麥壯艷 林應源 萬樹莉 王婷婷

急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）是一種由心肌缺血性壞死造成的急性致命性疾病，盡管過去10年預后有了顯著改善，但其死亡率仍居高不下[1]。對AMI進行早期診斷，并及時采取有效的救治措施，是降低死亡率并改善預后的關(guān)鍵。高敏心肌肌鈣蛋白I（high sensitivity cardiac troponin I,Hs-cT－nI）檢測能早期提示微小心肌損傷，是當前診斷AMI的首選實驗室指標[2]。越來越多的研究表明，環(huán)狀RNA（circular RNA,CircRNA）是一種內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄物，具有較高的穩(wěn)定性和組織特異性，其異常表達與心血管疾病的發(fā)病機制高度關(guān)聯(lián)[3-4]。近期研究發(fā)現(xiàn)，CircRNA_0050908及CircRNA_0001879在心血管疾病患者中存在異常表達，對心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展具有重要的調(diào)控作用，有望成為心血管疾病診斷和治療干預的理想候選指標[5-6]。目前，關(guān)于CircRNA_0050908及CircRNA_0001879對AMI的診斷價值少有文獻報道。本研究通過檢測AMI患者血清CircRNA_0050908及CircRNA_0001879水平，分析其聯(lián)合傳統(tǒng)心肌標志物Hs-cTnI對 AMI診斷及預測心血管不良事件的價值，以期為AMI的診治提供幫助。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2018年1月至2021年6月海南西部中心醫(yī)院收治的AMI患者108例作為研究對象（AMI組），其中男 73例，女 35例；年齡 35～81（57.30±11.82）歲。納入標準：（1）符合《歐洲心臟病學會急性心肌梗死管理指南（2017）》[7]中的診斷標準；（2）年齡≥18歲，發(fā)病至入院時間＜8 h。排除標準：（1）已接受過冠狀動脈旁路移植術(shù)、靜脈溶栓治療；（2）存在惡性腫瘤、血液病及腦血管疾病。隨訪所有患者在確診30 d內(nèi)再次發(fā)生心血管不良事件的情況，AMI患者再次發(fā)生心血管不良事件18例（心源性死亡4例，再次心肌梗死4例，心絞痛7例，心力衰竭3例）。另選取健康體檢者50名作為對照組，其中男32例，女性18例；年齡36～80（58.10±9.62）歲。兩組研究對象性別、年齡、基礎疾病史、血壓、TC、TG、LDL-C及 HDL-C比較，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05），見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審批通過，所有研究對象均知情同意。

表1 兩組研究對象臨床資料比較

1.2 方法

1.2.1 血清CircRNA_0050908及CircRNA_0001879水平檢測 采集所有患者入院即刻和健康體檢者體檢時的靜脈血各3 ml，3 000 r/min離心10 min，分離血清。取血清400 μl采用Trizol試劑盒提取血清總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄，獲取反轉(zhuǎn)錄DNA（PCR相關(guān)試劑盒均購自上海生物工程有限公司）。采用RT-qPCR法檢測血清CircRNA_0050908及CircRNA_0001879 水平，PCR 總反應體系為 20 μl：1 μl引物及探針 Mix（20×），10 μl TaqMan 通用混合物溶液（2×），1.33 μl反轉(zhuǎn)錄脫氧核糖核酸，7.67 μl雙蒸水。擴增反應條件為：95℃預變性5 min 1個循環(huán)，95℃變性15 s，60℃退火30 s，72℃延伸60 s。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參基因，采用 2-ΔΔCt法計算結(jié)果。

1.2.2 血清Hs-cTnI水平檢測 另取上述血清200 μl，使用DXI 800全自動化學發(fā)光分析儀（美國貝克曼庫爾特公司）及配套試劑檢測Hs-cTnI水平。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件。計量資料以 表示，方差齊時，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；方差不齊時，組間比較采用非參數(shù)檢驗。ROC曲線評估CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合HscTnI診斷AMI及預測心血管不良事件的效能。采用Pearson相關(guān)分析 AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平與Hs-cTnI水平的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對象血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平比較 AMI組患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.01），見表2。

表2 兩組研究對象血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平比較

2.2 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合Hs-cTnI診斷AMI的效能 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI診斷AMI的最佳截斷值分別為1.83、1.50、0.91 μg/L，3項聯(lián)合診斷AMI的AUC明顯高于單項CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及 Hs-cTnI檢測，其靈敏度為0.982，特異度為0.913，見表3和圖1（插頁）。

表3 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合Hs-cTnI診斷AMI的效能

圖1 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合 Hs-cTnI診斷AMI的ROC曲線

2.3 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合Hs-cTnI預測心血管不良事件的效能 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI預測心血管不良事件的最佳截斷值分別為 1.95、1.61、0.86 μg/L，3 項聯(lián)合預測心血管不良事件的AUC明顯高于單項CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及 Hs-cTnI檢測，其靈敏度為0.943，特異度為0.875，見表4和圖2（插頁）。

表4 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合Hs-cTnI預測心血管不良事件的效能

圖2 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879聯(lián)合Hs-cTnI預測心血管不良事件的ROC曲線

2.4 AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平與Hs-cTnI水平的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)分析顯示，AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平與Hs-cTnI水平均呈正相關(guān)（r=0.830和0.751，均 P＜0.01），見圖 3。

圖3 AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平與Hs-cTnI水平的散點圖

3 討論

AMI是一種心肌急性缺血性壞死的常見急危重癥，在過去的幾十年中，AMI已成為一個重要的死亡原因，在全球范圍內(nèi)AMI的發(fā)病率逐年上升，嚴重威脅著人類的生命健康[8]。早發(fā)現(xiàn)、早治療是當前AMI防治的重中之重。生物標志物在AMI早期診斷和治療中起著重要的作用。因而，尋找一種更加有效的AMI診療標志物組合對患者的早期救治具有極大的幫助。CircRNA是一類呈封閉環(huán)狀結(jié)構(gòu)的特殊非編碼RNA，參與調(diào)節(jié)心肌細胞凋亡及心肌損傷，在心血管疾病的診斷及治療中起到很大的指導作用，被認為是臨床治療AMI的新靶點[9]。國內(nèi)外研究證實，CircRNA在心血管疾病患者血液樣本中異常表達，其參與多種心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展，可能是一種潛在的心血管疾病診斷和治療的理想候選基因生物標志物[10-11]。Hs-cTnI作為AMI診斷的金指標，已在臨床上得到廣泛認可和共識，其對心肌損傷的診斷具有重大的幫助[12]。

本研究 AMI組患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI水平均明顯高于對照組，提示血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及HscTnI水平高表達可能參與AMI的發(fā)病過程。這可能是CircRNA_0050908和CircRNA_0001879作為重要的炎癥調(diào)控因子，其過度表達促進了冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生，使心肌缺血、缺氧從而引起心肌梗死，在AMI的發(fā)生及發(fā)展中起著重要作用。Lau等[13]研究指出，與對照組相比，AMI患者血清Hs-cTnI水平明顯升高，對AMI診斷具有一定價值。Gong等[14]研究認為，CircRNA在AMI的發(fā)生、調(diào)控和病理生理作用中發(fā)揮了重要的作用，對AMI的診斷和預后具有重要的生物學意義，是AMI治療的潛在靶點。由此推測CircRNA_0050908、CircRNA_0001879 在 AMI發(fā)病中發(fā)揮了巨大的潛力。

本研究ROC曲線顯示，CircRNA_0050908、CircRNA_0001879及Hs-cTnI對 AMI診斷及預測心血管不良事件的AUC均較高，3項聯(lián)合的AUC最大，均＞0.925。相關(guān)分析也顯示，AMI患者血清CircRNA_0050908、CircRNA_0001879水平與Hs-cTnI水平均呈正相關(guān)。說明 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879診斷 AMI及預測心血管不良事件有很大的潛力，兩者聯(lián)合HscTnI診斷AMI及預測心血管不良事件的效能最高。研究表明，Hs-cTnI診斷AMI的準確性較高，在早期排查AMI中也有較高的靈敏度，具有較好的臨床實用性[15]。另有研究認為，CircRNA在AMI中起著至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用，是AMI的潛在診斷標志物和預后標志物，為AMI的靶向治療提供了很好的指導作用[16]。由此可見，早期檢測CircRNA_0050908及CircRNA_0001879水平對早期發(fā)現(xiàn)AMI有很大的幫助。

綜上所述，AMI患者血清 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879表達水平明顯升高，聯(lián)合Hs-cTnI檢測有助于提高 AMI診斷及心血管不良事件預測的準確性。通過 CircRNA_0050908、CircRNA_0001879與Hs-cTnI的相互結(jié)合，很好地彌補了Hs-cTnI單一指標對AMI診斷存在的局限性，為AMI的早診斷、早救治提供重要的依據(jù)。