申開澤，萬慶家，熊 宇，張應龍，劉 莎

（1. 昭通學院農學與生命科學學院，云南昭通 657000；2. 云南萬綠生物股份有限公司，云南玉溪 653300）

免疫是機體至關重要的保護性生理功能，可有效識別危險信號，抵御外來病原微生物的入侵并清除體內有害物質，最終維持自身內環(huán)境的穩(wěn)定狀態(tài)。免疫力下降，機體的抵抗能力也將隨之降低，從而引發(fā)疾病[1-2]。藥食兩用中藥具有多靶點、多途徑、多層次免疫增強作用的優(yōu)勢[3]，因此是開發(fā)增強免疫功能產品的重要原料。庫拉索蘆薈（Aloe veraL.），主要含多糖、蒽醌、有機酸、蛋白質、氨基酸和微量元素等成分，經大量動物功能試驗研究證明具有較好的增強免疫力作用，有效用量折算為人體用量基本為每天1.2~3.0 g（以干物質計，折算多糖含量約為0.12~0.30 g）[4-8]。綠茶中富含的茶多酚也具有明顯的增強免疫力作用[9-11]。維C 的增強免疫力功能也已得到動物試驗[12-13]和臨床試驗[14-16]證實，同時維C 還是可根據生產需要適量添加的抗氧化食品添加劑。庫拉索蘆薈與茶多酚聯合使用能預防小鼠酒精性肝損傷[17]，庫拉索蘆薈還能促進維C 在人體內的吸收[18]，茶多酚與維C 有較好的協同作用[19]。基于此，試驗以庫拉索蘆薈提取物、茶多酚和維C 為主要功能原料，以結晶果糖和羅漢果甜苷為輔料制成復配物，并探究其對小鼠免疫力的影響，以期為后續(xù)的開發(fā)利用提供基礎的藥效學資料。

1 材料和方法

1.1 試驗樣品

庫拉索蘆薈提取物（200∶1），云南萬綠生物股份有限公司提供；茶多酚（98%），江蘇德和生物科技有限公司提供；維C，東北制藥有限公司提供。3種功能原料復配結晶果糖和甜菊糖苷制成蘆薈茶多酚維C 復配物，口服推薦量為每日1 次，每次8 g（含蘆薈多糖0.15 g，茶多酚0.3 g，維C 0.1 g），折合體重劑量為0.133 g/kg·bw，（按60 kg 成人計）。

1.2 試驗小鼠

采用體重為18~22 g 的SPF 級ICR 雌性小鼠，共200 只，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。試驗期間的動物生存環(huán)境溫度為20~25 ℃，相對濕度為54%~58%。

1.3 主要儀器與試劑

MS-TS 型分析天平、722S 型分光光度計，梅特勒-托利多國際有限公司產品；BBS-SDC 型潔凈工作臺，山東博科科學儀器有限公司產品；離心機、二氧化碳培養(yǎng)箱、Multiskan FC 酶標儀，賽默飛世爾公司產品；顯微鏡，上海點應光學儀器有限公司產品。

綿羊紅細胞（SRBC），北京博爾西科技有限公司提供；生理鹽水，上海百特醫(yī)療用品有限公司提供；Hank's 液，武漢卡諾斯科技有限公司提供；RPMI1640 培養(yǎng)液，武漢普諾賽公司提供；青鏈霉素，賽默飛世爾公司提供；刀豆球蛋白A（ConA）、Giemsa 染液，美國Sigma 公司提供；小牛血清，北京百奧萊博公司提供；1%冰醋酸、1 mol/L 的HCl 溶液、0.1%的碳酸鈉、磷酸鹽緩沖鹽溶液（PBS 緩沖液） （pH 值7.2~7.4），0.2 mol/L 的Tris-HCl 緩沖液，實驗室配制；SA 緩沖液、雞紅細胞、補體（豚鼠血清）、MTT、 YAC-1 細胞、都氏試劑、瓊脂糖、2.5% Triton，上海源葉生物科技有限公司提供；酸性異丙醇、乳酸鈉、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶I、甲醇（分析純），廣東光華科技股份有限公司提供；印度墨汁，上海哈靈生物科技有限公司提供。

1.4 樣品劑量選擇和前處理

分別按人體推薦量的5 倍，10 倍和30 倍設0.67，1.33，4.00 g/kg·bw 3 個劑量組（低、中、高）。分別取復配物6.70，13.30，40.00 g，用蒸餾水配制至200 mL，即得。

1.5 試驗方法

參照《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范（2003 版）》[20]，將小鼠平均分為A~E 5 個大組，A 組開展碳廓清試驗；B 組采用MTT 法開展ConA 誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗，進行NK 細胞的活性測試；C 組開展臟/體比值、半數溶血值（HC50） 和抗體生成細胞數測定；D 組采用足跖腫脹法進行遲發(fā)型變態(tài)反應（Delayed type hypersensitivity，DTH） 試驗；E 組開展小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗。每個大組隨機分為4 個小組（每組10 只），即3 個劑量組和1 個對照組。各小組按20 mL/kg·bw 對小鼠進行灌胃，對照組用等量的蒸餾水，每日1 次，持續(xù)30 d。數據轉化和統(tǒng)計分析采用Excel，SPSS 軟件進行。

2 結果與分析

2.1 復配物對試驗小鼠體重的影響

與對照組相比，5 個大組中的低中高各劑量組在試驗初期、中期和末期的小鼠體重及試驗期間體重增長，均無顯著性差異（p＞0.05），說明復配物對試驗動物體重及增長無明顯影響。

2.2 復配物對試驗小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響

復配物對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響見表1。

表1 復配物對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響（±s）/%

表1 復配物對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響（±s）/%

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由表1 可知，與對照組相比，各劑量對小鼠胸腺/ 體重比值和脾臟/ 體重比值無顯著性差異（p＞0.05），說明受試物對試驗小鼠的免疫器官臟器/體重比值無明顯影響。

2.3 復配物對試驗小鼠細胞免疫功能的影響

復配物對小鼠淋巴細胞增殖能力和遲發(fā)型變態(tài)反應能力的影響見表2。

表2 復配物對小鼠淋巴細胞增殖能力和遲發(fā)型變態(tài)反應能力的影晌（±s）

表2 復配物對小鼠淋巴細胞增殖能力和遲發(fā)型變態(tài)反應能力的影晌（±s）

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由表2 可知，以足跖腫脹法進行的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應能力試驗結果表明，l.33 g/kg·bw 和4.00 g/kg·bw劑量組的小鼠足跖腫脹度與對照組相比具有顯著性差異（p＜0.05），表明復配物具有增強小鼠細胞免疫的功能。但復配物各劑量組的OD（optical density）差值與對照組相比無顯著性差異（p＞0.05），說明復配物不能明顯改善小鼠淋巴細胞增殖能力。

2.4 復配物對小鼠體液免疫的影響

復配物對小鼠抗體生成細胞數和HC50的影響見表3。

由表3 可知，采用Jerne 玻片改良法進行小鼠抗體生成細胞數檢測，結果表明，高劑量組的溶血空斑數與對照組相比具有顯著性差異（p＜0.05）。該劑量組的小鼠半數溶血值（HC50） 與對照組比較也顯著提高（p＜0.05）。2 項試驗結果綜合說明復配物能顯著增強試驗小鼠的體液免疫。

表3 復配物對小鼠抗體生成細胞數和HC50 的影響（±s）

表3 復配物對小鼠抗體生成細胞數和HC50 的影響（±s）

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2.5 復配物對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能的影響

復配物對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清和對雞紅細胞吞噬率的影響見表4。

表4 復配物對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清和對雞紅細胞吞噬率的影響（±s）

表4 復配物對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清和對雞紅細胞吞噬率的影響（±s）

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由表4 可知，小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能影響試驗以吞噬指數（a） 來表示復配物對碳廓清能力，與對照組比較，復配物各劑量組吞噬指數統(tǒng)計均無顯著性差異（p＞0.05）。同樣，小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗也顯示，各劑量組的吞噬率和吞噬指數與對照組相比也無顯著性差異（p＞0.05）。結果表明，復配物不能明顯增強腹腔巨噬細胞的吞噬功能。

2.6 復配物對小鼠NK 細胞活性的影響

復配物對小鼠NK 細胞活性的影響見表5。

表5 復配物對小鼠NK 細胞活性的影響（±s）

表5 復配物對小鼠NK 細胞活性的影響（±s）

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由表5 可知，各劑量組NK 細胞活性均高于對照組，并隨劑量增高呈一定的遞增關系，中、高劑量組與對照組比較有顯著性差異（p＜0.05），表明復配物有顯著提高小鼠NK 細胞活性的作用。

3 結論

以小鼠為對象全面開展蘆薈茶多酚維C 復配物的增強免疫力功能動物試驗。結果表明，與對照組比較，連續(xù)30 d 每天一次經口灌胃給予小鼠0.67，1.33，4.00 g/kg·bw 劑量的復配物，各劑量對小鼠體重增長、胸腺/ 體重比值、脾臟/ 體重比值無顯著影響，說明樣品對小鼠體重和免疫器官無明顯影響；同時，1.33，4.00 g/kg·bw 劑量能顯著提高小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應能力和NK 細胞活性（p＜0.05），4.00 g/kg·bw 劑量能顯著提高抗體生成細胞數和小鼠半數溶血值（p＜0.05）。體液免疫功能和NK 細胞活性呈陽性，根據判斷標準[20]，可以判定庫拉索蘆薈提取物復配茶多酚和維C 具有增強免疫力功能。為以庫拉索蘆薈、茶多酚和維C 為功能原料進行增強免疫力功能保健食品的開發(fā)提供了理論和試驗基礎。為了進行相關產品的開發(fā)，后續(xù)開展體外機制研究、體內藥理學十分必要，還應開展多中心、大樣本的隨機對照人體試食研究，以進一步確證其功能。