王 雪

(揚州工業(yè)職業(yè)技術(shù)學院 化學工程學院， 江蘇 揚州 225127)

1 研究背景

蒲公英全草含蒲公英甾醇、膽堿、菊糖、果膠等。味苦、甘，性寒，具清熱解毒，消腫散結(jié)，利尿通淋之功效清熱解毒，利尿散結(jié)?？芍渭毙匀橄傺祝馨拖傺?，瘰疬，疔毒瘡腫，急性結(jié)膜炎，感冒發(fā)熱，急性扁桃體炎，急性支氣管炎，胃炎，肝炎，膽囊炎，尿路感染。

苦苣根為菊科植物苦苣的根，具有降糖、降脂、清熱退蒸之功效。治骨蒸、痢疾澀、平入肺、大腸二經(jīng)。

紫蘇葉中含揮發(fā)油類、黃酮和花色苷類、花青素、酚酸類、苷類、三萜類和甾體等多種化學成分，紫蘇葉提取物表現(xiàn)出一定的抗炎活性。具有散寒解表，宣肺止咳，理氣和中，安胎，解毒[1-3]。

隋洪玉等人[4]用乙醇作溶劑，將蒲公英加熱煮沸一定的時間，以提取其所含的黃酮成分，這種方法，適用于有效成分能溶于乙醇，且對濕熱穩(wěn)定的藥材，而對藥材中一些熱敏性的組份損失較多。

齊白羽等人[5]以蒲公英為原料，利用超聲波提取法來提取蒲公英的水提物。這種方法是主要利用超聲增大物質(zhì)分子運功頻率和速度，增加溶劑穿透力，提高藥物溶出速度和溶出次數(shù)，縮短提取時間的浸提方法。

超臨界流體萃取技術(shù)是目前國際上用于提取分離的先進技術(shù)之一。原理是利用超臨界流體具有接近于液體的密度和類似于液體的溶解能力，同時還具有類似于氣體的高擴散性、低黏度、低表面張力等特性進行提取分離?，F(xiàn)廣泛應用于中藥天然產(chǎn)物的提取領(lǐng)域[6]。本文采用超臨界萃取法從蒲公英、苦苣根和紫蘇葉中提取有效成分。

2 實驗部分

2.1 原料與試劑

蒲公英、苦苣根、紫蘇葉(藥用級，江蘇宜草生物科技有限公司)；硼砂、無水乙醇(分析純，江蘇宜興化學試劑有限公司)；食品級二氧化碳(天津市興盛氣體有限公司)。

2.2 設(shè)備

H8422超細中藥磨粉機(河北德科機械科技有限公司)；SFE120-50-02超臨界萃取儀(南通儀創(chuàng)實驗儀器有限公司)；UV-754紫外可見分光光度計(日本島津有限公司)。

2.3 實驗步驟

(1) 粗提

將一定比例的蒲公英、苦苣根、紫蘇葉粉碎后，選20～40目的粉末，加入適量的2%硼砂水溶液，硼砂水溶液的用量為蒲公英、苦苣根、紫蘇葉質(zhì)量之和的2.0～2.5倍，浸泡1～2 h后，加入適量體積分數(shù)為20～30%的乙醇溶液回流提取5～6 h后，過濾，濾液調(diào)pH至5.0～6.0后，濃縮得粗提物。

(2) 萃取

將上述粗提物加入萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，萃取壓力為26～28 MPa，萃取溫度為45～48 ℃，CO2流量為50～55 L·h-1，萃取時間為2～3 h，分離釜I溫度為40～42 ℃，壓力為8～10 MPa，分離釜II溫度為35～38 ℃，壓力為5～6 MPa。得蒲公英復方提取物，見表1。

2.4 黃酮含量的測定

以蘆丁溶液作為標準溶液，用紫外可見光光譜掃描[7，8]，確定確定萃取物中黃酮類物質(zhì)的濃度。

2.4.1 吸收波長的選擇和標準曲線的繪制

用加蘆丁標準品0.00 mL的溶液為空白參比，標準溶液在300～800 nm波長范圍內(nèi)進行紫外可見光光譜掃描，得到最大吸收波長，最終確定黃酮的測定波長為510 nm。

表1 不同配方下的萃取物Tab. 1 The extracts under different formulations

在最大吸收波長510 nm處測得吸光度值，以濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制蘆丁標準曲線圖。

2.4.2 蒲公英提取物中黃酮含量的測定

分別配制萃取物A-F的60%乙醇-水溶液，搖勻，放置20 min后用紫外可見光光度計進行測量，測得的吸光度對照蘆丁標準曲線圖，確定其濃度。

2.5 抗衰老效果檢測

本文產(chǎn)品A-F的抗衰老效果，采用D-半乳糖致衰老小鼠模型進行藥理學實驗。

D-半乳糖溶液配置：D-半乳糖溶于生理鹽水中，配成濃度為20 mg·mL-1。(腹腔注射)

維生素E(VE)溶液配置：用植物油配置成20 mg·mL-1。(灌胃給藥)

模型組：腹腔注射D-半乳糖溶液，給藥量100 mg·kg-1·d-1。

正常組：腹腔注射等量的生理鹽水。

VE組：腹腔注射D-半乳糖溶液，給藥量100 mg·kg-1·d-1，同時灌胃給藥VE溶液，給藥量100 mg·kg-1·d-1。

產(chǎn)品A-F組：腹腔注射D-半乳糖溶液，給藥量100 mg·kg-1·d-1，同時分別灌胃給藥相應的產(chǎn)品A-F溶液，給藥量200 mg·kg-1·d-1。

3 結(jié)果與討論

3.1 黃酮總量的測定

3.1.1 蘆丁標準曲線的繪制

蘆丁標準曲線如圖1，從圖1可知，蘆丁標準溶液的濃度與吸光度A成線性關(guān)系[7]，方程為y=157.33A+3.923 7，相關(guān)系數(shù)為0.994 6。

圖1 蘆丁的標準曲線

3.1.2 黃酮總量的測定

在2.4.2配制的溶液中取6個樣品，每個樣品5 mL，用紫外分光光度計測出吸光度，根據(jù)圖1標準曲線方程，計算出黃酮含量。

表2 提取物中黃酮類物質(zhì)的含量Tab. 2 The content of flavonoids in the extracts

從表2可知，蒲公英5份，苦苣根1份，紫蘇葉0.1份時提取物中黃酮類物質(zhì)含量最高。

3.2 抗衰老性能檢測

本文測試小鼠血清、腦中SOD、CAT、GSH-Px、T-Aoc酶活力與MDA含量，具體實驗方法本文采用中國專利申請?zhí)枺篊N201710674001.8中實施例2記載的方法進行[8]。

結(jié)果見表3。實驗數(shù)據(jù)與正常組比較，模型組具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，與模型組比較，VE組與產(chǎn)品A-F組也具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。結(jié)果見表3。

表3 藥理學實驗結(jié)果Tab. 3 The results of pharmacological experiments

4 結(jié)論

本文主要以蒲公英、苦苣根、紫蘇葉為主要原料，利用超臨界萃取法分離提取混合物中的有效成分，科學實驗證明：蒲公英、紫蘇葉、苦苣根以一定的比例混合，有希望研究出蒲公英保健品。本文研究了各種配比，蒲公英苦苣根紫蘇葉比例不一樣，都可以研制成功，其中蒲公英5份，苦苣根1份，紫蘇葉0.1份的萃取物測試性能最好。蒲公英、紫蘇葉、苦苣根中的有效成分，均有非常顯著的抗氧化、抗衰老、抗病毒等作用，在各個領(lǐng)域應用非常廣泛，因此蒲公英有希望被發(fā)展為保健品。