陳延冰 梁杰 張艷霞

(廣東省婦幼保健院， 廣東 廣州 511440)

《中國(guó)出生缺陷防治報(bào)告(2012)》中提到，我國(guó)出生缺陷發(fā)生率高達(dá)5.6%，葉酸在出生缺陷的防護(hù)起到關(guān)鍵作用?？茖W(xué)合理的葉酸增補(bǔ)，可降低出生缺陷發(fā)生率(例如神經(jīng)管畸形、唐氏綜合征、先天性心臟病等)、孕婦貧血、妊娠高血壓、早期流產(chǎn)、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、早產(chǎn)等[1,2]。因此，建議育齡婦女自孕前3個(gè)月開始持續(xù)增補(bǔ)葉酸。

葉酸匱乏的其一普遍原因是孕婦機(jī)體葉酸的利用能力低下。葉酸的利用能力與葉酸相關(guān)代謝基因有密切關(guān)聯(lián)[2-6]。具體而言，亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase， MTHFR)和甲硫氨酸合成酶還原酶(methionine synthase reductase，MTRR)在葉酸代謝過(guò)程中起到關(guān)鍵作用。MTHFR基因和MTRR基因存在多種基因多態(tài)性位點(diǎn)，其基因的多態(tài)性會(huì)導(dǎo)致酶的生物活性發(fā)生改變，進(jìn)而影響葉酸水平及同型半胱氨酸水平等[3]。本研究旨在利用基因檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)分析育齡期婦女MTHFR基因的典型突變位點(diǎn)C677T A1298C的多態(tài)性分布，篩查出異常的葉酸相關(guān)代謝基因，并且進(jìn)一步篩查出機(jī)體葉酸利用障礙的高風(fēng)險(xiǎn)育齡婦女，為其合理增補(bǔ)葉酸提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2020年1 月至 2020年 8 月在廣東省婦幼保健院門診自愿進(jìn)行葉酸利用能力基因檢測(cè)的育齡婦女作為研究對(duì)象，共計(jì)85 998 例，年齡范圍19～45 歲，均獲得受檢者知情同意。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 DNA提取 采用乙二胺四乙酸鹽(ethyl-enediaminetetraacetic acidm，EDTA)抗凝管抽取受試者3 ml靜脈血， 用廈門致善公司基因組DNA試劑盒提取DNA， TE ( Tris- EDTA)緩沖液溶解，調(diào)節(jié)DNA濃度100 gl。

1.2.2 四色熒光探針(見表1)熒光定量PCR檢測(cè)MTHFRC677T、A1298C的位點(diǎn)多態(tài)性。相關(guān)儀器購(gòu)于美國(guó)AB公司，試劑購(gòu)買于北京六合華大基因科技有限公司。反應(yīng)結(jié)束后在AB ViiA7型熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點(diǎn)熒光。根據(jù)熒光信號(hào)分析C677T、A1298C基因多態(tài)性，利用分析軟件(Quant StudioTM Real-Time PCR Software)確定各個(gè)樣本的基因分型結(jié)果。

表1 四色熒光探針

2 結(jié)果

MTHFRC677T A1298C基因多態(tài)性分布，統(tǒng)計(jì)5386例正常育齡婦女MTHFR基因C677T A1298C位點(diǎn)的基因型分布發(fā)現(xiàn)，MTHFR基因C677T位點(diǎn)在育齡婦女中的多態(tài)性，CC、CT、TT基因型頻率分別為53.5%、 37.4%、9.1%(見表1)；MTHFR基因A1298C位點(diǎn)在育齡婦女中的多態(tài)性，AA、AC、CC基因型的頻率分別為59.7%、35.1%、5.2%(見表2)。

表2 育齡婦女中MTHFR基因C677T位點(diǎn)基因型分布

表3 育齡婦女中MTHFR基因A1298C位點(diǎn)基因型分布

表4 廣東地區(qū)育齡女性與其他地區(qū)育齡女性MTHFR基因型頻率比較[例(%)]

位點(diǎn)基因型頻率與其他地區(qū)女性比較，具有明顯的地域差異。其中χ2檢驗(yàn)結(jié)果顯示，8個(gè)地區(qū)的MTHFR(C677T)基因型分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，其中CC型瓊海地區(qū)最高，占61.9%；CT型遵義地區(qū)最高，占50.5%；TT型淄博地區(qū)最高，占43.6%。8個(gè)地區(qū)的MTHFR(A1298C)基因型分布有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，其中AA型淄博地區(qū)最高，占79.0%；AC型南寧地區(qū)最高，占37.9%；CC型陽(yáng)江地區(qū)最高，占7.9%，見表3。

3 討論

MTHFR酶在葉酸代謝過(guò)程中起到關(guān)鍵作用。MTHFR基因位點(diǎn)的突變可導(dǎo)致機(jī)體葉酸水平的降低及同型半胱氨酸的升高，進(jìn)而導(dǎo)致出生缺陷、孕婦貧血、妊娠高血壓、早期流產(chǎn)、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、早產(chǎn)等[4-7]。

本研究通過(guò)分析育齡婦女MTHFR基因，發(fā)現(xiàn)MTHFRC677T位點(diǎn)CC、CT、TT基因型頻率分別為53.5%、37.4%、9.1%。TT型所占比例與已知的南寧地區(qū) TT 基因型頻率(7.7%)接近[11]， 低于延邊、淄博、廊坊地區(qū)TT基因型頻率(分別為31.1%、43.6%、33.9%)[12-17]。筆者認(rèn)為，采樣人群不同研究地區(qū)不同都可能造成研究結(jié)果的差異。研究結(jié)果與我國(guó)神經(jīng)管畸形患病率北高南低的分布特征基本一致[18]。有研究發(fā)現(xiàn)，攜帶677TT純合子基因型時(shí)其體內(nèi)MTHFR酶活性僅為45%， 1298AC雜合子基因型其體內(nèi)MTHFR酶活性為 68%，而(677CT1298AC)復(fù)合雜合子基因型個(gè)體MTHFR酶活性為41% ，677CT和677TT變異基因型發(fā)生較高人群的血清葉酸濃度會(huì)顯著降低， 同型半胱氨酸水平會(huì)升高， 這些改變與巨幼細(xì)胞性貧血密切相關(guān)[19-23]。

研究結(jié)果表明，葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性檢測(cè)可用于直接篩選葉酸利用能力有缺陷的個(gè)體，為制定個(gè)性化葉酸增補(bǔ)方案， 降低出生缺陷率及實(shí)現(xiàn)優(yōu)生提供科學(xué)量化的指導(dǎo)依據(jù)。