3.24 0.29±0.05 7.04±1.12中劑量BLLF組 17.24±4.05 0.26±0.14 7.86±0.56*高劑量BLLF組 31.35±2.56* 0.50±0.12* 8.27±0.89*

BLLF 對小鼠碳廓清功能的影響結(jié)果見表3。其中中、高劑量組小鼠的吞噬指數(shù)α與空白對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。與對照組相比，中、高劑量組碳廓清功能顯著升高（P＜0.05）。這一結(jié)果表明BLLF 能有效增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提示小鼠非特異性免疫能力明顯增強(qiáng)。這可能是益生菌與低果聚糖共同作用的結(jié)果。益生菌可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬活性，當(dāng)腸道受到到病原體或異物侵入時，這些巨噬細(xì)胞能向這些部位募集，并通過胞吞作用吞噬并消化分解異物，增加腸道防御能力。低果聚糖在腸道不可被消化吸收，且在腸道可促進(jìn)腸道雙歧桿菌的增殖[19]。

2.4 不同劑量BLLF 對小鼠體液免疫功能的影響

溶血空斑試驗(yàn)可用于體外檢測和計數(shù)抗體生成細(xì)胞數(shù)目[31]。空斑的數(shù)量是反映機(jī)體的體液免疫功能的重要指標(biāo)。低、中、高三個劑量BLLF 組與空白對照組的空斑數(shù)（每106脾細(xì)胞）見表4。統(tǒng)計分析結(jié)果表明，中、高劑量組的空斑數(shù)與空白對照組相比具有顯著性差異（P＜0.05），說明給予BLLF 能明顯提高小鼠體液免疫功能。

表4 BLLF 對小鼠抗體生成細(xì)胞與血清溶血素檢測結(jié)果（±s，n=10）

Table 4 Effects of BLLF on number of antibody producing cells and hemolytic activity (±s, n=10)

表4 BLLF 對小鼠抗體生成細(xì)胞與血清溶血素檢測結(jié)果（±s，n=10）

組別 空斑數(shù)（每106脾細(xì)胞） HC50空白對照組 16±4 64.25±14.58低劑量BLLF組 18±2 73.43±18.37中劑量BLLF組 29±6* 95.68±10.54*高劑量BLLF組 30±4* 106.83±16.58*

小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的抗體溶血素在補(bǔ)體的參與下，與SRBC 共同孵育發(fā)生溶血反應(yīng)，釋放血紅蛋白，而通過測定血紅蛋白含量能反映動物產(chǎn)生溶血素的能力[24,26]。HC50的測定可評價SRBC 細(xì)胞發(fā)生溶血反應(yīng)產(chǎn)生溶血素的能力。低、中、高三個劑量BLLF 組與空白對照組的HC50值見表4。統(tǒng)計分析結(jié)果表明，中、高劑量組的HC50值與空白對照組相比具有顯著性差異（P＜0.05）。這進(jìn)一步證明，BLLF 可顯著提高小鼠的體液免疫功能。益生菌可通過調(diào)節(jié)抗炎因子、轉(zhuǎn)錄因子等的分泌影響局部和整體的免疫應(yīng)答反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。低果聚糖也可以機(jī)體血清IgG 抗體的濃度，進(jìn)而增強(qiáng)益生菌的體液免疫功能[20]。

2.5 不同劑量BLLF 對小鼠NK 細(xì)胞活性的影響

NK 細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，其活化后可合成和分泌多種細(xì)胞因子，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)及靶細(xì)胞殺傷作用[28?29]。低、中、高三個劑量BLLF 組與空白對照組的NK 細(xì)胞活性見表5。統(tǒng)計分析結(jié)果表明，中、高劑量BLLF 組NK 細(xì)胞活性顯著高于對照組（P＜0.05）。這表明，中、高劑量BLLF 可顯著增強(qiáng)NK 細(xì)胞的活性，進(jìn)而提高機(jī)體靶細(xì)胞對NK 細(xì)胞殺傷的敏感性。益生菌及其代謝產(chǎn)物可通過增強(qiáng)機(jī)體的免疫反應(yīng)，提高NK 細(xì)胞的殺傷活性。低果聚糖也可以調(diào)控如INFγ/IL-4、IL-10、TGF-β等的分泌，進(jìn)而增強(qiáng)益生菌的體液免疫功能[20]。

表5 BLLF 對NK 細(xì)胞活性的影響（±s，n=10）Table 5 Effects of BLLF on NK cell activities (±s, n=10)

表5 BLLF 對NK 細(xì)胞活性的影響（±s，n=10）Table 5 Effects of BLLF on NK cell activities (±s, n=10)

組別 NK細(xì)胞活性（%）空白對照組 24.17±10.42低劑量BLLF組 27.24±14.15中劑量BLLF組 36.51±10.28*高劑量BLLF組 38.67±9.38*

3 討論與結(jié)論

乳酸菌能夠調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系的平衡，在增強(qiáng)機(jī)體抵抗力方面具有不可低估的作用[6?7，32]。研究證實(shí)，不同益生菌株對免疫功能的影響也不同[3?5]。研究表明，不同的乳酸菌進(jìn)入機(jī)體后，能通過不同的機(jī)制激活腸黏膜免疫系統(tǒng)，起到保護(hù)機(jī)體免受感染源的侵襲、抗突變和防癌、預(yù)防糖尿病和心血管疾病的作用[5,32?33]。趙雯等[32]研究表明，熱滅活的乳雙歧桿菌BL-99 能夠通過增強(qiáng)免疫球蛋白A 的分泌，促使腸黏膜淋巴細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能等機(jī)制增強(qiáng)機(jī)體免疫力。乳雙歧桿菌M8 可以通過增加淋巴細(xì)胞比例、T 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖能力和促進(jìn)細(xì)胞因子分泌等機(jī)制改善細(xì)胞免疫、體液免疫及固有免疫，從而增強(qiáng)免疫功能低下的大鼠的免疫功能[33]。

隨著益生菌產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，多元化的復(fù)合益生菌產(chǎn)品不斷涌現(xiàn)。研究表明，低聚糖類益生元可作為益生菌的營養(yǎng)和能量來源，協(xié)同促進(jìn)益生菌在腸道的定植和功效發(fā)揮，增強(qiáng)益生菌的免疫保護(hù)功能。Finamore 等[34]研究發(fā)現(xiàn)，乳桿菌與長雙歧桿菌的復(fù)合制劑能增強(qiáng)T 細(xì)胞、B 細(xì)胞的功能和NK 細(xì)胞活性進(jìn)而提高機(jī)體免疫力。朱自平等[20]研究表明，嗜酸乳桿菌LA85 和低聚果糖復(fù)配組成合生元菌劑可顯著增加小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力、抗體生成細(xì)胞數(shù)、HC50值，并可提高小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬能力和NK 活性。本研究評估了三種益生菌與低聚果糖復(fù)配的益生復(fù)合粉對機(jī)體免疫能力的影響，為其開發(fā)和利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。胸腺、脾臟是動物體內(nèi)主要的免疫器官，胸腺和脾臟指數(shù)能反映免疫器官的發(fā)育和免疫細(xì)胞的功能狀況[23?25]。本研究結(jié)果表明，各劑量BLLF 組小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)無差異。這初步明確了給予高、中、低劑量BLLF對小鼠的安全性。其急性毒性、遺傳毒性、亞慢性毒性等尚需進(jìn)一步的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

ConA 誘導(dǎo)的T 細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化率和DNFB 誘導(dǎo)小鼠DTH 常用來反映細(xì)胞免疫能力的強(qiáng)弱。近年來關(guān)于乳酸菌對遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）的影響已有一些報道。如乳酸菌Lactobacillus casei（L. casei）活菌體細(xì)胞呈時間和濃度依賴性地增強(qiáng)鼠體內(nèi)抗原特異性的DTH 效應(yīng)[35]。本研究結(jié)果表明，BLLF 對ConA 誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化無顯著影響（P>0.05），而中、高劑量BLLF 組的耳廓腫脹度顯著高于空白對照組（P＜0.05）。這與文獻(xiàn)報道相符[34?35]。

乳酸菌細(xì)胞壁肽聚糖、脂磷壁酸或胞外多糖等成分激活免疫系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞。常見的雙歧桿菌、乳酸桿菌和鼠李糖乳桿菌都可以有效提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力[32,34]。本研究結(jié)果表明，高劑量BLLF 可顯著提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬能力（P＜0.05），中、高劑量BLLF 可顯著增加小鼠碳廓清功能（P＜0.05）。益生菌細(xì)胞壁肽聚糖的主要成分是胞壁酰二肽，可激活巨噬細(xì)胞釋放IL-1 和IL-6，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，增強(qiáng)NK 細(xì)胞的殺傷作用[32?35]。本研究結(jié)果表明，中、高劑量BLLF 可顯著增強(qiáng)NK 細(xì)胞的活性（P＜0.05）。

綜上所述，BLLF 可通過增強(qiáng)細(xì)胞免疫、單核-巨噬細(xì)胞功能、體液免疫及NK 細(xì)胞活性來增強(qiáng)小鼠的免疫系統(tǒng)水平。該制劑與其他益生菌復(fù)方制劑的相比，其對免疫功能的調(diào)控機(jī)制相似，但確切的分子水平的調(diào)控機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。本研究為乳雙歧桿菌V9、干酪乳桿菌Zhang、植物乳桿菌P-8、FOS組成的復(fù)合制劑的增強(qiáng)免疫力的功能提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持，也為其進(jìn)一步的開發(fā)和利用奠定了基礎(chǔ)。