張小倩,張騰騰,盧寶偉,孟祥松,楊雨琴,安鳳霞
(亳州學(xué)院 中藥學(xué)院,安徽 亳州 236800)
牛蒡子(Fructus Arctii)為菊科植物牛蒡(Arctium lappa L.)的干燥成熟果實(shí),又名惡實(shí),大力子,始載于《名醫(yī)別錄》,為歷代《中華人民共和國(guó)藥典》收錄。傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論認(rèn)為牛蒡子性寒,味辛、苦,歸肺、胃二經(jīng),具有疏散風(fēng)熱,宣肺透疹,解毒利咽的功效,主要用于風(fēng)熱感冒,咳嗽痰多,麻疹,風(fēng)疹,咽喉腫痛,痄腮,丹毒,癰腫瘡毒等。牛蒡?yàn)槎晟荼局参?,秋季果?shí)成熟時(shí)采收,主產(chǎn)于吉林,遼寧,黑龍江,浙江等地。國(guó)外分布于日本及歐洲、伊朗、阿富汗、印度等國(guó)[1]。
牛蒡作為一種藥食兩用的植物,具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。在日本,牛蒡的根被稱(chēng)為“東洋參”,深受當(dāng)?shù)厝说南矏?ài),研究發(fā)現(xiàn)牛蒡根具有降血壓、健脾胃、補(bǔ)腎壯陽(yáng)的功效,近年來(lái),牛蒡根也作為一種高檔蔬菜出現(xiàn)在國(guó)內(nèi)各大超市。牛蒡的種子(牛蒡子)作為傳統(tǒng)中藥,具有悠久的使用歷史,關(guān)于牛蒡子最早的使用記錄可以追溯到魏晉時(shí)期,其療效顯著,應(yīng)用廣泛。牛蒡子中化學(xué)成分的研究始于20世紀(jì)30年代,自1929年日本學(xué)者田?川越等首次在牛蒡子中分離出牛蒡子苷元和牛蒡子苷后,關(guān)于牛蒡子中化學(xué)活性物質(zhì)的研究取得了重要的進(jìn)展,目前已經(jīng)從牛蒡子中分離純化出100余種不同類(lèi)型的天然產(chǎn)物。牛蒡子中化學(xué)成分種類(lèi)復(fù)雜多樣,主要有木脂素、油脂、揮發(fā)油、三萜、蛋白質(zhì)、多糖等,其中木脂素類(lèi)成分是牛蒡子的主要成分,中外學(xué)者也將其作為評(píng)價(jià)牛蒡子質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn),2020版《中華人民共和國(guó)藥典》將木脂素類(lèi)成分牛蒡子苷作為牛蒡子質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo),并規(guī)定其含量不得低于5.0%。牛蒡子中木脂素類(lèi)成分具有較高的藥理活性,現(xiàn)代藥理研究表明,其具有抗炎、抗凝、抗腫瘤、抗氧化、抗糖尿病等活性[2-15]。為進(jìn)一步闡明其藥理活性,指導(dǎo)合理用藥,發(fā)掘其中有潛力的活性成分,對(duì)其物質(zhì)基礎(chǔ)研究至關(guān)重要;不僅如此,近年來(lái)隨著分離分析技術(shù)的提高,發(fā)現(xiàn)牛蒡子中仍含有大量的未知木脂素類(lèi)成分,需要開(kāi)展更深入的分離制備工作。
木脂素(lignans)是一類(lèi)由苯丙素單位(C6-C3)聚合而成的天然產(chǎn)物,通常指代的是二聚物,少數(shù)是三聚物或四聚物。由于組成木脂素的C6-C3單體縮合位置不同及其側(cè)鏈γ-碳原子上的含氧基團(tuán)相互脫水縮合等反應(yīng),形成了不同類(lèi)型的木脂素。最早Haworth把C6-C3單元側(cè)鏈通過(guò)β-碳聚合而成的化合物稱(chēng)為木脂素類(lèi),基本母核結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1,后來(lái)Gottlich把新發(fā)現(xiàn)的由其他位置連接生成的化合物稱(chēng)為新木脂素類(lèi)(neolignan)化合物。
圖1 木脂素母核
木脂素類(lèi)成分作為牛蒡子中的主要成分,含量豐富復(fù)雜,迄今為止,從牛蒡子中分離出的木脂素類(lèi)化合物已達(dá)60多個(gè),且它們的基本母核相似,大多是以2個(gè)單元苯丙素(C6-C3)通過(guò)分β、γ縮合成一個(gè)五元環(huán)內(nèi)脂(二芐基丁內(nèi)脂)。
木脂素作為自然界中常見(jiàn)的一類(lèi)組分,關(guān)于它的分析方法很多,如紫外-可見(jiàn)分光光度法、薄層色譜掃描法、液相色譜法、氣相色譜法、超臨界流體色譜法、毛細(xì)管電泳法以及各種聯(lián)用技術(shù)等。在上述眾多方法中,高效液相色譜法因其高效、快速,重復(fù)性好,穩(wěn)定性高,適用范圍廣等特點(diǎn),已成為木脂素的主要分析手段。2020版《中華人民共和國(guó)藥典》關(guān)于牛蒡子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定部分,就是采用高效液相色譜儀對(duì)牛蒡子中主要化合物牛蒡子苷進(jìn)行含量測(cè)定。超臨界流體色譜作為一種新型的色譜分析技術(shù)結(jié)合了液相色譜與氣相色譜共同的優(yōu)點(diǎn),具有諸多優(yōu)勢(shì),如快速、節(jié)約有機(jī)溶劑,適用范圍廣等優(yōu)勢(shì),這些特點(diǎn)使其在天然產(chǎn)物的分析中具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),故以下主要介紹液相色譜和超臨界流體色譜以及由其發(fā)展衍生出的新技術(shù)在木脂素類(lèi)化合物分析中的應(yīng)用。
液相色譜最早由俄國(guó)科學(xué)家茨維特(Tswett)在分離植物色素時(shí)發(fā)現(xiàn),但是受當(dāng)時(shí)儀器條件與分離材料的限制,并沒(méi)有體現(xiàn)出其出色的分離能力。直到20世紀(jì)60年代,隨著高壓恒流泵應(yīng)用到高效液相色譜儀上,高效液相色譜技術(shù)(High performance liquid chromatography,HPLC)才有了質(zhì)的發(fā)展。如今,HPLC已成為分析天然產(chǎn)物最主要的方法之一,具有樣品用量少、色譜柱可反復(fù)利用、易回收、自動(dòng)化程度高、成本低等優(yōu)勢(shì)。根據(jù)HPLC中流動(dòng)相與固定相極性大小的區(qū)別,將HPLC分為正相色譜(NPLC)和反相色譜(RPLC),木脂素極性相對(duì)較弱,在RPLC中具有很好的保留,利于木脂素的分析。木脂素類(lèi)成分牛蒡子苷及其苷元為牛蒡子的主要化學(xué)成分,實(shí)現(xiàn)常采用RPLC對(duì)其進(jìn)行分析,為了更深入的了解牛蒡子的質(zhì)量,楊亮蕊[16]等采用RPLC對(duì)牛蒡子中牛蒡子苷及其苷元的含量進(jìn)行了測(cè)定。實(shí)驗(yàn)采用Agilent C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色譜柱,流動(dòng)相體系為甲醇:水,梯度洗脫條件:30%甲醇(0~5 min),30%~40%甲醇(5~6 min),45%甲醇(6~25 min),0.8 mL/min的流速,25 ℃的柱溫,280 nm的檢測(cè)波長(zhǎng)。結(jié)果顯示牛蒡子苷及其苷元均實(shí)現(xiàn)了較好的分離度,且整個(gè)分析在25 min內(nèi)全部完成。
RPLC的保留機(jī)理主要是固定相與樣品之間的疏水作用力,保留時(shí)間會(huì)隨著被分析樣品極性的增強(qiáng)而減弱。天然產(chǎn)物中的木脂素多以游離的形式存在,其極性相對(duì)較弱,在RPLC上保留較強(qiáng),同時(shí)隨著木脂素母核上羥基的增加,使樣品極性增強(qiáng),保留減弱。糖基化會(huì)使木脂素的極性大大增加,隨著木脂素苷上連接的糖數(shù)量的增加,樣品會(huì)變得慢慢溶于強(qiáng)極性溶劑,在RPLC上的保留較弱。此時(shí),采用親水色譜(HILIC)對(duì)其分析能夠很好地解決這個(gè)問(wèn)題,實(shí)現(xiàn)較好的保留[17-19]。
HILIC從液相色譜劃分標(biāo)準(zhǔn)來(lái)看,可以認(rèn)為是一種特殊的NPLC,但是它又兼容了RPLC的流動(dòng)相優(yōu)勢(shì)。HILIC通常使用水和乙腈等作為流動(dòng)相,相比NPLC的流動(dòng)相可以部分解決強(qiáng)極性化合物的溶解性問(wèn)題,而且又能很好的彌補(bǔ)RPLC對(duì)強(qiáng)極性化合物保留較差的不足。HILIC的分離機(jī)理也不同于傳統(tǒng)液相色譜,目前比較成熟的理論認(rèn)為HILIC的固定相表面會(huì)形成一層富水層,極性化合物會(huì)在這個(gè)富水層與流動(dòng)相之間反復(fù)分配,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)各目標(biāo)化合物的分離。植物化學(xué)研究者在對(duì)天然產(chǎn)物研究時(shí),多是采用有機(jī)溶劑提取研究對(duì)象中的有效成分,而忽視了大量水溶性的成分,尤其在對(duì)中藥有效成分研究時(shí)更應(yīng)該多注意親水性成分。牛蒡子水提液中存在大量綠原酸、咖啡酸等簡(jiǎn)單苯丙素類(lèi)成分,這些成分可能是牛蒡子發(fā)揮抗病毒作用的主要成分,但是它們?cè)赗PLC上的保留并不理想。此時(shí),采用HILIC對(duì)其分析可以實(shí)現(xiàn)一個(gè)較好的保留,劉瑤[20]等采用Waters XBridge BEH Amide(4.6 mm×150 mm,3.5 μm)親水色譜柱在親水模式下測(cè)定了參附注射液中綠原酸、咖啡酸等有機(jī)酸的含量。實(shí)驗(yàn)條件為:40℃柱溫,0.8 mL/min的流速,0.1%甲酸水溶液(A)和0.1%甲酸乙腈溶液(B)作為流動(dòng)相,梯度洗脫條件為0~10 min 2%~45% B。結(jié)果顯示綠原酸與咖啡酸等有機(jī)酸在HILIC色譜柱上獲得了較好的保留與分離?,F(xiàn)在一些新型HILIC色譜填料不僅對(duì)強(qiáng)極性化合物有較好的保留,對(duì)于中等極性的化合物也能實(shí)現(xiàn)不錯(cuò)的保留[21],大大彌補(bǔ)了RPLC分析的局限性,豐富了分析方法。如Click XIon色譜柱是在硅膠表面鍵合兩性離子,極大地豐富了樣品與固定相之間的保留機(jī)理,既包括傳統(tǒng)的液液分配作用,又含有離子鍵等作用力。Xiujie Guo等[22]采用Click XIon色譜柱在親水模式下分析人參皂苷,在甲醇:水的流動(dòng)相體系下,各人參皂苷都獲得了一個(gè)很好的峰形,得到了較好的保留和分離度。
檢測(cè)技術(shù)是液相色譜中的重要部分,被分析樣品的具體情況最終都是通過(guò)檢測(cè)器捕集到樣品信號(hào)反映出來(lái)。液相色譜中用于木脂素類(lèi)化合物的檢測(cè)器有很多,主要包括紫外可見(jiàn)光檢測(cè)器(UV-vis)、二極管陣列檢測(cè)器(DAD)、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)、核磁(NMR)以及質(zhì)譜(MS)等,其中DAD與MS是木脂素檢測(cè)時(shí)最常用的兩種檢測(cè)器。在早期木脂素的研究中主要是利用其苯環(huán)的紫外吸收,多數(shù)木脂素的兩個(gè)取代芳環(huán)是兩個(gè)孤立的發(fā)色團(tuán),其紫外吸收峰位置相似,吸收強(qiáng)度也具有加和性。一般在220~240 nm(lgε > 4.0)和280~290 nm(lgε 3.5~4.0)出現(xiàn)兩個(gè)吸收峰。近年來(lái)MS作為一種高靈敏度的檢測(cè)儀器在天然產(chǎn)物分析中的作用越來(lái)越大,將其與液相色譜聯(lián)用在天然產(chǎn)物分析中有巨大優(yōu)勢(shì)。高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LCMS)是液相色譜與質(zhì)譜技術(shù)的完美結(jié)合,它同時(shí)兼具了HPLC的分離能力和MS的靈敏檢測(cè)能力,對(duì)復(fù)雜混合樣品具有很高的選擇性、靈敏度以及廣泛的適用性。如S.C. Halls等[23]采用HPLC-DAD-MS對(duì)連翹中的多個(gè)木脂素進(jìn)行定性定量研究,牛蒡子苷等7個(gè)木脂素化合物通過(guò)MS被鑒定出來(lái),DAD檢測(cè)器在280 nm下對(duì)各木脂素化合物具有很好的響應(yīng),輕松地實(shí)現(xiàn)了它們的定量工作。
近年來(lái)液相色譜技術(shù)快速發(fā)展,超高效液相色譜(UPLC)的使用對(duì)木脂素類(lèi)化合物的分析更加有利。根據(jù)范氏方程的理論,減小固定相的粒徑可以降低渦流擴(kuò)散,大大提高色譜柱柱效,利于樣品的分離。1997年,Jorgenson[24]等將2 μm粒徑的固定相應(yīng)用于樣品的分離分析,結(jié)果樣品色譜峰展現(xiàn)出非常高的柱效,并體現(xiàn)出高效、快速的特點(diǎn)。小粒徑填料的色譜柱雖然能夠帶來(lái)很高的柱效,但是整個(gè)系統(tǒng)的壓力也會(huì)隨之大大增加(超過(guò)6 000 psi),傳統(tǒng)液相色譜儀已經(jīng)不能滿(mǎn)足如此高的壓力。為了克服這種系統(tǒng)壓力的限制,能耐受更高壓力,具有更小死體積的UPLC應(yīng)運(yùn)而生。商業(yè)化的UPLC系統(tǒng)甚至可以承受高達(dá)18 400 psi的壓力,可以匹配粒徑1.3~2.5 μm等一系列的色譜柱。近十年來(lái),UPLC的分析能力得到廣泛認(rèn)可,并廣泛應(yīng)用于木脂素類(lèi)化合物的分離分析。Bharathi Avula等[25]開(kāi)發(fā)了一種高效快速的UPLC-UV-MS的方法分析足葉草中4個(gè)木脂素(4-羥基去甲鬼臼脂素、α-盾葉鬼臼素、β-盾葉鬼臼素、鬼臼毒素),實(shí)驗(yàn)采用Acquity UPLCTM BEH C18(50×21 mm i.d.,1.7 μm)色譜柱,流動(dòng)相體系為乙腈-水,并加入0.05%甲酸。4個(gè)木脂素類(lèi)化合物僅在3 min內(nèi)分析完成,各化合物的檢測(cè)限分別為0.1、0.3、0.2、0.3 μg/mL。為了更好的說(shuō)明UPLC分析木脂素的優(yōu)勢(shì),將其與傳統(tǒng)HPLC分析方法做了比較。首先查閱了關(guān)于足葉草中木脂素合適的HPLC分析方法,這些方法具有較高靈敏度和分辨率,然后統(tǒng)計(jì)比較這些HPLC方法[26-27]。發(fā)現(xiàn)常規(guī)的HPLC分析方法將足葉草中的4個(gè)木脂素類(lèi)化合物分析完全需要25~35 min,且檢測(cè)限在2.5~5 μg/mL之間。以上比較充分說(shuō)明了UPLC在分析木脂素時(shí)具有快速、高效的特點(diǎn)。
天然產(chǎn)物成分復(fù)雜多樣,一維液相(1D LC)色譜經(jīng)常會(huì)因?yàn)樽陨磉x擇性和峰容量不足而導(dǎo)致樣品分離效果較差,使樣品中各化合物的色譜峰擠在一起,無(wú)法分開(kāi),得不到滿(mǎn)意的分離度。針對(duì)上述問(wèn)題,基于不同分離機(jī)制的二維液相系統(tǒng)(2D LC)能夠提供更好的選擇性和更大的峰容量,解決復(fù)雜樣品分離的難題。常見(jiàn)的二維液相色譜組成模式主要包括NPLC、RPLC、HILIC、離子交換色譜(IEC)、體積排阻色譜(SEC)等。從操作形式上又可以根據(jù)第一維餾分是否直接轉(zhuǎn)移到第二維,將2D LC分為在線(xiàn)[28]和離線(xiàn)[29]兩種模式。在線(xiàn)2D LC分析速度快,結(jié)果重復(fù)性好,但是對(duì)儀器設(shè)備的要求較高,需要特定的接口技術(shù),操作難度也相應(yīng)的增大。不同于在線(xiàn)模式,離線(xiàn)2D LC操作靈活性更高,對(duì)儀器要求簡(jiǎn)單,但是該方法人為因素過(guò)多,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性稍差,而且樣品容易損失與污染。Erni和Frei在分析復(fù)雜植物提取物時(shí),因RPLC選擇性不夠,樣品無(wú)法實(shí)現(xiàn)較好的分離,而將凝膠柱與反相柱聯(lián)合使用來(lái)解決這種選擇性不足的問(wèn)題,并首次將這種分離模式名為2D LC。近年來(lái),2D LC已經(jīng)逐漸發(fā)展成熟,廣泛的應(yīng)用于多肽、蛋白質(zhì)以及各類(lèi)小分子化合物的分離分析和純化制備[30]。鄒漢法課題組[31]構(gòu)建了一個(gè)二維反相色譜×反相色譜(2D RPLC×RPLC)用于川芎中多成分的分析,第一維RPLC模式采用氰基柱分析,流動(dòng)相體系為甲醇-水,以0.04 mL/min的流速洗脫215 min,每5 min收集一次餾分;第二維也在RPLC模式下進(jìn)行,采用ODS柱,乙腈-0.1%乙酸的流動(dòng)相體系,每個(gè)組分均以0.7 mL/min的流速等度洗脫5 min,起始梯度隨著第一維色譜柱洗脫梯度的變化適當(dāng)優(yōu)化。采用該2D RPLC×RPLC方法從川芎提取液中檢測(cè)到120種化合物,結(jié)合質(zhì)譜確定了其中的52個(gè)化合物,大大提高了川芎中化合物的檢出能力,增加了對(duì)川芎基礎(chǔ)物質(zhì)的了解。
超臨界流體色譜法(supercritical fluid chromatography;SFC)是以超臨界流體做流動(dòng)相,依靠流動(dòng)相的溶劑化能力來(lái)進(jìn)行分離、分析的色譜過(guò)程,是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù)[32]。SFC常用的流動(dòng)相為超臨界狀態(tài)下的二氧化碳(CO2)及氧化亞氮(N2O),其中CO2因性質(zhì)穩(wěn)定、簡(jiǎn)單易得和不苛刻的超臨界條件等優(yōu)勢(shì)被首選為SFC的流動(dòng)相。處于超臨界狀態(tài)下的CO2既具有氣體的低粘度,易于傳質(zhì),又具有液體的高密度,利于溶解。因此使得SFC同時(shí)具有了GC和HPLC的特點(diǎn),它既能分析GC不適應(yīng)的高沸點(diǎn)、低揮發(fā)性樣品,相比HPLC又具有更快的分析速度,是GC和HPLC的一種很好補(bǔ)充。雖然SFC具有分析速度快,分離效率高的優(yōu)勢(shì),但是受儀器技術(shù)水平的限制,其發(fā)展緩慢,并沒(méi)有得到廣泛的應(yīng)用。直到2012年,美國(guó)Waters公司重新整合設(shè)計(jì)了傳統(tǒng)的超臨界流體色譜儀,推出全新的超高效合相色譜(UPC2),為分離分析工作提供了一種全新超臨界流體工具。全新的UPC2系統(tǒng)仍然是基于SFC的原理,并在此基礎(chǔ)上結(jié)合超高效液相色譜儀的高壓技術(shù),使儀器能夠耐受更高的壓力,還能保證整個(gè)儀器的性能更穩(wěn)定,突破了原有SFC系統(tǒng)壓力波動(dòng)大、低比例助溶劑時(shí)傳輸精度低以及靈敏度差等方面的瓶頸,并且能夠使用小粒徑的色譜柱填料,極大提高了分離效率[33-34]。
UPC2主要采用超臨界狀態(tài)下的CO2作為流動(dòng)相,是一種經(jīng)濟(jì)的、綠色的分離分析技術(shù)。超臨界狀態(tài)下的CO2是一種非極性溶劑,對(duì)天然產(chǎn)物中的非極性化合物具有較好的溶解度和分離能力。UPC2可以使用色譜柱種類(lèi)眾多、范圍廣泛,其中使用最廣泛的是硅膠色譜柱。由于UPC2固定相的種類(lèi)涵蓋了從極性的二醇基柱到非極性的C18柱等,使其分析范圍廣泛,對(duì)部分強(qiáng)極性化合物也能實(shí)現(xiàn)較好的保留與分離。但是臨界狀態(tài)下的CO2對(duì)極性化合物的溶解能力較差,在分析過(guò)程中需要加入一定比例的有機(jī)溶劑(如甲醇、異丙醇等)作為改性劑來(lái)增強(qiáng)其溶解能力和洗脫能力。不僅如此,對(duì)于一些樣品遇到硅醇基發(fā)生拖尾時(shí),也可以在流動(dòng)相中加入一定量的有機(jī)酸來(lái)改善峰形。UPC2的保留機(jī)理與NPLC相似,但又不完全相同,李振宇等[35]考察了進(jìn)樣體積、流動(dòng)相添加劑、改性劑、柱溫和系統(tǒng)背壓對(duì)UPC2保留行為的影響,被測(cè)定樣品為吲哚類(lèi)生物堿標(biāo)準(zhǔn)品。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示進(jìn)樣體積過(guò)大時(shí)會(huì)造成峰形分叉,可能是樣品溶劑與流動(dòng)相混合時(shí)不匹配引起的;隨著流動(dòng)相添加劑種類(lèi)的改變,該類(lèi)生物堿的保留和分離行為并無(wú)明顯變化;改性劑的極性增加時(shí),樣品的保留減弱;柱溫升高或系統(tǒng)背壓降低都會(huì)使該類(lèi)生物堿的保留減弱。通過(guò)上述條件的考察,作者優(yōu)化UPC2的分析條件,并在15 min內(nèi)完成了吲哚類(lèi)生物堿的快速分析。由于UPC2的流動(dòng)相用量少、安全環(huán)保、后處理簡(jiǎn)單,并且分析速度快,其在天然產(chǎn)物的分離分析及純化制備中一定會(huì)起到越來(lái)越重要的作用。
牛蒡子在我國(guó)藥用歷史悠久,療效確切,具有廣泛的藥理作用。牛蒡子中化學(xué)成分主要含有木脂素、揮發(fā)油、三萜、油脂等,木脂素類(lèi)成分是牛蒡子的主要成分,迄今已報(bào)道的牛蒡子中的木脂素類(lèi)成分多達(dá)60多個(gè)。該藥材價(jià)格低廉,但是療效確切,具有較大的開(kāi)發(fā)價(jià)值。牛蒡子中木脂素類(lèi)化學(xué)成分分析方法目前有高效液相色譜法、HPLC新技術(shù)在木脂素分析中的應(yīng)用、超臨界流體色譜等。但是,目前關(guān)于牛蒡子中發(fā)揮主要作用的木脂素的研究工作,主要集中于牛蒡子苷與牛蒡子苷元這兩個(gè)含量最高的化合物,對(duì)于其他微量木脂素的研究很少,也不夠深入,其主要原因是較難獲得純度較高的這些化合物。為了對(duì)牛蒡子中木脂素類(lèi)成分進(jìn)行更深入的研究,進(jìn)一步闡明其藥理活性,需要獲得純度較高,質(zhì)量足夠的這些化合物,因此發(fā)展針對(duì)牛蒡子中木脂素的高效快速的分離純化技術(shù)至關(guān)重要。