胡衛(wèi)國，徐艷梅，郝麗娟，高燕霞

1.華北制藥股份有限公司，河北 石家莊 050200；2.天津大學(xué)化工學(xué)院，天津 300350；3.河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院，河北 石家莊 050011

甲鈷胺被認(rèn)為是一種內(nèi)源性的維生素B12，研究表明，本藥可增加神經(jīng)遞質(zhì)并使神經(jīng)軸突傳遞延遲恢復(fù)，從而起到治療多發(fā)性神經(jīng)炎等疾病的作用，臨床研究表明，本藥還可用于治療糖尿病性神經(jīng)病變等周圍神經(jīng)性病變［1-4］。甲鈷胺原料藥的品質(zhì)會(huì)直接影響甲鈷胺制劑的質(zhì)量。

重金屬一旦進(jìn)入人體，就很難被降解，影響到體內(nèi)一些酶及蛋白質(zhì)的活性因此影響其功能，會(huì)對人體的正常新陳代謝和生理功能產(chǎn)生嚴(yán)重的損傷［5-8］，從用藥安全性角度出發(fā)，對甲鈷胺原料藥中重金屬元素的含量分析十分重要。

本研究建立電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（ICPMS）法同時(shí)測定甲鈷胺原料藥中砷（As）、鉛（Pb）、鈷（Co）、鎳（Ni）、金（Au）、鈀（Pd）、鉑（Pt）、鋇（Ba）、鎘（Cd）、銅（Cu）、鐵（Fe）、鋅（Zn）等12 種金屬元素的含量［9-17］，以期為甲鈷胺原料藥的全面質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

7900 電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國Agilent 公司）；ETHOS ONE 微波消解儀（意大利Mlistone）；Mettler XS105 電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司）；超純水儀（美國Millipore 公司）；精密移液器（德國Sartorius 公司）。

甲鈷胺原料藥：批號分別為2012512、2012513、2012514，華北制藥股份有限公司。單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液：砷（批號GSB 04-1714-2004）、鉛（批號GSB 04-1742-2004）、鈷（批號GSB 04-1722-2004）、鎳（批號GSB 04-1740-2004）、金（批 號GSB 04-1715-2004）、鈀（批號GSB 04-1743-2004）、鉑（批號GSB 04-1744-2004）、鋇（批 號GSB 04-1717-2004）、鎘（批號GSB 04-1721-2004）、銅（批號GSB 04-1725-2004）、鐵（批號GSB 04-1726-2004）、鋅（批號GSB 04-1761-2004）等均購自國家有色金屬及電子材料分析測試中心，濃度均為1 000 μg/mL；質(zhì)譜調(diào)諧溶液為7Li、59Co、89Y、140Ce、205Tl 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（質(zhì)量濃度10 ng/mL，批號22-32GSX2，美國安捷倫公司）；硝酸，色譜純（默克公司）；體積分?jǐn)?shù)30%過氧化氫溶液，分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定條件

等離子體流量：18 L/min；霧化器氣流速：0.25 L/min；稀釋氣流速：0.85 L/min；射頻功率：1 550 kW；霧化室溫度：4 ℃。

2.2 溶液配制

2.2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)工作儲(chǔ)備液首先將12 種金屬標(biāo)準(zhǔn)試劑稀釋為1 000 μg/L 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，使用2%硝酸溶液作為稀釋劑。

體積分?jǐn)?shù)為2%的硝酸溶液被用來將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1 000 μg/L）配制成質(zhì)量濃度分別為0.1、20、30、40、50 μg/L 的系列濃度混合溶液。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液制備使用體積分?jǐn)?shù)為2%的硝酸溶液將103Rh、187Re 單元式標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成質(zhì)量濃度為20 μg/L 混合內(nèi)標(biāo)溶液，采用在線內(nèi)標(biāo)加入。

2.2.3 供試品溶液制備取甲鈷胺原料藥約0.2 g，精密稱定，置于聚四氟乙烯消解罐中，加入3 mL硝酸后在室溫下放置過夜，然后再加入2 mL 體積分?jǐn)?shù)為30 %的過氧化氫溶液，放置于微波消解儀中消解，按照表1 程序進(jìn)行。完成后待消解罐冷卻至室溫，將消解后的消解罐放置于加熱趕酸器中約30 min 以驅(qū)除樣品中多余的氮氧化物。放置至冷卻后，取出，用水轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶中，反復(fù)沖洗消解罐并將洗液并入50 mL 容量瓶中，最后加水定容，混勻。按照相同的方法制備試劑空白溶液。

表1 微波消解程序

2.3 線性考察

取“2.2.1”項(xiàng)下系列濃度標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行測定，橫坐標(biāo)為質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)為測量值與內(nèi)標(biāo)測量值的比值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算相關(guān)系數(shù)r，結(jié)果表明在線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，r≥0.999 6 結(jié)果見表2。

表2 12種重金屬的線性關(guān)系與檢出限

2.4 檢測限與定量限

通過對樣品空白溶液連續(xù)測定11 次計(jì)算檢測限（LOD）及定量限（LOQ），其中LOD 定義為各元素信號響應(yīng)的3 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差對應(yīng)的元素濃度值，LOQ 定義為各元素信號響應(yīng)的10 倍標(biāo)準(zhǔn)偏差對應(yīng)的元素濃度值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

2.5 回收率實(shí)驗(yàn)

稱取甲鈷胺原料藥（2012512）約0.2 g，9 份，精密稱定，分別精密加入濃度為1 000 μg/L 的混合標(biāo) 準(zhǔn)溶 液0.2，0.375，0.75 mL 各3 份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備加樣回收溶液，按照2.1 項(xiàng)下測定條件進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。

表3 加樣回收率試驗(yàn)（n=9）

由結(jié)果可知，12 種重金屬元素在高、中、低三個(gè)加標(biāo)濃度的回收率均在85.02%～100.53%之間，說明該方法的測定結(jié)果準(zhǔn)確。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密稱取甲鈷胺（2012512）樣品0.2 g，精密加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 000 μg/L）0.2 mL，按“2.2”項(xiàng)下方法制備樣品，重復(fù)進(jìn)樣6 次，計(jì)算6 次進(jìn)樣結(jié)果的RSD，結(jié)果顯示RSD 在0.45%～1.67%之間，說明該方法的精密度良好。

2.7 樣品測定

對3 批次的樣品按照“2.1”“2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行檢測。結(jié)果，12 種重金屬中僅檢出了Ni、Pt 和Cu，其他9 種金屬元素均未檢出。結(jié)果見表4。

表4 樣品種金屬元素測定結(jié)果（ng/g，n=2）

3 討論

消解程序?qū)τ诮饘僭氐臏y定結(jié)果具有較大影響，因此選擇合適的消解方法及消解程序較為重要，本實(shí)驗(yàn)對消解液的選擇進(jìn)行了優(yōu)化，其中僅使用H2O2作為消解液時(shí)，回收率較低，因此選擇HNO3和H2O2作為消解液。并且為消除待測組分的影響，本實(shí)驗(yàn)選擇Rh、Re 作為在線內(nèi)標(biāo)進(jìn)行測定。經(jīng)方法學(xué)評價(jià)顯示此方法線性回歸良好，靈敏度高、準(zhǔn)確性好，各元素加樣回收率均較理想，表明專屬性較好。該方法適用于甲鈷胺原料藥中12 種金屬元素的檢測，可為化學(xué)藥品中金屬元素的測定提供參考。

本次試驗(yàn)采用3 批樣品進(jìn)行測定，結(jié)果表明每批樣品之間金屬元素的含量基本一致，其中Ni、Pt及Cu 有檢出，其余元素均無檢出。參照 ICH Q3D元素雜質(zhì)指南對制劑金屬元素雜質(zhì)限度規(guī)定，各元素均符合要求。