歐陽祝，談安群，周琦，易鑫，程玉嬌，黃林華，王華*

1(西南大學柑桔研究所，中國農(nóng)業(yè)科學院柑桔研究所，重慶,400712)2(國家柑桔工程技術(shù)研究中心，重慶,400712)

柑橘是世界上第一大宗水果，其品種主要有甜橙、寬皮柑橘、柚、檸檬和雜柑等[1]。柑橘果皮作為柑橘鮮食和加工的主要副產(chǎn)物，富含類黃酮、香豆素、膳食纖維等多種活性物質(zhì)[2]。其中柚皮苷是柑橘果皮中最為常見的黃酮類物質(zhì)之一[3]。柚皮苷是由4′,5,7-三羥基二氫黃酮苷元與鼠李糖苷[2-O-(6-脫氧-α-L-甘露聚糖)-β-D-葡萄糖]構(gòu)成的化合物[4](圖1-a)，具有抗癌[5]、抗氧化[6]、抗炎[7]、降低膽固醇[8]等多種生物藥理活性，具有作為人類膳食補充劑和畜禽天然抗生素的潛力。

目前，已有較為成熟的技術(shù)將柑橘皮渣中的柚皮苷提取并純化，但由于其溶解度較低，味道偏苦，很少被直接使用，因此提高柚皮苷的溶解度，增加其生物利用度顯得尤為重要。研究表明將活性成分與環(huán)糊精、環(huán)果糖、殼寡糖、磷脂等配體分子間通過共價鍵或氫鍵結(jié)合，可改善天然產(chǎn)物的溶解性[9]。殼寡糖是由2～20個氨基葡萄糖通過β-1,4糖苷鍵連接而成的糖鏈(圖1-b)，具有良好的生物降解、抗氧化和抑菌活性[10-11]。研究報道殼寡糖的分子質(zhì)量是影響其功能性質(zhì)的主要因素[12]，分子質(zhì)量<1 000 Da和>3 000 Da的殼寡糖功能活性存在很大差異[13]。CAO等[14]采用噴霧干燥和冷凍干燥的方法制備蘆丁-殼寡糖復(fù)合物，發(fā)現(xiàn)其能增加蘆丁的溶解性和抗氧化活性。WANG等[15]采用低分子質(zhì)量殼寡糖制備三苯基膦-殼寡糖-姜黃素偶聯(lián)物，發(fā)現(xiàn)其能去除急性肝損傷期間產(chǎn)生的過多活性氧，減輕氧化應(yīng)激損傷。BI等[16]采用平均分子質(zhì)量為1 500的殼寡糖制備殼寡糖香葉醇衍生物，結(jié)果表明其有良好的水溶性，可抑制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長，可作為新型抑菌劑用于食品防腐。目前關(guān)于柚皮苷與殼寡糖復(fù)合物的制備及其功能活性的探究鮮有報道。

a-柚皮苷；b-殼寡糖圖1 柚皮苷和殼寡糖的分子結(jié)構(gòu)Fig.1 Molecular structure of naringin and oligochitosan

為了提高柚皮苷原有功能活性，增加其溶解度和生物利用度。本文以柚皮苷和殼寡糖為原料，按一定比例分別制備柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物和柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物，分析比較兩類(共計10種)復(fù)合物與柚皮苷的溶解度、抗氧化和抑菌活性，確定適宜殼寡糖分子質(zhì)量和混合比例。以期為柚皮苷在醫(yī)療保健、膳食補充和畜禽飼料方面的研究開發(fā)提供實驗數(shù)據(jù)，也為柑橘果皮的綜合利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

柚皮苷、鄰菲羅啉、殼寡糖A(分子質(zhì)量2 000～3 000 Da)、殼寡糖B(分子質(zhì)量800～1 000 Da)(純度>97%)，上海源葉生物科技有限公司；DPPH、FeSO4、磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)，重慶市北碚區(qū)旭科化學試劑經(jīng)營部；大腸桿菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)，重慶市寶欣泰生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Ultimate3000高效液相色譜儀，美國戴安公司；BRUKER TENSOR 27傅里葉變換紅外光譜儀，德國布魯克；Phenom Pro掃描電鏡，荷蘭飛納；X′Pert3 Powder X射線衍射儀，荷蘭帕納特；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司；3020-352酶標儀，賽默飛；HZQ-F160全溫振蕩培養(yǎng)箱，蘇州市培英實驗設(shè)備有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 柚皮苷-殼寡糖復(fù)合物的制備

稱取柚皮苷2.32 g，殼寡糖A 6 g，分別溶于適量95%乙醇中，將兩者等量混合，渦旋振蕩5 min。復(fù)合物在45 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分溶劑，于60 ℃真空干燥，粉碎過篩[17]即得柚皮苷與殼寡糖A物質(zhì)的量比為2∶1的柚皮苷-殼寡糖復(fù)合物A。按上述方法分別制得物質(zhì)的量比為1∶1、1∶2、1∶3和1∶5的柚皮苷-殼寡糖復(fù)合物B、C、D、E。同時制備柚皮苷與殼寡糖B的復(fù)合物a、b、c、d、e。

1.3.2 掃描電鏡分析

在銅板上黏貼導(dǎo)電膠，取適量60 ℃真空干燥樣品于導(dǎo)電膠上噴金處理后，在300倍率的條件下用場發(fā)射掃描電子顯微鏡觀察柚皮苷、殼寡糖A、殼寡糖B和復(fù)合物晶體形態(tài)，確定是否形成復(fù)合物。

1.3.3 傅里葉變換紅外光譜分析

取適量柚皮苷、殼寡糖A、殼寡糖B、柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物和柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物與KBr以質(zhì)量比1∶200混合壓片，將壓片好的樣品于傅里葉紅外光譜儀上進行500～4 500 cm-1的檢測。

1.3.4 X射線衍射分析

將樣品均勻鋪放X射線衍射儀衍射槽內(nèi)，在掃描范圍2θ=5～60°，步長0.02°，電流40 mA，電壓40 kV的條件下測定樣品結(jié)晶度。

1.3.5 溶解度的測定

將柚皮苷分別與殼寡糖A、殼寡糖B按物質(zhì)的量1∶1混合制成物理混合物，分別將過量樣品和混合物溶于超純水中，渦旋振蕩5 min，37 ℃下振蕩溶解24 h后于4 000 r/min離心10 min，取1 mL上清液過0.45 μm微孔濾膜進行HPLC分析。溶解量為測得柚皮苷含量與溶液應(yīng)有柚皮苷含量比。

檢測條件：Venusil MPC18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；柱溫30 ℃；檢測波長283 nm；檢測器：紫外檢測器；流動相1%冰乙酸(A)～甲醇(B)；進樣量10 μL；流速1 mL/min。

1.3.6 抗氧化活性分析

將柚皮苷、殼寡糖A、殼寡糖B、柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物和柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物溶于蒸餾水中，制成1.0 g/L的樣品溶液，參考XU等[18]的方法對樣品DPPH自由基、·OH和ABTS陽離子自由基清除活性進行測定，并用1.0 g/L 抗壞血酸溶液作陽性對照。

1.3.7 抑菌活性分析

1.3.7.1 實驗菌液制備

抑菌實驗參考李莉等[19]的方法，將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和鼠傷寒沙門氏菌于瓊脂平板培養(yǎng)基37 ℃培養(yǎng)24 h活化后，培養(yǎng)稀釋至106CFU/mL的菌液作為實驗菌液。

1.3.7.2 樣品抑菌液配制

將柚皮苷、殼寡糖A、殼寡糖B、柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物、柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物和土霉素用無菌水倍比稀釋，配制質(zhì)量濃度為320、160、80、40、20、10、5、2.5 mg/mL的抑菌液。

1.3.7.3 無菌濾紙片的制備

將濾紙制成直徑為6 mm的紙片，121 ℃高壓滅菌15 min后，分別浸泡于20 mg/mL柚皮苷、復(fù)合物及土霉素溶液中12 h備用。

1.3.7.4 體外抑菌實驗

取1.3.7.1制備好的實驗菌液50 μL均勻涂布在瓊脂平板上，將浸泡后的濾紙片鋪于瓊脂平板上，每個平板4片，做好標記，間距均勻。用土霉素溶液作為陽性對照，普通濾紙片為陰性對照，37 ℃培養(yǎng)24 h后，用游標卡尺測量抑菌圈大小。

1.3.7.5 最低抑菌濃度(minimum inhibitory concentration，MIC)實驗

在96孔板上設(shè)置實驗孔為50 μL培養(yǎng)基+10 μL實驗菌液+60 μL不同濃度樣品抑菌液；陽性對照孔為50 μL培養(yǎng)基+10 μL實驗菌液+60 μL不同濃度土霉素溶液；陰性對照孔為110 μL培養(yǎng)基+10 μL實驗菌液；培養(yǎng)基對照孔為120 μL培養(yǎng)基；抑菌液對照孔為120 μL不同濃度樣品抑菌液；空白對照孔為60 μL培養(yǎng)基+60 μL不同濃度樣品抑菌液。每組平行4個孔取平均值。用酶標儀在630 nm處測定各孔吸光度值，并結(jié)合肉眼觀察確定各抑菌液最低抑菌濃度。

1.3.7.6 最低殺菌濃度(minimum bactericidal concentration，MBC)實驗

根據(jù)MIC實驗結(jié)果，取未見細菌生長的各孔培養(yǎng)液各50 μL，涂布于瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)24 h后，觀察有無菌落長出，平板上菌落數(shù)少于5個的最小稀釋度的抑菌液濃度為最低殺菌濃度。

1.3.8 數(shù)據(jù)分析處理

實驗數(shù)據(jù)采用Origin 2018和ChemDraw17.0處理作圖；采用Excel 2019和SPSS 26.0對抗氧化和抑菌能力進行數(shù)據(jù)處理，ANOVA進行Duncan差異分析；所有樣品平行實驗3次，結(jié)果為平均值±標準差。

2 結(jié)果與討論

2.1 掃描電鏡分析

將復(fù)合物通過噴金處理后，在場發(fā)射掃描電子顯微鏡下觀察其形態(tài)。由圖2可知，柚皮苷顆粒呈棒狀結(jié)晶，而殼寡糖顆粒均呈空心的球狀結(jié)構(gòu)，且殼寡糖A晶體較殼寡糖B晶體大。柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物和柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物呈不規(guī)則多面體結(jié)構(gòu)，且柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物晶體較柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物晶體大，兩者相比柚皮苷和殼寡糖晶體形態(tài)發(fā)生了明顯變化，且未在復(fù)合物掃描電鏡圖中發(fā)現(xiàn)柚皮苷或殼寡糖的晶體。

圖2 柚皮苷、殼寡糖及其復(fù)合物掃描電鏡圖Fig.2 Scanning electron micrographs of naringin, chitooligosaccharide and its complexes 注：a-柚皮苷；b-殼寡糖A；c-殼寡糖B；d、e、f、g、h為復(fù)合物A、B、C、D、E；i、j、k、l、m為復(fù)合物a、b、c、d、e(圖3同)

此外，柚皮苷晶體原有的顏色為淡黃色，而復(fù)合物晶體顏色為均勻的深棕色或深褐色(圖3)。以上結(jié)果表明，柚皮苷與殼寡糖在乙醇溶劑中相互結(jié)合反應(yīng)形成了新的復(fù)合物。

圖3 柚皮苷、殼寡糖及其復(fù)合物圖片F(xiàn)ig.3 Pictures of naringin, chitooligosaccharide and its complexes

2.2 傅里葉紅外光譜分析

1-柚皮苷；2-殼寡糖A；3～7-復(fù)合物A～E圖4 柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物傅里葉紅外光譜分析圖Fig.4 Fourier infrared spectroscopic analysis of naringin-chitooligosaccharide A complex

1-柚皮苷；2-殼寡糖B；3～7-復(fù)合物a～e圖5 柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物傅里葉紅外光譜分析圖Fig.5 Fourier infrared spectroscopic analysis of naringin-chitooligosaccharide B complex

2.3 X射線衍射分析

X射線衍射是分析材料晶體結(jié)構(gòu)或形態(tài)的常用技術(shù)[24],將復(fù)合物置于衍射槽內(nèi)，在2θ=5～60°掃描，其掃描結(jié)果見圖6、圖7，柚皮苷在2θ為5～30°時具有一系列尖銳、強烈的特征衍射峰，符合其晶體特性[25]。2種分子質(zhì)量的殼寡糖均無尖銳的特征峰，衍射圖譜呈現(xiàn)寬峰，證明了殼寡糖非晶體的性質(zhì)。在柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物中，復(fù)合物A在2θ為9.19、9.87、15.12、15.68、25.46°有尖銳的特征峰，與柚皮苷相對比其大多數(shù)特征峰消失。同理，在柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物中，復(fù)合物a在2θ為9.25、9.91、15.16、15.71、20.08、21.08、25.48°有尖銳的特征峰，復(fù)合物b在2θ為15.16、15.75°有尖銳的特征峰。此外，其余復(fù)合物(復(fù)合物B、復(fù)合物C、復(fù)合物D、復(fù)合物E、復(fù)合物c、復(fù)合物d、復(fù)合物e)的衍射圖譜和殼寡糖相似，且柚皮苷的特征峰幾乎全部消失，表明柚皮苷分散于殼寡糖分子中，結(jié)晶度降低或消失[26]。

1-柚皮苷；2-殼寡糖A；3～7-復(fù)合物A～E圖6 柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物X射線衍射圖譜Fig.6 X-ray diffraction pattern of naringin- chitooligosaccharide A complex

1-柚皮苷；2-殼寡糖B；3～7-復(fù)合物a～e圖7 柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物X射線衍射圖譜Fig.7 X-ray diffraction pattern of naringin- chitooligosaccharide B complex

2.4 不同比例復(fù)合物的溶解度比較

取復(fù)合物溶解，經(jīng)振搖24 h后發(fā)現(xiàn)柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物的溶解性較差，有沉淀沉于底部。柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物的溶解性較好，基本全部溶解。采用HPLC對柚皮苷具體溶解性進行分析，利用柚皮苷標準品進行外標法定量分析，得到柚皮苷標準品的標準曲線方程為Y=23.651X-5.301(R2=0.999)。根據(jù)復(fù)合物中柚皮苷含量與高效液相色譜測得的柚皮苷含量計算柚皮苷溶解度。由圖8可得，在復(fù)合物中，物質(zhì)的量比為2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶5的柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物中柚皮苷的溶解度分別為柚皮苷的36.4、14.9、56.2、85.5、80.9倍。而物質(zhì)的量比為2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶5的柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物中柚皮苷的溶解度是柚皮苷的9.8、15.9、18.1、48.9、53.3倍。相比于柚皮苷，復(fù)合物中柚皮苷的溶解度顯著增加，且柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物中柚皮苷的溶解度優(yōu)于柚皮苷-殼寡糖B。此外，復(fù)合物中柚皮苷的溶解度隨殼寡糖比例的增加而上升，這可能是由于殼寡糖打亂柚皮苷的原有結(jié)晶，使其結(jié)晶度降低從而提高其溶解度[27]。

圖8 柚皮苷-殼寡糖A、柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物 在水中的溶解度Fig.8 Solubility of naringin-chitooligosaccharide A and naringin-chitooligosaccharide B complexes in water

2.5 抗氧化分析

通過分光光度計測定復(fù)合物對DPPH自由基、·OH和ABTS陽離子自由基的清除率。由圖9-a、圖9-b可得，柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物對DPPH自由基的清除率(59.52%～74.34%)和柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物對DPPH自由基的清除率(57.66%～86.97%)相對于柚皮苷對DPPH自由基的清除率20.13%顯著提高。由圖9-c、圖9-d可得，除復(fù)合物a外柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物對·OH的清除率(16.87%～50.42%)和柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物對·OH的清除率(10.81%～42.23%)與柚皮苷對·OH的清除率(13.70%)相比，均有所增加。由圖9-e、圖9-f可得，除復(fù)合物D和復(fù)合物E外柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物對ABTS陽離子自由基的清除率(10.33%～19.68%)和柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物對ABTS陽離子自由基的清除率(13.22%～20.70%)與柚皮苷對ABTS陽離子自由基的清除率(12.78%)相比，均有所增加，但增加的程度較DPPH自由基和·OH低。對DPPH自由基、·OH和ABTS陽離子自由基的清除率大小為：復(fù)合物A>復(fù)合物B>復(fù)合物C>復(fù)合物D>復(fù)合物E，復(fù)合物e>復(fù)合物d>復(fù)合物c>復(fù)合物b>復(fù)合物a。雖然殼寡糖A的抗氧化活性低于殼寡糖B，但就整體而言柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物、柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物的抗氧化活性相差不大，且相比于單一柚皮苷均有所提高。已有研究表明，類黃酮的抗氧化活性與其分子中羥基的個數(shù)和位置有關(guān)[28]，引入殼寡糖分子中羥基從而提高了復(fù)合物抗氧化能力[29]。

2.6 抑菌活性分析

通過制備復(fù)合物藥敏紙片，測定復(fù)合物對3種常見致病菌的抑菌效果。抑菌圈實驗結(jié)果如表1所示，陰性對照為藥敏紙片直徑，柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物對大腸桿菌抑制作用明顯，鼠傷寒沙門氏菌次之，對金黃色葡萄球菌抑制作用較小。在柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物中，復(fù)合物E抑菌效果最為明顯；在柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物中，復(fù)合物d抑菌效果最為明顯?？傮w而言，復(fù)合物增加了柚皮苷對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果。復(fù)合物抑菌效果的增加可能是由于其能與細菌相互作用，破壞其細胞膜，使胞內(nèi)成分釋放[26, 29]。柚皮苷-殼寡糖A復(fù)合物對大腸桿菌的抑制效果更明顯；柚皮苷-殼寡糖B對金黃色葡萄球菌的抑菌效果更明顯，兩類復(fù)合物對沙門氏菌的抑菌效果相當。柚皮苷對沙門氏菌的抑菌效果明顯，復(fù)合物多數(shù)未能增加其對沙門氏菌的抑菌效果。

a、b-DPPH自由基清除率；c、d-·OH清除率；e、f-ABTS陽離子自由基清除率圖9 柚皮苷-殼寡糖A、柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物的抗氧化活性Fig.9 Antioxidant activity of naringin-chitooligosaccharide A and naringin-chitooligosaccharide B complexes

表1 柚皮苷-殼寡糖A、柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物 對3種致病菌抑菌活性 單位：%

培養(yǎng)24 h后觀察各孔澄清度，若肉眼可見渾濁，且有白色沉淀，則表明有細菌大量生長，抑菌效果較差。結(jié)果如表2所示，培養(yǎng)基對照孔和土霉素對照孔均保持原有顏色，澄清無菌落生長。當藥物質(zhì)量濃度達5 mg/mL時，復(fù)合物C、復(fù)合物E、復(fù)合物c、復(fù)合物d對鼠傷寒沙門氏菌有明顯抑制作用，當藥物質(zhì)量濃度達10 mg/mL時，除復(fù)合物b外均對鼠傷寒沙門氏菌有明顯抑制作用。復(fù)合物b在藥物質(zhì)量濃度達20 mg/mL時對鼠傷寒沙門氏菌有明顯抑制作用。

表2 柚皮苷-殼寡糖A、柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物 對鼠傷寒沙門氏菌抑制效果Table 2 Inhibitory effect of naringin-chitooligosaccharide A and naringin-chitooligosaccharide B complexes on Salmonella typhimurium

復(fù)合物對金黃色葡萄球菌的抑制效果如表3所示，當藥物質(zhì)量濃度達5 mg/mL時，復(fù)合物B、復(fù)合物D、復(fù)合物d對金黃色葡萄球菌有明顯抑制作用，當藥物質(zhì)量濃度達10 mg/mL時，除復(fù)合物c外其余復(fù)合物均對金黃色葡萄球菌有明顯抑制作用，當藥物質(zhì)量濃度達20 mg/mL時，復(fù)合物c對金黃色葡萄球菌有明顯抑制作用。

表3 柚皮苷-殼寡糖A、柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物 對金黃色葡萄球菌抑制效果Table 3 Inhibitory effect of naringin-chitooligosaccharide A and naringin-chitooligosaccharide B complexes on Staphylococcus aureus

復(fù)合物對大腸桿菌的抑制效果如表4所示，當藥物質(zhì)量濃度為5 mg/mL時，復(fù)合物D、復(fù)合物E對大腸桿菌有明顯抑制作用，當藥物質(zhì)量濃度達10 mg/mL時，復(fù)合物A、復(fù)合物d、復(fù)合物e對大腸桿菌有明顯抑制作用，當藥物質(zhì)量濃度達20 mg/mL時，復(fù)合物a對大腸桿菌菌有明顯抑制作用。當藥物質(zhì)量濃度達40 mg/mL時，復(fù)合物B、復(fù)合物C、復(fù)合物b、復(fù)合物c對大腸桿菌有明顯抑制作用。

根據(jù)上述肉眼觀察并結(jié)合吸光度值測定結(jié)果，測定10種復(fù)合物對3種常見致病菌的MIC和MBC結(jié)果如表5所示，結(jié)合進一步培養(yǎng)觀察，測得復(fù)合物d對大腸桿菌的MBC為40 mg/mL，復(fù)合物E及復(fù)合物d對金黃色葡萄球菌的MBC為80 mg/mL，復(fù)合物D和復(fù)合物e對鼠傷寒沙門氏菌的MBC為40 mg/mL，復(fù)合物A、復(fù)合物E、復(fù)合物d對鼠傷寒沙門氏菌的MBC為80 mg/mL。由于藥物濃度限制，其余復(fù)合物對致病菌的MBC并未測出。復(fù)合物A、復(fù)合物B、復(fù)合物C、復(fù)合物a、復(fù)合物b、復(fù)合物c的殺菌作用較弱。柚皮苷在質(zhì)量濃度160 mg/mL時對3種致病菌具有明顯的抑制作用，在320 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，未測得其MBC。推測可能是由于殼寡糖比例的增加，增加了復(fù)合物的殺菌效果，使復(fù)合物MBC較柚皮苷有所下降。

表4 柚皮苷-殼寡糖A、柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物 對大腸桿菌抑制效果Table 4 Inhibitory effect of naringin-chitooligosaccharide A and naringin-chitooligosaccharide B complexes on Escherichia coli

表5 柚皮苷-殼寡糖A、柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物 對3種致病菌的MIC及MBCTable 5 MIC and MBC of naringin-chitooligosaccharide A and naringin-chitooligosaccharide B complexes against three pathogens

3 結(jié)論

本實驗選用殼寡糖A(分子質(zhì)量2 000～3 000 Da)和殼寡糖B(分子質(zhì)量800～1 000 Da)，制備不同比例的柚皮苷-殼寡糖復(fù)合物，通過掃描電鏡、紅外光譜和X射線衍射分析比較柚皮苷、柚皮苷-殼寡糖A和柚皮苷-殼寡糖B復(fù)合物的結(jié)構(gòu)特征和溶解度，并分析比較其抗氧化、抑菌活性。柚皮苷與兩類殼寡糖通過氫鍵或范德華力等非共價鍵形成穩(wěn)定復(fù)合物。經(jīng)過HPLC分析復(fù)合物的水溶性，柚皮苷-殼寡糖復(fù)合物在原有柚皮苷的溶解度上提高約54.8倍。復(fù)合物比柚皮苷具有更好的抗氧化活性。復(fù)合物對自由基的清除率強弱為DPPH自由基>·OH>ABTS陽離子自由基。其中復(fù)合物A和復(fù)合物e的抗氧化活性最高。此外，復(fù)合物也增加了柚皮苷對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和鼠傷寒沙門氏菌的抑制效果，且復(fù)合物D、復(fù)合物E、復(fù)合物d和復(fù)合物e對致病菌有一定的殺菌效果，是潛在的抑菌劑。綜上，柚皮苷與殼寡糖A在比例為2∶1時形成的復(fù)合物，抗氧化活性最佳；在比例1∶3和1∶5時形成的復(fù)合物，柚皮苷溶出率和抑菌活性最佳。柚皮苷與殼寡糖B在比例1∶3和1∶5時形成的復(fù)合物，其柚皮苷溶出率、抗氧化和抑菌活性均最佳。該研究為柚皮苷在畜禽飼料領(lǐng)域、生物醫(yī)療領(lǐng)域和功能保健食品等領(lǐng)域的開發(fā)應(yīng)用提供新思路。