劉 倩 關(guān)淼升 王瀟宇 許榮宸 劉 琳 劉 振 李鴻波

炎癥環(huán)境對(duì)骨組織再生修復(fù)的介導(dǎo)效應(yīng)是生物組織工程領(lǐng)域的關(guān)鍵問題[1]。作為生物體對(duì)外界創(chuàng)傷、腫瘤侵襲以及免疫排斥等刺激的應(yīng)答作用，刺激起始階段損傷部位所形成的低濃度炎癥環(huán)境能夠激發(fā)細(xì)胞外基質(zhì)和多細(xì)胞因子的聚集，調(diào)控?fù)p傷附近的間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)向成骨細(xì)胞分化，促進(jìn)骨組織的再生修復(fù)[2]。然而，隨著炎癥反應(yīng)的加劇和持續(xù)，間充質(zhì)干細(xì)胞的活性及成骨分化能力受到抑制，導(dǎo)致骨組織缺損難以自我修復(fù)，甚至產(chǎn)生進(jìn)一步破壞[3]。

線粒體是干細(xì)胞成骨分化的能量來源與結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。因此，維持間充質(zhì)干細(xì)胞中線粒體結(jié)構(gòu)、數(shù)量和功能的穩(wěn)定是實(shí)現(xiàn)干細(xì)胞骨向分化的必要條件[4,6]?！熬€粒體自噬”作為一種控制線粒體質(zhì)量與數(shù)量的主要保護(hù)形式，在實(shí)現(xiàn)線粒體正常生理功能與生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，線粒體自噬可能是炎癥及骨相關(guān)疾病的潛在治療靶點(diǎn)[7、8]。由此我們推測，線粒體自噬能力的改變可能是導(dǎo)致炎癥環(huán)境下成骨分化抑制的原因，線粒體自噬的能力受炎性環(huán)境的影響而減弱，從而導(dǎo)致了過多受損線粒體的積累，進(jìn)一步抑制了干細(xì)胞成骨分化的能力。

因此，本研究通過構(gòu)建體外高濃度炎癥微環(huán)境，擬探究炎癥環(huán)境對(duì)線粒體自噬的影響，同時(shí)結(jié)合BMSCs 成骨分化結(jié)果，分析線粒體自噬與BMSCs 成骨分化間的相互作用，為實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)調(diào)控BMSCs 成骨分化能力提供思路。

1.材料與方法

1.1 材料 SPF 級(jí)雄性SD 大鼠(2～3 周齡、斯貝福，中國)；完全培養(yǎng)基(L-DMEM(gibco)+10%FBS(gibco)+1%penicillin Streptomycin (gibco))；成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基(L-DMEM(gibco)+10%FBS(gibco)+50mg/ L L-抗壞死血酸(sigma)+10mmol/ L β-甘油磷酸鈉(sigma)+1%penicillin Streptomycin(gibco))；成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)基(廣州賽業(yè))；Anti-LC3ABantibody、Anti-SQSTM1/ P62 antibody、Anti-ALP antibody、Anti-OPNantibody、Anti-PINK1antibody、Anti-Parkin antibody 購自Abcam；FITC 抗兔二抗(碧云天)；MitoTrackerDeep Red FM(CST)；Alexa FluorTM488 Phalloidin (invitrogen)；堿性磷酸酶試劑盒(南京建成)；CCK8(碧云天)；茜素紅(sigma)；氯化十六烷基吡啶(sigma)。

1.2 SD 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定 提取2～3 周齡SPF 級(jí)雄性SD 大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。提取方法：采用頸椎脫臼法處死SD大鼠，75%乙醇溶液浸泡10min 后放置于超凈臺(tái)內(nèi)，無菌條件下解剖分離大鼠雙側(cè)股骨，暴露骨髓。收集骨髓懸液至50ml 離心管中，使用濾網(wǎng)過濾后接種培養(yǎng)。48h 后首次換液，之后每隔兩天換一次液。倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞形態(tài)，待其融合度達(dá)到80%～90%后，使用0.25%胰酶進(jìn)行消化，以1∶2 進(jìn)行傳代，傳至P3 代進(jìn)行流式細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定、成骨誘導(dǎo)分化及成脂誘導(dǎo)分化鑒定。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組 第一部分構(gòu)建炎癥模型，以成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，將實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組和炎癥組。連續(xù)培養(yǎng)7d，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.3.1 第二部分按照1.3 分組成功驗(yàn)證炎癥微環(huán)境后，以成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，將實(shí)驗(yàn)分為T 組(TNF-α 100ng/ ml 組)、T+促進(jìn)劑組(TNF-α 100ng/ ml+Rapamycin 組)與T+抑制劑組(TNF-α 100ng/ ml+3-MA 組)。連續(xù)培養(yǎng)7d，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.4 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在TNF-α 刺激下細(xì)胞增殖與成骨分化能力

1.4.1 CCK-8 檢測 將P3 代細(xì)胞以2×103個(gè)/孔的密度接種于96 孔板中，每組設(shè)6 個(gè)副孔，待細(xì)胞貼壁后，每隔2 天換一次液，分別于1、3、5、7d 取出對(duì)應(yīng)96 孔板，每孔加入10μl CCK-8試劑,于培養(yǎng)箱培養(yǎng)2h，使用酶標(biāo)儀在450nm 波長下檢測每孔的吸光度。

1.4.2 ALP 檢測 將P3 代細(xì)胞以5×104/ ml密度接種于6 孔板中，每隔2 天換一次液，連續(xù)培養(yǎng)7d，去上清，每孔加入300μl 裂解液(0.1%TritonX-100)，裂解30min 后,收集各組裂解液。通過BCA 法測定蛋白濃度，按照ALP 試劑盒說明，使用酶標(biāo)儀在520nm 波長下檢測各孔吸光度OD 值。

1.4.3 茜素紅染色 將P3 代細(xì)胞以5×104/ ml密度接種于12 孔板中，每隔2 天換一次液，連續(xù)培養(yǎng)14d，去上清，PBS 清洗，4%多聚甲醛固定30min 后，使用1%茜素紅溶液進(jìn)行染色，PBS 沖洗，加入10%氯化十六烷基吡啶，使用酶標(biāo)儀在562nm 波長下檢測各組吸光度OD 值，計(jì)算各組鈣離子濃度定量分析。

1.5 免疫熒光檢測 Mito-tracker 分別與Factin、LC3 共定位情況 將P3 代rBMSCs 以1×104/ ml 密度接種，使用500 nM MitoTrackerDeep Red FM 染色，4%多聚甲醛固定，PBS 洗滌，5%BSA 封閉。F-actin 標(biāo)記各組取足量Alexa FluorTM488 Phalloidin 工作液覆蓋細(xì)胞內(nèi)表面，室溫避光染色90min，PBS 洗滌，DAPI 染核，觀察。LC3 標(biāo)記各組使用一抗LC3A/ B(1∶200)4℃孵育過夜。去除一抗，F(xiàn)ITC 抗兔二抗室溫孵育1小時(shí)，PBS 洗滌，即用型DAPI 染核，置于激光共聚焦顯微鏡下觀察。使用Image J 分析。

1.6 炎癥微環(huán)境下大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化與線粒體自噬相關(guān)性

1.6.1 RT-PCR 檢測成骨相關(guān)基因及線粒體自噬相關(guān)基因表達(dá) 將細(xì)胞以5×104/ ml 密度接種于6 孔板中，刺激7d 后，采用Trizol 法收集細(xì)胞總RNA，使用First Strand cDNA Synthesis Kit(New England Biolabs)反轉(zhuǎn)錄，按照SYBR Select Master Mix(Thermo Fisher Scientific)說明建立RT-PCR 體系，檢測成骨相關(guān)基因及線粒體自噬相關(guān)基因表達(dá)情況。通過NCBI 在線引物設(shè)計(jì)系統(tǒng)對(duì)目的基因引物進(jìn)行設(shè)計(jì)。使用2-△△Ct方法計(jì)算結(jié)果。引物設(shè)計(jì)如下：

1.6.2 Western Blot 檢測成骨相關(guān)蛋白及線粒體自噬相關(guān)蛋白表達(dá) 將細(xì)胞以5×104/ ml 密度接種于6 孔板中，刺激7d 后，收集細(xì)胞裂解。預(yù)冷離心機(jī)至4℃，12000rpm 離心30min 取上清蛋白，BCA 法測定，12%SDS-PAGE 凝膠中進(jìn)行電泳后轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉室溫封閉1h。按照抗體使用說明以1∶1000 對(duì)一抗進(jìn)行稀釋，4℃下孵育24h，TBST 洗膜后二抗(1∶1000)孵育2h，TBST 洗膜后進(jìn)行發(fā)光。將蛋白質(zhì)表達(dá)水平相對(duì)于β-actin 標(biāo)準(zhǔn)化。Image J 軟件對(duì)條帶進(jìn)行半定量分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法 采用Graphad9.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，定量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布與方差齊，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，多組間的比較采用單因素方差分析。P<0.05具有顯著差異。置信區(qū)間95%。

2.結(jié)果

2.1 SD 大鼠分離培養(yǎng)與鑒定 光鏡下觀察P3代rBMSCs 形態(tài)均一、平行排列，呈長梭形，多角形，漩渦樣、集落樣生長。流式細(xì)胞術(shù)鑒定結(jié)果顯示，細(xì)胞的分子表型中CD73(95.9%)、CD90(98.6%)和CD105(96.2%)表達(dá)呈陽性，CD31(1.26%)、CD34(0.51%)和CD45(0.63%)表達(dá)呈陰性。成骨誘導(dǎo)14d，茜素紅染色光鏡下可見大量紅色礦化結(jié)節(jié)；成脂誘導(dǎo)14d 油紅O 染色，光鏡下可見大量脂滴形成。因此實(shí)驗(yàn)所分離提取的細(xì)胞符合間充質(zhì)干細(xì)胞的特性(圖1)。

圖1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定

2.2 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞炎癥微環(huán)境的構(gòu)建與驗(yàn)證 CCK-8 結(jié)果顯示，炎癥誘導(dǎo)第1 天對(duì)照組OD 值(0.3646±0.0073)，炎癥組OD 值(0.3579±0.0088)二者相比無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。隨著時(shí)間增加，炎癥組rBMSCs 增殖能力呈明顯下降趨勢(P<0.05)。證實(shí)TNF-α 100ng/ ml 誘導(dǎo)的炎癥環(huán)境對(duì)rBMSCs 增殖起到抑制作用(圖2)。成骨誘導(dǎo)14d 茜素紅染色，大體照觀察可見炎癥組鈣結(jié)節(jié)明顯少于對(duì)照組。定量分析結(jié)果顯示炎癥組顯著少于對(duì)照組(P<0.05)。堿性磷酸酶活性檢測結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，炎癥組ALP 活性降低(P<0.05)(圖3)。RT-PCR 結(jié)果顯示(圖4)，與對(duì)照組相比，炎癥組ALP 與OPN 相對(duì)表達(dá)量顯著下降(P<0.05)。Western Blot 結(jié)果證明(圖5)，炎癥組ALP 與OPN 蛋白表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。激光共聚焦顯微鏡觀察，線粒體與肌動(dòng)蛋白F-actin 共定位結(jié)果顯示(圖6)對(duì)照組大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞線粒體形態(tài)呈線狀，F(xiàn)-actin 標(biāo)記細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)清晰。炎癥組線粒體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯破壞，碎片化程度加深，點(diǎn)狀線粒體增多，F(xiàn)-actin標(biāo)記細(xì)胞骨架微絲結(jié)構(gòu)紊亂，正常骨架的微絲結(jié)構(gòu)明顯減少。因此TNF-α 100ng/ ml 成功構(gòu)建體外炎癥微環(huán)境模型。

圖2 CCK-8 檢測細(xì)胞增殖情況(*P<0.05)

圖3 炎癥微環(huán)境對(duì)rBMSCs 成骨分化的影響

圖4 RT-PCR 檢測炎癥微環(huán)境下第7 天成骨相關(guān)基因表達(dá)情況

圖5 Western Blot 檢測炎癥微環(huán)境下第7 天成骨相關(guān)蛋白表達(dá)情況

圖6 激光共聚焦顯微鏡觀察Mito-tracker 與F-actin 共定位情況(400×)

2.3 炎癥環(huán)境下線粒體自噬對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖及成骨分化影響 通過添加線粒體自噬抑制劑與促進(jìn)劑后，激光共聚焦線粒體與LC3共定位(圖7)二者熒光共定位的結(jié)果為：T 組PCC=0.47±0.01，T+促進(jìn)劑組PCC=0.77±0.06，T+抑制劑組PCC=0.32±0.04(P<0.05)。CCK8 結(jié)果顯示，刺激加入第一天，T 組OD 值為0.3559±0.0038、T+促進(jìn)劑組OD 值為0.3683±0.0027、T+抑制劑組OD 值為0.3505±0.0037，三者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。隨著時(shí)間的增加，與T組相比，T+促進(jìn)劑組rBMSCs 增殖能力呈明顯上升趨勢(P<0.05)，T+抑制劑組則呈明顯下降趨勢(P<0.05)(圖8)。說明在炎癥環(huán)境下，線粒體自噬能力的變化會(huì)影響rBMSCs 增殖能力。成骨誘導(dǎo)14d 茜素紅染色，大體照觀察可見T+促進(jìn)劑組鈣結(jié)節(jié)明顯多于T 組，T+抑制劑組則少于T 組，定量分析結(jié)果同樣驗(yàn)證了此現(xiàn)象(P<0.05)。堿性磷酸酶活性檢測結(jié)果顯示，與T 組相比，T+抑制劑組ALP 活性降低，T+促進(jìn)劑組ALP 活性增強(qiáng)(P<0.05)(圖9)。

圖7

圖8 CCK-8 檢測添加抑制劑與促進(jìn)劑后細(xì)胞增殖情況(*P<0.05)

圖9 炎癥微環(huán)境下線粒體自噬對(duì)rBMSCs 成骨分化的影響

2.4 炎癥微環(huán)境下成骨相關(guān)指標(biāo)及線粒體自噬相關(guān)指標(biāo)表達(dá)情況 從蛋白層面驗(yàn)證結(jié)果顯示(圖10)，與T 組相比，T+促進(jìn)劑組成骨相關(guān)蛋白ALP與OPN 相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，線粒體自噬相關(guān)蛋白PINK1、Parkin 和LC3II/ LC3I 相對(duì)表達(dá)量升高(P<0.05)，P62/ SQSTM1 相對(duì)表達(dá)量降低(P<0.05)。T+抑制劑組與T 組相比，成骨相關(guān)蛋白ALP 與OPN 相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)。線粒體自噬相關(guān)蛋白PINK1、Parkin 和LC3II/LC3I 相對(duì)表達(dá)量降低(P<0.05)，P62/ SQSTM1 相對(duì)表達(dá)量升高(P<0.05)。

圖10 Western Blot 檢測炎癥環(huán)境下分別加入雷帕霉素(10nM)與3-MA(5mM)后7d 后成骨相關(guān)蛋白與線粒體自噬相關(guān)蛋白表達(dá)情況

從基因?qū)用骝?yàn)證可發(fā)現(xiàn)(圖11)，與T 組相比，T+促進(jìn)劑組成骨相關(guān)基因ALP 與OPN 相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，線粒體自噬相關(guān)基因LC3II/LC3I 相對(duì)表達(dá)量升高(P<0.05)，P62/ SQSTM1 相對(duì)表達(dá)量降低(P<0.05)。T+抑制劑組與T 組相比，成骨相關(guān)基因ALP 與OPN 相對(duì)表達(dá)量顯著降低(P<0.05)。線粒體自噬相關(guān)基因LC3II/ LC3I相對(duì)表達(dá)量降低(P<0.05)，P62/ SQSTM1 相對(duì)表達(dá)量升高(P<0.05)。

圖11 RT-PCR 檢測炎癥環(huán)境下分別加入雷帕霉素(10nM)與3-MA(5mM)后7d 后成骨相關(guān)蛋白與線粒體自噬相關(guān)基因表達(dá)情況(*P<0.05)

因此在炎癥條件下，隨著雷帕霉素誘導(dǎo)線粒體自噬能力增強(qiáng)，成骨分化能力增強(qiáng)。隨著3-MA抑制線粒體自噬能力的減弱，成骨分化能力減弱。

3.討論

如何維持骨穩(wěn)態(tài)與促進(jìn)骨再生一直是口腔醫(yī)學(xué)與骨研究領(lǐng)域關(guān)注的重點(diǎn)問題之一。間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)作為一種具有自我更新和多向分化潛能的干細(xì)胞，可以通過體外誘導(dǎo)定向分化為成骨細(xì)胞。Feng 等研究發(fā)現(xiàn)線粒體裂變可增強(qiáng)線粒體自噬從而促進(jìn)rBMSCs 的干性與多向分化的能力[9]。目前對(duì)于線粒體自噬與成骨分化的相關(guān)性研究較少，具體機(jī)制仍不明確[10]。

應(yīng)用腫瘤壞死因子TNF-α 誘導(dǎo)體外炎癥微環(huán)境是目前常規(guī)使用的一種炎癥誘導(dǎo)方式[11]。相關(guān)研究表明不同濃度及不同刺激時(shí)間下TNF-α 誘導(dǎo)的炎癥微環(huán)境會(huì)對(duì)細(xì)胞的成骨分化產(chǎn)生不同的影響[12]。本研究中選擇TNF-α 100ng/ ml 進(jìn)行體外誘導(dǎo)刺激[13]，成功構(gòu)建體外成骨抑制炎癥模型。

間充質(zhì)干細(xì)胞分化階段，細(xì)胞骨架的變化影響成骨標(biāo)志物的水平，與成骨之間存在直接相關(guān)性[14、15]。纖維狀肌動(dòng)蛋白F-actin 作為細(xì)胞骨架的主要部分，其與細(xì)胞的聚集、解聚、粘附、延伸和遷移直接相關(guān)[16]。同時(shí)相關(guān)研究表明，細(xì)胞肌動(dòng)蛋白絲可促進(jìn)自噬體與溶酶體的融合，完成自噬過程，是自噬產(chǎn)生的基礎(chǔ)[17]。本研究中，通過激光共聚焦觀察線粒體與F-actin 共定位可看出，在rBMSCs 正常分化過程中細(xì)胞微絲結(jié)構(gòu)整齊，線粒體網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)通過管狀連接；而TNF-α 100ng/ ml誘導(dǎo)的炎癥環(huán)境下的細(xì)胞線粒體狀態(tài)發(fā)生顯著變化，細(xì)胞微絲結(jié)構(gòu)紊亂，且數(shù)目明顯減少，線粒體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯破壞。結(jié)合這一現(xiàn)象，本研究進(jìn)一步添加線粒體自噬抑制劑與促進(jìn)劑，通過CCK8、ALP 活性檢測、茜素紅染色、RT-PCR 與Western Blot 來驗(yàn)證線粒體自噬與成骨的相關(guān)性。

雷帕霉素通過抑制mTOR 蛋白激酶活性，從而誘導(dǎo)線粒體自噬的發(fā)生[18]。3-MA 作為一種線粒體自噬抑制劑，主要在自噬小體的形成與發(fā)展過程中發(fā)揮作用[19]。結(jié)合激光共聚焦觀察線粒體與LC3共定位的情況，進(jìn)一步驗(yàn)證雷帕霉素與3-MA 對(duì)自噬的強(qiáng)弱表達(dá)[20]。通過分析線粒體自噬相關(guān)指標(biāo)PINK1、Parkin、LC3、P62/ SQSTM1，從而對(duì)線粒體自噬能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。LC3 主要參與自噬小體的形成。LC3II 是在自噬相關(guān)基因Atg 的作用下與磷脂酰乙醇胺(PE)偶聯(lián)形成，結(jié)合于自噬體內(nèi)外膜并與溶酶體融合后，外膜上的LC3II 被Atg4B 切割，產(chǎn)生LC3I 循環(huán)利用，內(nèi)膜上的LC3II 則被溶酶體降解。因此在蛋白層面上通常使用LC3II/ LC3I 比值的大小來估計(jì)自噬水平的高低。LC3II/ LC3I 比值升高，自噬增強(qiáng)。反之，則下降[21]。NusChke A等研究發(fā)現(xiàn)在自噬處于激活狀態(tài)時(shí)，LC3II 蛋白的積累促進(jìn)了干細(xì)胞的分化[22]。這與本研究中，通過添加線粒體自噬促進(jìn)劑進(jìn)一步促進(jìn)成骨分化相一致。P62/ SQSTM1 作為連接泛素化與LC3II 的接頭蛋白，在胞漿中以散在點(diǎn)狀或聚集形式存在，可在胞質(zhì)與細(xì)胞核中轉(zhuǎn)運(yùn)，與底物結(jié)合的P62/ SQSTM1轉(zhuǎn)運(yùn)至自噬溶酶體中被蛋白水解酶降解而釋放，因此P62/ SQSTM1 蛋白的表達(dá)量與自噬活性呈負(fù)相關(guān)[23]。最新研究發(fā)現(xiàn)，PINK1/ Parkin 介導(dǎo)的線粒體自噬與單細(xì)胞群分化呈正相關(guān)[24]。PINK1 作為一種蛋白激酶是啟動(dòng)線粒體自噬的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，主要位于線粒體內(nèi)膜上，Parkin 則位于級(jí)聯(lián)信號(hào)下游。PINK1 可識(shí)別損傷的線粒體并在其表面積聚集，與Parkin 及泛素共同促進(jìn)線粒體上多種外膜蛋白泛素化，最終在接頭蛋白的P62/ SQSTM1的作用下轉(zhuǎn)運(yùn)至自噬溶酶體中降解[25]。使用雷帕霉素對(duì)炎癥環(huán)境下rBMSCs 進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示雷帕霉素可明顯恢復(fù)炎癥環(huán)境所抑制的干細(xì)胞成骨分化與PINK1 及Parkin 的表達(dá)。而經(jīng)3-MA 處理后，炎癥下rBMSCs 線粒體自噬相關(guān)指標(biāo)PINK1及Parkin 的表達(dá)進(jìn)一步被抑制，同時(shí)成骨分化能力也進(jìn)一步下降。炎癥環(huán)境下，抑制劑與促進(jìn)劑對(duì)線粒體自噬能力的調(diào)控，影響了成骨分化能力，說明線粒體自噬在保護(hù)細(xì)胞成骨分化過程中的重要性。

研究結(jié)果表明線粒體自噬能力的減弱可能是炎癥環(huán)境抑制細(xì)胞成骨分化能力不可或缺的因素之一。推測提升炎癥環(huán)境下線粒體自噬能力是促進(jìn)炎癥環(huán)境下rBMSC 成骨分化能力的有效策略。