魏倩倩，楊乾龍，常忠娟，吳 炎，馬 琳，劉興醫(yī)，趙 蒙*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，吉林長(zhǎng)春 130112；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生院，北京 100081）

梅花鹿是重要的藥用經(jīng)濟(jì)動(dòng)物，具有較高的藥用價(jià)值和養(yǎng)生保健功能。梅花鹿生性膽小，飼養(yǎng)過(guò)程中易受到環(huán)境的應(yīng)激，嚴(yán)重時(shí)伴隨疾病的產(chǎn)生。在畜禽養(yǎng)殖過(guò)程中，疾病的預(yù)防往往比疾病的治療更為重要。為達(dá)到保健、促生長(zhǎng)的效果，飼料中常會(huì)添加大量抗生素，導(dǎo)致抗生素的濫用，對(duì)土壤、水源以及人類健康造成威脅。隨著禁抗時(shí)代的到來(lái)，天然植物中草藥已成為抗生素替代品研究的熱點(diǎn)，中草藥是天然植物，富含多種有機(jī)物，可作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)促進(jìn)動(dòng)物健康生長(zhǎng)，起到提高免疫力的作用。目前，中草藥添加劑主要應(yīng)用于單胃動(dòng)物家禽和豬養(yǎng)殖生產(chǎn)中，在梅花鹿中的研究較少，因此，本試驗(yàn)以生茸期梅花鹿為研究對(duì)象，在日糧中添加中草藥添加劑，研究中草藥對(duì)生茸期梅花鹿的生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)、抗氧化及免疫指標(biāo)的影響，為中草藥添加劑的研發(fā)及梅花鹿的健康養(yǎng)殖提供新方案。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 中草藥購(gòu)自安徽亳州中藥材市場(chǎng)，由當(dāng)歸、人參、枸杞、五味子、益母草、黃芪、黨參、熟地黃、丹參、淫羊藿按一定比例超微粉碎組成中草藥添加劑。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 單因素隨機(jī)區(qū)組實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取頭茬茸收割時(shí)間集中在7月13日左右的3歲齡健康雄性梅花鹿[平均體重為（74.79±0.78）kg]12頭，分為2組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭，組間初始體重差異不顯著（P＞0.05），見(jiàn)表2。其中對(duì)照組（SC）飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組（ST）額外每日飼喂10 g/頭的中草藥添加劑，基礎(chǔ)飼糧配方及營(yíng)養(yǎng)含量見(jiàn)表1。頭茬茸收割時(shí)開(kāi)始預(yù)飼，預(yù)飼期7 d，傷口愈合時(shí)正試飼喂，正式飼喂7周至梅花鹿二杠茸收割。動(dòng)物試驗(yàn)在農(nóng)業(yè)部長(zhǎng)白山野生生物資源重點(diǎn)野外科學(xué)觀測(cè)試驗(yàn)站進(jìn)行，每天4：30和15：30定量飼喂，自由飲水。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)） %

1.3 樣品采集和保存 試驗(yàn)最后1 d晨飼前對(duì)梅花鹿麻醉并進(jìn)行頸靜脈采血，3500 r/min離心10 min分裝入1.5 mL Eppendorf管中，-80℃低溫保存，待測(cè)。

1.4 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.4.1 飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量的測(cè)定

飼料中的干物質(zhì)含量參照GB/T6435—2014測(cè)定；粗蛋白質(zhì)含量利用凱氏定氮法參照GB/T6432—2018測(cè)定；粗脂肪含量利用索氏脂肪浸提法參照GB/T6433—2006測(cè)定；中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維含量使用范式（Van Soest）方法參照GB/T20806—2006測(cè)定。

1.4.2 生長(zhǎng)性能的測(cè)定

試驗(yàn)第1 d和最后1 d晨飼前麻醉并進(jìn)行空腹稱重，用于計(jì)算總增重（TWG）和平均日增重（ADG）。每天記錄投料量和剩料量，用于計(jì)算試驗(yàn)期間干物質(zhì)采食量（DMI）和料重比（F/G）。

1.4.3 血清樣品測(cè)定

血清葡萄糖（GLU）、總蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、乳酸脫氫酶（LDH）、膽固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）采用中生北控生物科技有限公司的試劑盒測(cè)定。

過(guò)氧化氫酶（CAT）、總超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MAD）的測(cè)定均采用南京建成科技有限公司的試劑盒測(cè)定。鹿免疫球蛋白A（IgA）、鹿免疫球蛋白G（IgG）、鹿免疫球蛋白M（IgM）采用上海酶聯(lián)生物科技有限公司的試劑盒測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)先由Excel 2019進(jìn)行初步整理，然后采用 SPSS 26.0 進(jìn)行獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)（t test），P ＜ 0.01，表示差異極顯著 ；P＜0.05，表示差異顯著；P＞0.05，表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，兩組間終末體重、總增重、平均日增重、平均日采食量和料重比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表2中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿生長(zhǎng)性能的影響

2.2 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿血清生化指標(biāo)的影響 由表3可知，ST組的血清葡萄糖含量顯著高于SC組（P＜0.05）；血清膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白含量?jī)山M之間差異不顯著（P＞0.05）。兩組血清白蛋白和總蛋白含量差異不顯著（P＞0.05），血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶活力兩組之間差異不顯著（P ＞ 0.05）。

表3 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿血清生化指標(biāo)的影響

2.3 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿抗氧化功能的影響 由表4可知，與SC組相比，ST組血清過(guò)氧化氫酶和總超氧化物歧化酶的活性顯著升高（P＜0.05）；與SC組相比，ST組血清谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性升高，但差異不顯著（P＞0.05），ST組與SC組血清丙二醛含量差異不顯著（P＞0.05）。

表4 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿抗氧化功能的影響

2.4 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿免疫功能的影響 由表5可知，與SC組相比，ST組的免疫球蛋白G含量顯著升高（P＜0.05），免疫球蛋白A和免疫球蛋白M含量?jī)山M之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表5 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿免疫功能的影響

3 討論

3.1 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿生長(zhǎng)性能的影響 梅花鹿日糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被高效消化吸收是實(shí)現(xiàn)快速增重的關(guān)鍵。研究表明，中草藥飼料添加劑在動(dòng)物飼養(yǎng)中，對(duì)于提高采食量、改善消化能力以及提高生產(chǎn)性能等方面具有巨大優(yōu)勢(shì)（王旭東等，2019）。在動(dòng)物機(jī)體代謝過(guò)程中，能夠?yàn)閯?dòng)物提供蛋白質(zhì)、氨基酸、糖、脂肪、淀粉、維生素、礦物質(zhì)和微量元素等豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，達(dá)到促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和提高生產(chǎn)性能的作用（駱雪等，2021，盧世杰等，2021）。本試驗(yàn)中，ST組總增重、平均日采食量均較SC組有所增加，料重比有所降低，但差異均不顯著。中草藥添加劑雖未顯著提高生長(zhǎng)性能，至少表明中草藥對(duì)生茸期梅花鹿的生長(zhǎng)性能無(wú)負(fù)面影響。也可能是3歲齡梅花鹿已達(dá)到體成熟，體重變化較穩(wěn)定。部分中草藥適口性較差，如五味子、當(dāng)歸等中草藥含有揮發(fā)油、多糖、單糖等物質(zhì)，可以改善飼料風(fēng)味，加之本試驗(yàn)中所有梅花鹿均限飼，所以中草藥添加劑并沒(méi)有對(duì)生茸期梅花鹿的平均日采食產(chǎn)生顯著性變化。具體的原因有待于進(jìn)一步研究。

3.2 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿血清生化指標(biāo)影響 血液的生理生化指標(biāo)是反映動(dòng)物機(jī)體的物質(zhì)代謝和組織器官機(jī)能的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)中，在生茸期梅花鹿飼糧中添加中草藥添加劑對(duì)血清TP、ALB、GLB、CHO、TG、LDL和 HDL的含量未產(chǎn)生顯著影響。但SC組的GLU含量比SC組顯著提高38.65%。表明中草藥添加劑能夠增強(qiáng)生茸期梅花鹿合成蛋白質(zhì)的能力，鹿茸中含有豐富的蛋白質(zhì)，其中干鹿茸含有50%～76%的粗蛋白質(zhì)（Li等，1999），可能中草藥對(duì)鹿茸的生長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用，值得我們進(jìn)一步研究。中草藥促進(jìn)血清中GLU含量的提高可能是因?yàn)楦纳屏司€粒體功能，線粒體是能量產(chǎn)生與代謝的重要場(chǎng)所，研究表明黃芪—當(dāng)歸藥對(duì)能調(diào)節(jié)線粒體生物能，可誘導(dǎo)線粒體膜電位增加、上調(diào)線粒體相關(guān)基因的表達(dá)并調(diào)節(jié)線粒體自噬、改善線粒體損傷（Kwan等，2019，袁嘉婧等，2020）。高輝等（2013）研究表明，復(fù)方中草藥對(duì)犢牛的血液生化指標(biāo)未產(chǎn)生不利影響。本試驗(yàn)結(jié)果與之類似，ST組血清ALP、AST和LDH含量高于SC組，但未達(dá)到顯著性水平，表明本試驗(yàn)使用的中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿的蛋白代謝、肝功能和心肌無(wú)不利影響。因此，中草藥添加劑在一定合理范圍內(nèi)對(duì)動(dòng)物機(jī)體可能不會(huì)產(chǎn)生不利影響。

3.3 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿抗氧化功能的影響 中草藥具有清除機(jī)體氧自由基和增強(qiáng)抗氧化的功能，可以從多個(gè)環(huán)節(jié)阻斷自由基的損傷。武晉孝等（2002）報(bào)道，使用由山楂、神曲、丹參、首烏、蒲黃、玉竹、枳殼等組成的飼料添加劑，極顯著提高肉雞體內(nèi)SOD和GSH-Px的活性。閆先峰等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，飼喂不同水平中草藥飼料添加劑對(duì)蛋雞血清T-AOC、GSH、SOD和MDA含量影響差異顯著。本試驗(yàn)中，ST組血清CAT和SOD酶活性顯著升高，GSH-PX酶活性升高，但差異不顯著，表明中草藥具有提高梅花鹿機(jī)體抗氧化的能力。中草藥的抗氧化作用與多糖和黃酮類有關(guān)，推測(cè)可能是當(dāng)歸多糖通過(guò)減輕過(guò)氧化氫引起的細(xì)胞氧化反應(yīng)損傷，減弱細(xì)胞凋亡和活性氧的產(chǎn)生（Zhang等，2019）或淫羊藿中的黃酮類成分發(fā)揮抗氧化作用，它能夠通過(guò)結(jié)構(gòu)中的酚羥基阻斷自由基鏈反應(yīng)，減少自由基的產(chǎn)生（Chen等，2020）。也可能是丹參單體成分（如丹酚酸A、丹酚酸B、丹參素、迷迭香酸等）發(fā)揮作用，研究表明其可以通過(guò)調(diào)控核因子-κB（NF-κB）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子（STAT）等多種信號(hào)通路，發(fā)揮抗炎、抗氧化藥理作用（陳璐等，2021）。有關(guān)中草藥不同成分的抗氧化具體作用機(jī)制，還需進(jìn)一步研究。

3.4 中草藥添加劑對(duì)生茸期梅花鹿免疫功能的影響 免疫球蛋白是反映機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)。因此，血清中免疫球蛋白的濃度與梅花鹿的免疫力密切相關(guān)。IgG在抗體介導(dǎo)的防衛(wèi)機(jī)理中占主要地位，IgG比其他免疫球蛋白更易逸出血管，參加體表和組織間的防衛(wèi)（邱時(shí)秀等，2020）。鄧培華等（2021）報(bào)道，由黃芪、黨參、山楂、熟地等組成的中草藥添加劑顯著提高血清IgG含量。本試驗(yàn)中，ST組IgG含量顯著高于SC組，表明中草藥添加劑提高生茸期梅花鹿的免疫功能。推測(cè)免疫功能的改善可能與中草藥的多糖成分有關(guān)，枸杞多糖能使免疫系統(tǒng)中的NK細(xì)胞殺傷活性提高，并進(jìn)一步推測(cè)枸杞多糖提高免疫作用與Band-3蛋白表達(dá)水平的恢復(fù)相關(guān)（黃振華等，2018）。另有研究表明，枸杞多糖通過(guò)調(diào)節(jié)腸道微生物菌群來(lái)增強(qiáng)先天免疫，腸道菌群可以通過(guò)直接或間接的方式來(lái)阻止外源病原微生物侵染機(jī)體，枸杞多糖又能對(duì)腸道菌群起到一定的保護(hù)和調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而提高有益菌水平（Zhu等，2020）。黃芪多糖可通過(guò)多種途徑發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的作用，例 如 TLR4-NF-κB、Ca2+-cAMP通 路 等（Song等，2007，Song等，2007）。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)條件下，飼糧中每日添加10g/頭中草藥添加劑可以顯著提高生茸期梅花鹿的血清CAT、T-SOD活力和IgG含量，提高機(jī)體抗氧化和免疫功能。