馮曉玲，高鴻亮，張琪琪，李新巖

炎癥性腸?。↖BD）作為一類特發(fā)性腸道炎癥性疾病，其可累及回腸、直腸、結(jié)腸，患者主要可見腹瀉、腹痛甚至血便等臨床癥狀［1-2］。潰瘍性結(jié)腸炎作為IBD主要類型，其主要可表現(xiàn)出結(jié)腸黏膜下層、黏膜層炎癥連續(xù)性發(fā)作，在病變過程中先可累及直腸，隨后可蔓延于全結(jié)腸［3-4］。此外，IBD患者若出現(xiàn)整個消化道的全層炎癥，且為非連續(xù)性炎癥表現(xiàn)者則歸屬克羅恩病，通常被累及的部位為結(jié)腸、末端回腸、肛周［5-6］。IBD具有起病較早、病程緩慢及高復(fù)發(fā)性特征，患者需予以長期治療，不但治療成本較高，且可嚴重影響正常工作學習。目前針對該病的病機研究尚未取得顯著進展，但認為除遺傳、環(huán)境等因素外，腸道免疫環(huán)境紊亂亦屬重要相關(guān)因素，可影響腸道炎癥反應(yīng)程度［7-8］，同時腸道菌群紊亂可進一步加劇機體代謝功能異常，并產(chǎn)生一系列毒素損傷腸道，在IBD患者發(fā)病過程中作用不容小視。作為一種人體必需脂肪酸，ω-3多不飽和脂肪酸（ω-3PUFAs）可作用于機體氧化代謝，為其提供能量，同時可對機體過度應(yīng)激反應(yīng)、炎癥因子釋放起到一定調(diào)控作用［9-10］。相關(guān)研究指出，ω-3PUFAs作用于腸道可起到抑制炎癥反應(yīng)、改善腸黏膜狀態(tài)的作用［11］，但有關(guān)其在IBD患者腸道菌群調(diào)節(jié)的研究報道較少。本次研究將對IBD患者予以ω-3PUFAs制劑治療，現(xiàn)將所得成果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用前瞻性研究設(shè)計，選取2019年10月至2020年12月新疆醫(yī)科大學第五附屬醫(yī)院消化科IBD患者120例，按照隨機數(shù)字表法分為觀察組和對照組，各60例。納入標準：①患者符合IBD相關(guān)診斷標準［12］；②年齡18～60歲；③IBD病程在6個月以上者；④具有基本的讀寫能力，患者及家屬對本次研究知情同意。排除標準：①合并其他腸道器質(zhì)性病變或腸結(jié)核、結(jié)腸癌者；②合并其他部位惡性腫瘤者；③正在接受其他臨床研究或臨床藥物試驗者。本研究符合《赫爾辛基宣言》原則。觀察組男34例，女26例；年齡21～58歲，平均（39.54±6.82）歲；病變部位：全結(jié)腸24例，乙狀結(jié)腸21例，左半結(jié)腸15例；臨床分型：初發(fā)型27例，慢性持續(xù)型22例，慢性復(fù)發(fā)性11例。對照組男32例，女28例；年齡22～57歲，平均（39.49±7.03）歲；病變部位：全結(jié)腸25例，乙狀結(jié)腸22例，左半結(jié)腸13例；臨床分型：初發(fā)型25例，慢性持續(xù)型23例，慢性復(fù)發(fā)性12例。兩組一般資料差異不顯著（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

兩組患者均需予以相應(yīng)抗炎、營養(yǎng)供應(yīng)治療，保證機體水電解質(zhì)平衡狀態(tài)良好。對照組患者實施美沙拉嗪治療方案，即患者需吞服美沙拉嗪腸溶片（葵花藥業(yè)集團佳木斯鹿靈制藥有限公司，國藥準字H19980148，0.25 g×24片，片劑）0.5 g/次，3次/d，持續(xù)治療10周。觀察組患者在對照組基礎(chǔ)上靜脈輸入ω-3魚油脂肪乳注射液（奧地利Fresenius Kabi Austria GmbH，國藥準字J20150040，100 mL∶10 g∶1.2 g注射劑）治療，100 mL/d，治療持續(xù)10周。

1.3 觀察指標

觀察兩組患者治療10周后臨床療效；檢測兩組患者治療前及治療10周后免疫細胞功能（CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞）、炎性指標（TNF-α、CRP、IL-6）、腸屏障功能（DAO、D-LA、ET）、腸道菌群（雙歧桿菌、大腸埃希菌、乳酸桿菌、腸球菌）水平。

1.3.1 臨床療效評估標準 將IBD患者治療療效按恢復(fù)情況分為三個等級［13］：顯效指患者各項癥狀、體征表現(xiàn)完全消除，經(jīng)內(nèi)鏡檢查發(fā)現(xiàn)腸黏膜表現(xiàn)完全恢復(fù)正常；有效則指患者各主要癥狀、體征表現(xiàn)得到顯著改善，但患者腸黏膜仍存在輕度炎癥表現(xiàn)；無效則指經(jīng)治療后，其癥狀、體征表現(xiàn)均無改善，經(jīng)內(nèi)鏡檢查（圖1）確認腸黏膜狀況并無顯著改善?？傆行?顯效率+有效率。

圖1 電子腸鏡檢查圖 插鏡至回腸末端未見異常（圖A），回盲瓣呈唇型（圖B），回盲部、升結(jié)腸、橫結(jié)腸及肝曲、直腸黏膜充血、水腫（圖C），血管紋理消失（圖D），局部呈顆粒樣改變（圖E），注氣后局部滲血，余橫結(jié)腸、降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸見散在充血灶，不連續(xù)（圖F）

1.3.2 指標檢測方法 分別于治療前及治療10周后采集兩組外周靜脈血5 mL，經(jīng)抗凝離心處理后，采用BD FACSCantoⅡ型流式細胞儀（碧迪醫(yī)療器械有限公司，2015-2401424）對CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞進行測定，具體步驟為：首先配置2 000μL溶血素備用，并于A、B兩個試管作內(nèi)分別加入100μL全血，并加入對應(yīng)試劑A、B，充分混勻后于室溫下避光溫育30 min，隨后向兩試管內(nèi)加入1 000μL溶血素，混勻后室溫下避光溫育15 min，隨后各自加入400μL鞘液，低速渦旋混勻后進行流式細胞儀上機檢測，以機器自帶軟件分析得出CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞水平。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法（ELISA）試劑盒（深圳康生保生物技術(shù)有限公司，2010-2400117）對腫瘤壞死因子（TNF-α）、C反應(yīng)蛋白（CRP）、白介素-6（IL-6）、D-乳酸（D-LA）、內(nèi)毒素（ET）水平進行測定，具體步驟如下：于特異性抗體球蛋白所在孔位內(nèi)加入緩沖液，使其蛋白濃度下降至5μg/mL后時37℃溫育2 h，隨后除去包被液，并對緩沖液重復(fù)洗滌5次，并加入酶標抗體溶液，37℃溫育2 h，再次重復(fù)洗滌5次，隨后將底物溶液加入，在其作用30 min后，加入終止劑，采用酶標比色計測定血清TNF-α、CRP、IL-6、D-LA、ET水平。采用分光光度法對二胺氧化酶（DAO）水平進行測定，具體步驟為：于相同條件下采用分光光度計（北京東西分析儀器有限公司，2014-2400132）將待測溶液與已知濃度的標準溶液A值測得，隨后依據(jù)公式CT=（AT/AS）*CS求得待測溶液中DAO含量。同一時間對兩組新鮮糞便中間部分進行采集，取0.5 g，以10倍稀釋法進行接種培養(yǎng)，經(jīng)革蘭染色、生化檢測后對主要菌群數(shù)量進行計算。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS21.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理。符合正態(tài)分布的計量資料用表示，組間比較采用獨立樣本的t檢驗，組內(nèi)同期比較采用配對t檢驗；計數(shù)資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗，等級資料行秩和檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床療效比較

治療10周后，觀察組總有效率顯著高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 兩組中醫(yī)證候療效比較［n（%）］

2.2 兩組治療前后細胞免疫功能比較

治療10周后，兩組CD3+、CD4+、NK細胞水平均較治療前顯著升高，且觀察組明顯高于對照組（P均＜0.05）；兩組CD8+水平均較治療前顯著下降，且觀察組顯著低于對照組（P＜0.05），見表2。

表2 兩組CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞比較（，%）

表2 兩組CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞比較（，%）

注：與治療前相比，*P＜0.05

2.3 兩組治療前后炎性指標比較

治療10周后，兩組TNF-α、CRP、IL-6水平均較治療前顯著降低，且觀察組顯著低于對照組（P均＜0.05），見表3。

表3 兩組TNF-α、CRP、IL-6比較（）

表3 兩組TNF-α、CRP、IL-6比較（）

注：與治療前相比，*P＜0.05

2.4 兩組患者治療前后腸屏障功能比較

治療10周后，兩組DAO、D-LA、ET水平均較治療前顯著降低，且觀察組顯著低于對照組（P均＜0.05），見表4。

表4 兩組DAO、D-LA、ET比較（）

表4 兩組DAO、D-LA、ET比較（）

注：與治療前相比，*P＜0.05

2.5 兩組患者治療前后腸道菌群狀態(tài)比較

治療10周后，兩組雙歧桿菌、乳酸桿菌均較治療前顯著升高，且觀察組顯著高于對照組（P均＜0.05）；兩組大腸埃希菌數(shù)量、腸球菌數(shù)量均較治療前顯著降低，且觀察組顯著低于對照組（P均＜0.05），見表5。

表5 兩組腸道菌群狀態(tài)比較（，lgCFU/g）

表5 兩組腸道菌群狀態(tài)比較（，lgCFU/g）

注：與治療前相比，*P＜0.05

3 討論

IBD作為一類非特異性炎癥性疾患，其近年來國內(nèi)發(fā)病情況較為嚴峻，患者腹痛腹瀉等癥狀頻發(fā)，同時可伴隨腸道吸收功能障礙，引起營養(yǎng)狀態(tài)不良，可對其生活質(zhì)量造成嚴重負面影響［14-15］。目前臨床針對該病多以激素、氨基水楊酸類藥物進行治療，雖可取得顯著短期療效，但依舊面臨疾病復(fù)發(fā)、患者耐受性較低等問題［16］，故探尋更合理的治療方案極為必要。

目前認為IBD主要發(fā)病原因在于腸道黏膜免疫功能紊亂，同時可受遺傳、環(huán)境、感染等因素影響而發(fā)?。?7-18］。作為機體免疫系統(tǒng)中作用最為顯著的細胞群，淋巴細胞若出現(xiàn)表達水平的異常變化，可引起免疫調(diào)節(jié)機制的異常表現(xiàn)，并引發(fā)局部免疫炎癥反應(yīng)，通過其造成的病理改變使TNF-α、CRP、IL-6等炎性因子大量釋放，加劇炎癥損傷［19-20］。此外，T細胞所介導(dǎo)的細胞免疫反應(yīng)屬于機體重要免疫反應(yīng)，其調(diào)節(jié)性T細胞可通過細胞間直接接觸和分泌轉(zhuǎn)化生長因子-β等抗炎因子抑制輔助T細胞增殖及促炎因子分泌，降低免疫損傷并維持免疫耐受，故在細胞免疫功能異常情況下機體所受炎癥損傷更為顯著，故表現(xiàn)出病情反復(fù)、病程較長等特點［21-22］。本次研究中，經(jīng)10周治療后，觀察組總有效率較對照組更高，兩組CD3+、CD4+均有所升高，CD8+、TNF-α、CRP、IL-6水平則有所下降，其中觀察組數(shù)據(jù)變化幅度更為顯著，提示ω-3PUFAs可在有效調(diào)節(jié)IBD患者免疫細胞功能，并抑制其炎癥狀態(tài)，分析其原因在于ω-3PUFAs可競爭脂氧合酶、環(huán)氧化酶對ω-6PUFAs的氧化作用，從而減少類二十烷酸炎性介質(zhì)等ω-6PUFAs系產(chǎn)物生成的生成，降低其活性，發(fā)揮免疫炎癥反應(yīng)調(diào)控作用，此外ω-3PUFAs可通過影響改變細胞膜成分進而影響其流動性，使部分激素受體結(jié)合、酶活性信號傳遞受到影響，從而調(diào)節(jié)與細胞膜受體相關(guān)的細胞因子表達，同時可通過對細胞因子、酶的基因表達調(diào)控抑制炎性因子分泌，改善機體炎癥反應(yīng)狀態(tài)。

相關(guān)報道指出，IBD患者在其發(fā)病過程中除免疫功能異常、腸道炎癥反應(yīng)顯著等表現(xiàn)外，亦可見腸屏障功能受損及腸道菌群紊亂［23］。臨床雖然對多種IBD腸道菌群及相關(guān)抗原進行分離鑒定，并提出以菌群調(diào)控免疫反應(yīng)的治療方案，但在IBD患者實際接受糞菌移植治療后，其腸道菌群在長期變化趨勢中情況并不樂觀。研究指出，人體在出生后早期定植于腸道并持續(xù)存在微生物群可為機體提供代謝產(chǎn)物并發(fā)揮免疫效應(yīng)，其在特性表現(xiàn)中具備長期穩(wěn)定性，故不同患者在接受糞菌移植后腸道菌群穩(wěn)定性存在較大差異［24］。而IBD患者隨著黏膜屏障的損壞及腸道屏障功能的減弱，可使大量ET釋放入血，并超出機體自我調(diào)節(jié)能力，進一步引發(fā)微循環(huán)障礙、發(fā)熱等不良影響，經(jīng)腸黏膜分泌產(chǎn)生的D-LA在黏膜受損狀態(tài)下可大量釋放入血，DAO屬于腸黏膜上層細胞內(nèi)酶，其水平上升亦與腸黏膜受損有關(guān)［25］。本次研究中，經(jīng)10周治療后，兩組雙歧桿菌、乳酸桿菌水平有所升高，DAO、D-LA、ET、大腸埃希菌、腸球菌水平則有所下降，其中觀察組下降之幅度更為顯著，提示ω-3PUFAs可在有效修復(fù)IBD患者腸黏膜屏障功能，使其菌群內(nèi)環(huán)境得到顯著改善，分析其原因在于ω-3PUFAs屬于一類人體必需脂肪酸，其所含二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）等成分可為機體提供氧化供能，同時ω-3PUFAs可促進前列腺素3（PGE3）、白細胞三烯5（LTB5）、血栓烷A3（TXA3）類物質(zhì)產(chǎn)生，使其競爭性抑制ω-6PUFAs相關(guān)炎性產(chǎn)物，使腸道炎癥反應(yīng)得到有效調(diào)控，進而降低炎癥反應(yīng)對腸道黏膜的損傷以及對腸道菌群環(huán)境的影響，使其腸道屏障及菌群自我調(diào)節(jié)機制得到修復(fù)。

綜上所述，對IBD患者應(yīng)用ω-3PUFAs可取得良好療效，使其免疫細胞功能、腸屏障功能、腸道菌群環(huán)境得到顯著改善，腸道炎癥反應(yīng)得到有效抑制，臨床應(yīng)用價值顯著。