李梁杰 井虹蘇 Byar Shubh Narayan 丁紫涵 張 迪 程 開

(1. 佳木斯大學(xué)研究生院，黑龍江 佳木斯 154007；2. 佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154000； 3. 深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院，廣東 深圳 518111)

胃癌是一個(gè)全球性的尚未解決的臨床問題，全世界的總體生存統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)很低[1]。每年新診斷出的胃癌大多數(shù)發(fā)生在亞洲和南美國家[2]。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，2020年美國有27 000新增病例被診斷[3]。大多數(shù)胃癌病例是在疾病晚期被診斷出來的，導(dǎo)致總體預(yù)后不佳。胃癌的總存活率很低，在美國為31%，全球保持在25%[4]。很明顯，胃癌仍然是一種致命的疾病，但是目前的治療方案或更早的檢測策略并沒有有意義的方式對其加以控制[1]。

紫杉醇作為臨床一線的抗腫瘤藥物，在癌癥治療方面有著獨(dú)特的作用，但是近幾年因?yàn)槠涿黠@的毒副作用限制了其臨床應(yīng)用[5]。黃芩是臨床常用的一味中藥材，其具有良好的抗病毒、抗菌以及解熱鎮(zhèn)痛的作用效果，在保肝、抗腫瘤等方面發(fā)揮著重要的藥理作用[6]。因此，本實(shí)驗(yàn)著重研究紫杉醇聯(lián)合黃芩素對胃癌細(xì)胞的增殖抑制作用。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器與材料

全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國Bio-TEK公司)、紫杉醇(大連美倫生物有限公司)、黃芩苷(懋康生物科技有限公司)、CCK-8試劑盒(碧云天生物)、凝膠成像系統(tǒng)(上海天能科技有限公司)、PCNA(碧云天生物)。

1.3 檢測紫杉醇和黃芩苷作用SGC-7901細(xì)胞的存活率

將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞配置成細(xì)胞懸液，向96孔板的各孔中加入200 μL，細(xì)胞密度為7 000個(gè)/孔，培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h和48 h。配置的黃芩苷的濃度為：5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、40 μg/ml、60 μg/ml、80 μg/ml；配置紫杉醇的濃度為：0.1 μmol/L、0.5 μmol/L、2.5 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L。將黃芩苷和紫杉醇加入96孔板中，每個(gè)濃度5個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)24和48 h。然后，在每孔內(nèi)加20 μL的CCK-8溶液，放入培養(yǎng)箱中孵育2 h后，取出96孔板，用酶標(biāo)檢測儀檢測每孔吸光度值。選取紫杉醇濃度為10 μmol/L，黃岑苷濃度為40 μg/ml，配比好濃度后，將紫杉醇和黃芩苷按1∶1、1∶2、1∶3 的比例對SGC-7901細(xì)胞再進(jìn)行上述加藥實(shí)驗(yàn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采取SPSS17.0軟件分析出來，所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用單因素方差分析，P<0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 紫杉醇和黃芩苷對SGC-7901細(xì)胞增殖的影響

紫杉醇和黃芩苷分別作用于SGC-7901細(xì)胞24 h 和48 h后，不同濃度的紫杉醇和黃芩苷對SGC-7901細(xì)胞的存活率具有影響顯著，隨著紫杉醇和黃芩苷時(shí)間濃度的增加，SGC-7901細(xì)胞的存活率明顯降低。具體結(jié)果見表1，表2。

表1 不同濃度紫杉醇對SGC-7901細(xì)胞存活率的影響Tab. 1 Effects of different concentrations of Paclitaxel on the survival rate of SGC-7901 cells

表2 不同濃度黃芩苷對SGC-7901細(xì)胞存活率的影響Tab. 2 Effects of different concentrations of baicalin on the survival rate of SGC-7901cells

2.2 紫杉醇聯(lián)合黃芩苷對SGC-7901細(xì)胞增殖的影響

紫杉醇與黃芩苷聯(lián)用后，SGC-7901細(xì)胞的存活率在48 h時(shí)紫杉醇與黃芩苷濃度比為1∶5時(shí)最低，并隨時(shí)間的延長存活率也相應(yīng)的下降，不同聯(lián)合濃度的紫杉醇和黃芩苷對SGC-7901細(xì)胞的存活率見表3。

表3 紫杉醇聯(lián)合黃芩苷對U251細(xì)胞存活率的影響Tab. 3 The effect of Paclitaxel combined with baicalin on the survival rate of SGC-7901 cells

2.3 紫杉醇聯(lián)合黃岑苷對SGC-7901細(xì)胞PCNA增殖蛋白表達(dá)的影響

如圖1所示，與對照組相比，紫杉醇和黃岑苷均可降低PCNA蛋白的表達(dá)量(P<0.05)，兩藥聯(lián)合在降低PCNA蛋白表達(dá)更為顯著(P<0.05)。

3 討論

盡管手術(shù)仍是治療胃癌的唯一有效方法，但是術(shù)前(新輔助)、術(shù)后(輔助)或圍手術(shù)期加化療，都有利于生存期的延長[7]。根據(jù)MAGIC試驗(yàn)(圍手術(shù)期采用ECF方案化療：阿霉素、順鉑和持續(xù)輸注5-氟尿嘧啶)的發(fā)現(xiàn)，與單純手術(shù)相比，多模式方法治療局部進(jìn)展期胃癌可提高總存活率[8]。目前中西醫(yī)結(jié)合的方法治療腫瘤受到廣泛的關(guān)注，本實(shí)驗(yàn)采取的紫杉醇聯(lián)合黃芩苷治療胃癌的方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫杉醇和黃岑苷對SGC-7901細(xì)胞的抑制作用呈時(shí)間和濃度依賴性，并且二者聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同抗腫瘤作用。隨黃芩苷濃比例升高時(shí)，抑制率成上升趨勢，且均比紫杉醇和黃岑苷單獨(dú)作用的抑制率高。因此可在臨床治療中采用黃芩苷和紫杉醇聯(lián)合治療胃癌患者，有望提高胃癌患者的生存率，降低化療的毒副作用。

注：與對照組比，#表示p<0.05,##表示p<0.01; 與單藥組比，*表示p<0.05 圖1 紫杉醇聯(lián)合黃岑苷對SGC-7901細(xì)胞PCNA