王麗寧，溫婷

寶雞市人民醫(yī)院血液腫瘤內(nèi)科，陜西 寶雞 721000

肺癌是全球發(fā)病率和致死率最高的癌癥，每年約新增180萬例，死亡人數(shù)占癌癥的30%[1]。肺腺癌是一種源自于支氣管黏膜上皮的肺癌，是肺癌中較為常見的一種[2]。肺腺癌患者初期并無明顯癥狀，少數(shù)可出現(xiàn)咳嗽、痰血、低熱、氣悶等癥狀，導(dǎo)致確診時(shí)已到達(dá)中晚期[2]。目前常采用肺癌根治術(shù)進(jìn)行治療，治療效果較好，但復(fù)發(fā)率也較高，嚴(yán)重影響患者預(yù)后[3]，因此對肺腺癌患者進(jìn)行預(yù)后評估具有十分重要的臨床意義。目前臨床上常用的肺腺癌預(yù)后預(yù)測血清指標(biāo)有CY211、SCC、CEA等，但特異度和靈敏度均欠佳。血清內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子(endothelial cell specific molecules-1，ESM-1)是一種內(nèi)皮細(xì)胞所生成的可溶性蛋白聚糖，有研究發(fā)現(xiàn)其水平在肺癌的胸腔積液中具有較高的表達(dá)，且對于肺腺癌患者的預(yù)后預(yù)測具有一定的意義[4]。微小RNA-498(Microrna，miR-498)屬于抑癌miRNA，可對肺癌相關(guān)的抑癌基因和蛋白進(jìn)行控制，進(jìn)而起到抑癌的效果，有研究認(rèn)為miR-498 在肺癌的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用[5]。ESM-1和miR-498 在國外已被大量運(yùn)用于患者預(yù)后預(yù)測中，但在國內(nèi)研究仍較少。本研究旨在探討血清ESM-1、miR-498水平變化與肺腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取寶雞市人民醫(yī)院2017 年5月至2020 年1 月收治的94 例肺腺癌患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《臨床肺癌學(xué)》[6]中肺腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)經(jīng)病理學(xué)檢查確診為肺腺癌；(3)精神狀態(tài)良好可配合治療者；(4)初次治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者出現(xiàn)腦、脊髓癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移；(2)患者合并其他類型腫瘤；(3)患者存在嚴(yán)重肝腎功能異常；(4)患者臨床資料不完整?；颊叱鲈汉箅S訪一年，如出現(xiàn)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、死亡則列入預(yù)后較差組，反之則列入預(yù)后良好組，其中預(yù)后良好組57例，男性30例，女性27例；年齡40～78歲，平均(59.65±5.43)歲；TNM 腫瘤分期：Ⅰ期18 例，Ⅱ期22 例，Ⅲ期17 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26 例。預(yù)后較差組37 例，男性19 例，女性18 例；年齡41～79 歲，平均(59.42±5.38)歲；TNM 腫瘤分期：Ⅰ期11例，ⅡI 期13 例，Ⅲ期13 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16 例。兩組患者的一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理學(xué)委員會審核并通過，患者及其家屬知情并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 兩組患者均接受相同的治療方案，在患者治療前和治療結(jié)束后抽取患者空腹靜脈血2.5 mL，高速離心，分離血清送至檢驗(yàn)科。血清ESM-1選取上海信裕生物科技有限公司生產(chǎn)的血清ESM-1試劑盒，使用時(shí)首先用50 μL 去離子水稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，將蓋子蓋好后靜置10 min，隨后反復(fù)搖晃均勻，此時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為200 ng/mL，分別稀釋至200 ng/mL、100 ng/mL、50 ng/mL、25 ng/mL、12.5 ng/mL、6.25 ng/mL、3.125 ng/mL。將試劑盒內(nèi)的50 mL 洗滌濃縮液與去離子水混合為500 mL 洗滌液。向抗體原液內(nèi)加入4 mL抗體稀釋液，隨后再將抗體稀釋液配置為10 mL 抗體工作液，震蕩搖勻。配置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測樣品孔，向空白孔加入100 μl 去離子水，剩余孔則加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)品，期間避免氣泡產(chǎn)生，將樣品加入酶標(biāo)板孔的底部，不與孔壁接觸，震蕩搖勻，將封板膜覆于酶標(biāo)板，震蕩2 h。輕輕揭掉封板膜，舍棄液體，甩干，連續(xù)洗板5 次并拍干，每個(gè)孔內(nèi)滴加100 uL 抗體工作液，并振蕩孵育2 h。再輕輕揭掉封板膜，舍棄液體，甩干，連續(xù)洗板5 次并拍干，孔內(nèi)加入100 μL 上海源葉生物有限公司的辣根過氧化物酶對親和素工作液進(jìn)行標(biāo)記，常溫震蕩45 min。將100 μL 底物顯示液加入孔內(nèi)，并振蕩搖勻15 min，將50 μL終止溶液加入孔內(nèi)后，采用德朗醫(yī)療設(shè)備有限公司的DR-200Βc 酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測，在450 nm 波長下對每個(gè)孔的光密度進(jìn)行測量。MiRⅡ498 采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)進(jìn)行檢測。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組患者治療前和治療3個(gè)月后的血清ESM-1、miR-498水平；分析患者不同臨床特征(性別、年齡、TNM類型、是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn))與血清ESM-1、miR-498水平關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對樣本t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，多因素分析采用Logistic 回歸分析檢驗(yàn)，繪制受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic，ROC)分析血清ESM-1、miR-498對患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后的血清ESM-1、miR-498水平比較 治療前，兩組患者的血清ESM-1、miR-498水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組患者治療后的血清ESM-1、miR-498 水平明顯低于治療前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；治療后，預(yù)后較差組患者的血清ESM-1 水平明顯高于預(yù)后良好組，miR-498水平明顯低于預(yù)后良好組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者治療前后的血清ESM-1、miR-498水平比較(±s)

表1 兩組患者治療前后的血清ESM-1、miR-498水平比較(±s)

注：與本組治療前比較，aP＜0.05。

組別預(yù)后良好組預(yù)后較差組t值P值例數(shù)57 37治療前42.21±5.53 42.14±5.42 0.060 0.951治療后32.75±5.42a 38.31±5.54a 4.817 0.001治療前3.63±0.42 3.59±0.39 0.354 0.698治療后2.88±0.41a 2.17±0.53a 3.021 0.002 ESM-1(ng/mL) miR-498(ng/mL)

2.2 不同臨床特征患者的血清ESM-1 水平比較 不同年齡、性別患者的血清ESM-1水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；TNM 分期＞Ⅱ期患者的血清ESM-Ⅰ水平明顯高于≤Ⅱ期患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的血清ESM-Ⅰ水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 不同臨床特征患者的血清ESM-1水平比較(±s，ng/mL)

表2 不同臨床特征患者的血清ESM-1水平比較(±s，ng/mL)

臨床特征年齡(歲)＞65≤65性別男女TNM＞Ⅱ≤Ⅱ是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否例數(shù)52 42 49 45 31 63 42 52血清ESM-1 34.95±5.46 34.92±5.48 34.89±5.49 34.99±5.41 40.99±5.48 31.96±5.47 39.84±5.42 30.98±5.56 t值0.026 0.189 7.520 7.768 P值0.979 0.568 0.001 0.001

2.3 不同臨床特征患者的血清miR-498 水平比較 不同年齡、性別患者的血清miR-498 水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；TNM 分期＞Ⅱ期患者的血清miR-498 水平明顯低于≤Ⅱ期患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的血清miR-498 水平明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 不同臨床特征患者的血清miR-498水平比較(±s，ng/mL)

表3 不同臨床特征患者的血清miR-498水平比較(±s，ng/mL)

臨床特征年齡(歲)＞65≤65性別男女TNM＞Ⅱ≤Ⅱ是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是否例數(shù)52 42 49 45 31 63 42 52血清miR-498 2.64±0.45 2.56±0.40 2.63±0.42 2.57±0.44 2.46±0.47 2.67±0.41 2.38±0.48 2.78±0.38 t值0.900 0.676 2.224 4.510 P值0.370 0.501 0.029 0.001

2.4 影響患者預(yù)后的因素 經(jīng)多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，血清ESM-1和miR-498是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P＜0.05)，見表4。

表4 影響患者預(yù)后因素的多因素logistic回歸分析

2.5 血清ESM-1、miR-498對肺腺癌患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值 經(jīng)ROC分析結(jié)果顯示，血清ESM-1 對肺腺癌患者預(yù)后的預(yù)測靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值以及陰性預(yù)測值明顯優(yōu)于miR-498，而血清ESM-1 與miR-498聯(lián)合檢測對患者預(yù)后的預(yù)測靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值以及陰性預(yù)測值明顯優(yōu)于各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表5和圖1。

表5 血清ESM-1、miR-498對肺腺癌患者預(yù)后的預(yù)測價(jià)值

圖1 血清ESM-1、miR-498對肺腺癌患者預(yù)后的預(yù)測ROC曲線圖

3 討論

肺腺癌具有惡性程度高、轉(zhuǎn)移性高和侵襲能力強(qiáng)的特點(diǎn)[7-9]。隨著人們醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，對于肺腺癌的治療方法也變得多樣化，包括肺癌根治術(shù)、靶向治療、放化療等，療效得到明顯提高，同時(shí)有效降低患者不良反應(yīng)[10-11]。但術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的患者仍較多，中遠(yuǎn)期預(yù)后效果不佳，所以治療后早期對于患者預(yù)后效果預(yù)測較為重要[12-13]。近些年來，血清生物學(xué)在肺癌的預(yù)后預(yù)測中研究頗多，為此展開研究，為臨床的診治提供理論基礎(chǔ)。

血清ESM-1 是一種位于人體第5 號染色體上的可溶性蛋白聚糖[14]。其主要分布于肝、腎等組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)，是任意血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常以及細(xì)胞增生的特異性標(biāo)志物。ESM-1 在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中能夠?qū)δ[瘤內(nèi)部血管進(jìn)行調(diào)控，進(jìn)而影響體內(nèi)的炎性反應(yīng)。有研究發(fā)現(xiàn)，ESM-1參與到腫瘤細(xì)胞的黏附中，同時(shí)在晚期患者患者中明顯增高[15]。本研究發(fā)現(xiàn)，治療后，預(yù)后較差組患者的血清ESM-1 水平明顯高于預(yù)后良好組，與上述研究結(jié)論相一致。ESM-1對于細(xì)胞黏附的調(diào)節(jié)和炎性反應(yīng)的控制都是促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵，同時(shí)能夠和胰島素樣生長因子起到共同效果，對細(xì)胞的生長和發(fā)育起到重要的作用[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，TNM分期＞Ⅱ期患者血清ESM-1顯著高于≤Ⅱ期患者，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清ESM-1顯著高于不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，這可能是因?yàn)?，TNM分期＞Ⅱ期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者往往腫瘤已經(jīng)發(fā)展至中晚期，血清ESM-1 水平明顯升高[17]。本研究發(fā)現(xiàn)，血清ESM-1是影響肺腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，說明血清ESM-1 能夠作為肺腺癌患者預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)。MiRNAs是一種具有高度保守化的小分子非編碼單鏈RNA。miR-498 作為其中一種，能夠?qū)Σ糠峙c腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移相連的蛋白和抑癌基因進(jìn)行調(diào)控，在癌癥的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用[18-19]。本研究顯示，治療后miR-498 水平明顯低于預(yù)后良好組，國外有學(xué)者認(rèn)為，miRNA-498水平與肺癌患者分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在明顯的相關(guān)性[20]，這與本研究結(jié)果一致。血清miRNA-498 是影響肺腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，說明血清miRNA-498可作為肺腺癌患者預(yù)后的預(yù)測指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，血清ESM-1與miR-498聯(lián)合檢測對于患者預(yù)后的預(yù)測靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值以及陰性預(yù)測值明顯優(yōu)于各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(P＜0.05)。說明兩種指標(biāo)的聯(lián)合檢測能夠彌補(bǔ)各指標(biāo)檢測的不足之處，提高預(yù)測價(jià)值。但本次研究可能因?yàn)檠芯坎±^少，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)存在一定偏差，以后擴(kuò)大病例的收集以彌補(bǔ)此不足。

綜上所述，血清ESM-1以及miR-498的水平變化與肺腺癌患者預(yù)后存在明顯的相關(guān)性，兩種指標(biāo)聯(lián)合檢測對肺腺癌患者預(yù)后具有較好的評估價(jià)值，可有效運(yùn)用于臨床診治中。