礎 魯

內(nèi)蒙古自治區(qū)阿拉善左旗農(nóng)牧區(qū)生態(tài)管理綜合行政執(zhí)法局，內(nèi)蒙古巴彥浩特 750300

雞大腸桿菌病是指部分或全部由大腸埃希氏菌所引起的局部或全身性感染的疾病，其抗原性復雜，血清型多樣，臨床癥狀和病理變化多變。從近年來的禽病報道可以看出，大腸桿菌病已經(jīng)成為影響?zhàn)B雞業(yè)發(fā)展的主要疾病之一。國內(nèi)外對雞大腸桿菌病的病原學﹑臨床癥狀及防治方面的報道很多，但對其病理組織學變化的研究及發(fā)病機理方面的相關性研究則鮮有報道。本試驗選用通過細菌學確診的臨床自然病例，對其肝臟和脾臟病理組織學變化進行觀察和研究，并通過對感染大腸桿菌的病雞的病理學變化的觀察，以充實大腸桿菌病的資料庫，為病理組織學文庫建設增添新的內(nèi)容，從而為進一步研究和控制大腸桿菌病提供可靠的資料和理論基礎。同時，證明大腸桿菌及其代謝產(chǎn)物對機體的病理作用及機體在發(fā)生大腸桿菌感染時所產(chǎn)生的組織應答反應，從而為藥理學、藥代動力學的研究提供依據(jù)，給臨床預防治療該病提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物

本試驗選用自然感染大腸桿菌，經(jīng)細菌學診斷為大腸桿菌病的50 只病雞(30 ～50 日齡)，均來自洛陽市周邊縣幾個雞場。由河南科技大學動物科技學院禽病研究室提供。

1.1.2 試驗儀器

220-A0 型電熱恒溫干燥箱， MDJ-自動磨刀機，SD-2 型推拉式三用切片機，小型三用水箱， XS-型顯微鏡（OLYMPUS）。

1.1.3 試劑

甲醛溶液分析純(37%～40%)，無水乙醇分析純試劑（99.7%），二甲苯分析純試劑（99.0%），石蠟（熔點55 ～59 ℃），蘇木精，伊紅（醇溶液），鹽酸分析純試劑（36%～38%），中性樹膠，草酸銨結晶紫，碘液，蕃紅染色液（稀），普通瓊脂平板、麥康凱平板和遠藤氏培養(yǎng)基平板。

1.2 方法

1.2.1 臨床癥狀

雞胚死亡發(fā)生在孵化過程，特別是孵化后期，病變卵黃呈干酪樣或黃棕色水樣物質，卵黃膜增厚。病雛雞主要表現(xiàn)為精神萎靡，排出綠白色稀糞和逐漸消瘦死亡或短期死亡，蛋雞主要表現(xiàn)產(chǎn)蛋停止，精神沉郁，腹瀉，糞便中混有蛋清、凝固蛋白及卵黃小塊，具有惡臭味 。

1.2.2 實驗室細菌學檢測

根據(jù)不同的病型采取病料（肝﹑脾﹑心﹑血﹑氣管分泌物等）進行涂片，革蘭氏染色法染色后鏡檢，可見革蘭氏陰性的中等大小桿菌，進一步將病料分別接種到普通瓊脂平板、麥康凱和遠藤氏培養(yǎng)基平板上，置37 ℃溫箱中培養(yǎng)24 h。在普通培養(yǎng)基上則為無色菌落，麥康凱平板上為粉紅色菌落，遠藤氏培養(yǎng)基平板上則為紅色菌落，并見閃爍金屬光澤，即可判斷為大腸桿菌感染。

1.2.3 試驗步驟

病料經(jīng)過選取、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片及附貼、染色等組織切片技術制片后利用OLYMPUS 顯微鏡分別在10 倍光鏡下觀察其組織病理變化，并利用電腦顯微互動采集圖片。

2 結果

與正常組織相比較，解剖學上的變化有肝臟腫大，肝包膜增厚，在肝表面形成的纖維素性膜，呈不透明黃白色，易剝脫。病情輕的局部發(fā)生，病情嚴重的整個肝表面被此膜包裹，把此膜剝脫后肝呈紫褐色，急性死亡病雞肝臟嚴重淤血。脾臟腫大，呈紅褐色，表面有針尖大小的壞死灶，質地脆弱。組織學上的變化有放射狀肝細胞素紊亂變?yōu)闊o規(guī)則形，竇狀隙擴張，充滿紅細胞，中央靜脈充血，肝細胞發(fā)生脂肪變性。脾竇充血，邊緣不明顯，紅髓脾索細胞索斷裂，白髓脂肪變性，白髓脾小結細胞松散，脾小體結構消失，淋巴細胞減少，網(wǎng)狀細胞增生。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)致病性大腸桿菌進入雞的上呼吸道后，首先附著氣管上皮，此時，健康的雞可通過呼吸道黏膜上皮的黏液分泌及纖毛的擺動，將大腸桿菌清除，防止侵入深部。當侵入肺部時，大腸桿菌從肺部毛細血管進入血液循環(huán)，引起菌血癥，當機體抵抗力減弱時，大腸桿菌大量繁殖，引起敗血癥。

從病理組織學變化看，急性死亡的雞主要出現(xiàn)急性敗血癥和亞急性纖維素炎的變化，主要特征是在各個臟器上均能看到細菌團塊，組織發(fā)生充血、出血和水腫并有大量的細胞浸潤。在多數(shù)臟器的表面附有纖維蛋白滲出物，這可能是機體對致病因素侵入機體所表現(xiàn)出來的應答反應。當細菌侵入后，機體主要以粒細胞的滲出和吞噬作用作為防御反應的第一步，當侵入機體的細菌數(shù)量較多、毒力較強時，超過了機體的抵抗力，可引起疾病惡化和死亡。由病理組織學變化看，與正常肝臟組織結構相比較，在正常組織切片中肝臟呈條索狀，而與豬、貓、駱駝相比較，雞的肝小葉分葉不明顯，因為肝小葉的輪廓清晰度與小葉間的結締組織的發(fā)達程度有關，所以雞肝臟發(fā)生病變時在肝小葉很難分辨其病變輕重的。慢性死亡的雞，病變由急性、亞急性炎癥轉到慢性階段，主要表現(xiàn)為臟器表面的纖維蛋白性滲出物發(fā)生機化，在病理切片中發(fā)現(xiàn)病程稍長點的雞肝臟切片中的枯否氏細胞明顯減少，而病程短的急性型枯否氏細胞相對較多，這說明了在整個病程中枯否氏細胞吞噬作用是很強的。脾臟外觀多腫脹，其原因是正常情況下，健康雞的脾小結數(shù)量較少，體積較小，當發(fā)生體液免疫時脾小結數(shù)量增多，體積增大。包括脾臟內(nèi)組織細胞的變性壞死，都是促成脾臟腫大的輔助因素。從本試驗來看感染大腸桿菌病雞肝臟和脾臟組織結構的病理變化可能與機體的防御能力增強，使細菌局限于機體的局部，引起機體局部組織的漸進性病變有關。

本試驗對病雞臨床癥狀和細菌學檢測基礎上只用肉眼觀察解剖學變化和低倍數(shù)光學顯微鏡來觀察和分析肝臟和脾臟組織學變化。因顯微鏡倍數(shù)較低，所觀察到的結構有限，下一步需要在電子顯微鏡觀察和做其他相關分子生物學試驗研究，更有利于該病深入細致地研究分析和治療，明確發(fā)病機理的基礎上，制定出較為合理的預防和治療措施，以減少養(yǎng)殖戶的損失，提高養(yǎng)殖效益。

4 結論

4.1 急性死亡病雞的肝臟病理組織學變化是肝臟嚴重淤血，肝細胞素紊亂，竇狀隙擴張，充滿紅細胞。

4.2 急性死亡病雞的脾臟病理組織學變化脾竇充血，脾小體結構消失。

4.3 慢性的大腸桿菌病表現(xiàn)為各臟器表面的纖維蛋白滲出物發(fā)生機化，脾臟有輕微的腫脹。

4.4 大腸桿菌致病機制有待進一步研究。上述結果只是在組織學方面說明了感染致病性大腸桿菌病雞的肝臟和脾臟組織結構發(fā)生的變化，從而降低機體抵抗力而導致發(fā)病。與其相關的其他致病機理有待進一步研究。