孫斯嘉，冼紹祥，楊忠奇，尹克春，袁天慧

擴(kuò)張型心肌病(dilated cardiomyopathy，DCM)是一種以心室擴(kuò)大和心肌收縮功能降低為特征的異質(zhì)性心臟病，臨床上常可引起心力衰竭、心律失常和猝死[1]。由于擴(kuò)張型心肌病初診后5年內(nèi)病死率高，以及可能需要進(jìn)行心臟移植，對(duì)社會(huì)和家庭造成了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[2]。

黃春林教授認(rèn)為，本病的主要病機(jī)為本虛，在于心、腎、脾陽(yáng)虛，涉及氣、血、水三者病變，主張結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究治療，在通陽(yáng)化氣的基礎(chǔ)上，將本病分為心氣虛弱、陽(yáng)氣虛脫、陽(yáng)虛水泛、水氣凌心、痰熱困肺、心脈不整、心血瘀阻7種證型，其中陽(yáng)虛水泛證，治以溫陽(yáng)利水，多用真武湯加減，黃春林教授在運(yùn)用真武湯加減治療擴(kuò)張型心肌病時(shí)，還特別注重心腎并調(diào)，氣血水同治，故臨床療效尤為顯著[3]。鞠靜等[4]研究表明，真武湯能夠明顯改善病人心臟功能，減輕臨床癥狀及并發(fā)癥，提高生活質(zhì)量，且優(yōu)于單純西藥治療。李崢等[5]通過(guò)觀(guān)察真武湯對(duì)轉(zhuǎn)基因擴(kuò)張型心肌病小鼠心肌組織Atp2a2、Col1a1基因及蛋白的表達(dá)變化，得出真武湯能明顯上調(diào)轉(zhuǎn)基因擴(kuò)張型心肌病小鼠心肌組織中Atp2a2 mRNA及蛋白表達(dá)，下調(diào)Col1a1 mRNA及蛋白表達(dá)，結(jié)果表明真武湯通過(guò)抑制心肌細(xì)胞凋亡、抑制心肌纖維化，改善心室重構(gòu)，進(jìn)而改善心功能，達(dá)到治療擴(kuò)張型心肌病的作用。雖然，目前單一藥物及靶點(diǎn)模型研究已取得了較大成功，但同時(shí)也存在局限性，由于疾病在病理上是與多種途徑、多種基因及多種蛋白的相互作用，因此，在許多情況下，治療是無(wú)法通過(guò)靶向單一通路或基因、蛋白來(lái)實(shí)現(xiàn)的[6]。本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接的方法，旨在通過(guò)研究疾病、藥物、靶點(diǎn)和作用途徑之間的復(fù)雜多樣關(guān)系，為進(jìn)一步探討真武湯治療擴(kuò)張型心肌病提供理論依據(jù)及數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 真武湯活性化合物成分的篩選及作用靶點(diǎn) 通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(TCMSP，https：//tcmspw.com/tcmsp.php)依次檢索真武湯中的5味中藥(附子、茯苓、白術(shù)、生姜、白芍)，并設(shè)置口服生物利用度(oral bioavailability，OB)≥30%，類(lèi)藥性(drug-likeness，DL)≥0.18[7]，篩選出化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定且藥代動(dòng)力學(xué)良好的化合物，作為真武湯的有效成分。并通過(guò)TCMSP和Swiss Target Prediction對(duì)有效成分進(jìn)行靶點(diǎn)預(yù)測(cè)。最后利用UniProt數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.uniprot.org/)中的Retrieve/ID mapping將收集的靶點(diǎn)蛋白統(tǒng)一轉(zhuǎn)換成基因名。

1.2 擴(kuò)張型心肌病的作用靶點(diǎn)及潛在靶點(diǎn)的獲取 分別檢索在線(xiàn)人類(lèi)孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)(OMIM，online mendelian inheritance in man，https：//www.omim.org/)、基因名片數(shù)據(jù)庫(kù)(GeneCard，http：//www.genecards.org/)、TTD數(shù)據(jù)庫(kù)(therapeutic target database，http：//db.idrblab.net/ttd/)、毒性與基因比較數(shù)據(jù)庫(kù)(CTD，the comparative toxicogenomics database，http：//ctdbase.org/)、遺傳藥理學(xué)和藥物基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(PharmGKB，https：//www.pharmgkb.org/)獲取擴(kuò)張型心肌病的相關(guān)基因，設(shè)置關(guān)鍵詞為“dilated cardiomyopathy”，將檢索獲取的靶點(diǎn)整理去重，得到的靶點(diǎn)即為擴(kuò)張型心肌病相關(guān)靶點(diǎn)。將真武湯有效成分靶點(diǎn)和擴(kuò)張型心肌病的靶點(diǎn)上傳至Venn平臺(tái)(http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/)繪制韋恩圖，并保存取交集的基因，即為真武湯治療擴(kuò)張型心肌病的潛在靶點(diǎn)。

1.3 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將真武湯治療擴(kuò)張型心肌病的潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.string-db.org/)，選擇Multiple proteins，物種限定為“Homo sapiens”，設(shè)置置信度“minimum required interaction score”為“high confidence(0.700)”，獲取治療靶點(diǎn)的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)。將蛋白互作網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0進(jìn)行可視化并分析。

1.4 真武湯中藥-潛在化合物-潛在靶點(diǎn)可視化網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 利用真武湯中藥、潛在化合物、潛在靶點(diǎn)構(gòu)建中藥-潛在化合物-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，并將其導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件進(jìn)行可視化分析。

1.5 潛在靶點(diǎn)的基因本體(GO)功能注釋和京都基因和基因組百科全書(shū)(KEGG)通路富集分析 應(yīng)用RStudio的ClusterProfiler包對(duì)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能注釋及KEGG通路富集分析，并利用RStudio的ggplot2包繪制GO柱狀圖及KEGG氣泡圖，最后利用Pathview包進(jìn)行代謝途徑整合和可視化。

1.6 分子對(duì)接驗(yàn)證 利用分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)對(duì)關(guān)鍵蛋白和化合物的結(jié)合活性進(jìn)行驗(yàn)證，主要步驟包括配體小分子的處理和受體蛋白的準(zhǔn)備以及利用AutoDock Vina對(duì)潛在化合物成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)。①配體小分子處理：首先從TCSMP數(shù)據(jù)庫(kù)下載潛在化合物成分的3D結(jié)構(gòu)文件，并保存為mol2格式，利用Open Babel為分子結(jié)構(gòu)加氫原子，選擇PH7.2、MMFF94力場(chǎng)，進(jìn)行加電荷和能量最小化，最后利用Autodock Tools將處理過(guò)的化合物轉(zhuǎn)化為pdbqt格式文件。②受體蛋白的準(zhǔn)備：首先從RCSB蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)(PDB)數(shù)據(jù)庫(kù)(http：//www.rcsb.org/)獲取等待對(duì)接的靶點(diǎn)蛋白的晶體結(jié)構(gòu)，然后將晶體結(jié)構(gòu)導(dǎo)入軟件PyMol 2.4.0，去除溶劑分子和雜質(zhì)，并將關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白與配體分離，最后利用PyMol插件GetBox確定對(duì)接盒子的中心及大小。③利用AutoDock Vina依次將潛在化合物成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行分子對(duì)接，并獲取對(duì)接打分，選取負(fù)數(shù)絕對(duì)值最高的潛在化合物與關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白的對(duì)接模式，最后利用PyMol對(duì)結(jié)合模式作結(jié)合模式圖。

2 結(jié) 果

2.1 真武湯活性化合物篩選及作用靶點(diǎn)收集 通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)依次檢索真武湯中5味中藥，設(shè)置OB≥30%及DL≥0.18后，得到真武湯活性化合物共59種，其中附子含有活性成分21種，茯苓含有活性成分15種，白術(shù)含有活性成分7種，生姜含有活性成分5種，白芍含有活性成分13種，β-谷甾醇是白芍和生姜共有的活性成分，谷甾醇是附子和白芍共有的活性成分(見(jiàn)表1)。通過(guò)TCMSP及Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到相應(yīng)的靶點(diǎn)共259個(gè)，其中附子對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)有144個(gè)，茯苓對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)有69個(gè)，白術(shù)對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)有31個(gè)，生姜對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)有69個(gè)，白芍對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)有111個(gè)。

表1 真武湯活性化合物成分

(續(xù)表) 真武湯活性化合物成分

2.2 擴(kuò)張型心肌病的靶點(diǎn)收集及潛在靶點(diǎn)的獲取 通過(guò)OMIM、GeneCards、TTD、CTD、PharmGKB數(shù)據(jù)庫(kù)檢索擴(kuò)張型心肌病的相關(guān)基因，去重整理后得到擴(kuò)張型心肌病的靶點(diǎn)共980個(gè)。將擴(kuò)張型心肌病相關(guān)靶點(diǎn)與真武湯藥物相關(guān)作用靶點(diǎn)分別導(dǎo)入Venn平臺(tái)得到交集基因47個(gè)，這47個(gè)交集基因即為真武湯治療擴(kuò)張型心肌病的潛在靶點(diǎn)。詳見(jiàn)圖1。

圖1 藥物-疾病共有靶點(diǎn)韋恩圖

2.3 網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

2.3.1 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)(PPI)的可視化分析 將獲取的47個(gè)潛在治療靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)獲取蛋白互作網(wǎng)絡(luò)并導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件繪制蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖(見(jiàn)圖2)，節(jié)點(diǎn)的大小反映度值的大小，度值排名前11位的節(jié)點(diǎn)分別為白細(xì)胞介素6(IL6)、腫瘤壞死因子(TNF)、轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)、表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、內(nèi)皮一氧化碳合酶(NOS3)、轉(zhuǎn)錄激活因子1(STAT1)、胱天蛋白酶3(CASP3)、絲裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、磷脂酰肌醇-3激酶催化亞單位α(PIK3CA)、過(guò)氧化物酶增生激活受體(PPARG)、磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)(見(jiàn)表2)，這些靶點(diǎn)在蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中具有重要的地位，可能是真武湯治療擴(kuò)張型心肌病的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

圖2 PPI蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖

表2 真武湯治療擴(kuò)張型心肌病的主要作用靶點(diǎn)(度值)

2.3.2 中藥-有效成分-治療靶點(diǎn)的可視化分析 將構(gòu)建的中藥-潛在化合物-潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape3.8.0軟件中進(jìn)行可視化處理(見(jiàn)圖3)。君藥附子對(duì)應(yīng)的化合物有17個(gè)，潛在靶點(diǎn)有26個(gè)；臣藥茯苓和白術(shù)對(duì)應(yīng)的化合物有14個(gè)，潛在靶點(diǎn)有14個(gè)；佐藥生姜和白芍對(duì)應(yīng)的化合物有10個(gè)，潛在靶點(diǎn)有31個(gè)；其中化合物度值排名前7位的分別是山奈酚、β-谷甾醇、豆甾醇、6-Demethyldesoline、去甲烏頭堿、3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮、芍藥新苷(見(jiàn)表3)，這些化合物靶向了較多的擴(kuò)張型心肌病相關(guān)基因，可能是真武湯治療擴(kuò)張型心肌病的關(guān)鍵化合物。君藥(附子)和佐藥(生姜、白芍)，君藥(附子)和臣藥(茯苓、白術(shù))，臣藥(茯苓、白術(shù))和佐藥(生姜、白芍)均具有較多重疊靶點(diǎn)，說(shuō)明真武湯各組藥物之間不僅單獨(dú)發(fā)揮治療作用，還具有相互協(xié)同的治療作用。

圖3 真武湯中藥-有效成分-潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖

表3 真武湯治療擴(kuò)張型心肌病前7位關(guān)鍵化合物

2.4 潛在靶點(diǎn)的GO功能注釋和KEGG通路富集分析 應(yīng)用RStudio的ClusterProfiler包對(duì)47個(gè)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能注釋和KEGG通路富集分析。GO富集分析得到生物過(guò)程(biology process，BP)共943條、細(xì)胞組分(cellular component，CC)共15條和分子功能(molecular function，MF)共40條，每部分排名前10位如圖4所示，由圖可知其中主要的生物過(guò)程是循環(huán)系統(tǒng)中的血管病變、血壓負(fù)調(diào)節(jié)、血壓調(diào)節(jié)、白細(xì)胞和細(xì)胞黏附、第二信使介導(dǎo)的信號(hào)通路、活性氧代謝過(guò)程、血液循環(huán)的調(diào)節(jié)、類(lèi)固醇激素反應(yīng)等。KEGG富集分析得到120條信號(hào)通路，其中排名前20位的通路如圖5所示，主要涉及晚期糖基化終末產(chǎn)物-糖基化終末產(chǎn)物受體(AGE-RAGE)信號(hào)通路(見(jiàn)圖6)、缺氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)信號(hào)通路、弓形蟲(chóng)病、脂肪細(xì)胞脂解調(diào)節(jié)、腎素分泌、鈣信號(hào)通路等信號(hào)通路。

圖4 GO富集分析

圖5 KEGG通路富集分析

圖6 AGE-RAGE信號(hào)通路圖

2.5 分子對(duì)接驗(yàn)證 利用AutoDock Vina對(duì)篩選出的41個(gè)關(guān)鍵化合物與PPI網(wǎng)絡(luò)中度值排名前5位的關(guān)鍵基因(IL6、NOS3、TNF、EGFR、STAT3)依次進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。其中，關(guān)鍵蛋白的晶體結(jié)構(gòu)信息見(jiàn)表4。

表4 靶蛋白及原配體信息

結(jié)合能(affinity)是AutoDock Vina評(píng)價(jià)小分子與蛋白質(zhì)結(jié)合程度的主要標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合能小于0說(shuō)明配體與受體可以自發(fā)結(jié)合，且結(jié)合能絕對(duì)值越大，說(shuō)明配體與靶蛋白受體結(jié)合越穩(wěn)定，當(dāng)分值大于 5 時(shí)說(shuō)明分子與靶點(diǎn)有較好的結(jié)合活性，分值大于7則說(shuō)明分子與靶點(diǎn)的結(jié)合構(gòu)型具有強(qiáng)烈的活性[8-9]。本研究分子對(duì)接驗(yàn)證表明，有效化合物均能很好地與5個(gè)關(guān)鍵基因進(jìn)行對(duì)接，其結(jié)合能分值的最大值均大于7(見(jiàn)表5)，對(duì)關(guān)鍵殘基及其作用力分析后，選取結(jié)合能分值最大的化合物與靶點(diǎn)蛋白作結(jié)合模式圖(見(jiàn)圖7)。

表5 分子對(duì)接結(jié)果

圖7 分子對(duì)接結(jié)合模式圖

3 討 論

真武湯出自張仲景的《傷寒雜病論》，主治脾腎陽(yáng)虛、水飲內(nèi)停之證以及太陽(yáng)病發(fā)汗太過(guò)、陽(yáng)虛水泛證。全方由附子為君，溫腎陽(yáng)以化氣行水，并可散寒止痛兼暖脾陽(yáng)以運(yùn)水濕；茯苓、白術(shù)皆為臣，茯苓淡滲利濕，白術(shù)健脾燥濕；生姜、白芍為佐，生姜助附子溫陽(yáng)散寒，合茯苓散水，又可和胃降逆止嘔，白芍則利小便行水氣，兼斂陰舒筋解肌肉瞤動(dòng)，還可防附子燥熱傷陰之弊。

由于擴(kuò)張型心肌病病因及病情較為復(fù)雜，目前尚無(wú)特異性治療方案，故臨床上多以對(duì)癥治療為主，西醫(yī)方面主要包括強(qiáng)心、利尿、擴(kuò)血管治療，而對(duì)于終末期病人主要是采用左室減容術(shù)、人工心臟輔助機(jī)械泵裝置、心臟移植等外科手術(shù)治療[10-11]。沉重的醫(yī)療負(fù)擔(dān)及不良反應(yīng)頻發(fā)，嚴(yán)重影響擴(kuò)張型心肌病心力衰竭病人的治療效果[12]。中醫(yī)藥因其整體觀(guān)念和辨證論治的特點(diǎn)，其治療擴(kuò)張型心肌病具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，且中西醫(yī)結(jié)合治療更是在改善預(yù)后方面療效明顯[13]，真武湯作為溫陽(yáng)利水的代表方，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明附子不僅具有明顯的強(qiáng)心作用，還可以改善外周及冠狀動(dòng)脈循環(huán)[14]；茯苓可以改善慢性心力衰竭大鼠尿潴留和心臟功能，還可以緩解腸道微循環(huán)障礙，阻止血小板聚集，避免微血栓形成[15]；白術(shù)具有免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用，多作為臣藥應(yīng)用于心血管病的治療[16]；生姜具有抗氧化、抗炎及抑菌作用[17]；白芍具有抗炎、保肝、鎮(zhèn)痛、養(yǎng)血等藥理作用[18]。然而以上5味中藥整體治療擴(kuò)張型心肌病的作用機(jī)制尚不明確，因此，本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，以求更深入地探討真武湯治療擴(kuò)張型心肌病的作用機(jī)制。

通過(guò)分析中藥-化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)可知山奈酚、β-谷甾醇、豆甾醇、去甲烏頭堿、3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮、芍藥新苷是真武湯治療擴(kuò)張型心肌病的關(guān)鍵化合物，研究表明，山奈酚具有抗氧化、抗病毒、抗菌、抗炎、增強(qiáng)免疫及保護(hù)損傷組織的作用[19]；β-谷甾醇、豆甾醇均屬于植物中最常見(jiàn)、最重要的甾醇類(lèi)成分，其中β-谷甾醇除了抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用，還具有很強(qiáng)的抗遺傳毒性及抗氧化活性[20]，而豆甾醇則能顯著降低炎性因子的表達(dá)，具有良好的抗炎活性[21]；去甲烏頭堿是附子主要的強(qiáng)心成分之一，其活性極強(qiáng)，可以增強(qiáng)心肌收縮力，加快心率，增強(qiáng)心臟輸出量及心肌耗氧量[22]；蒼術(shù)酮是白術(shù)揮發(fā)油中的主要物質(zhì)之一，其對(duì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)具有顯著抑制作用[23]；現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)芍藥新苷具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、耐缺氧、抗氧化、抗心肌缺血、抗血栓作用[24]。

通過(guò)PPI網(wǎng)絡(luò)分析得到度值排名前5位的關(guān)鍵靶點(diǎn)為IL6、TNF、STAT3、EGFR、NOS3。現(xiàn)代研究表明，在病毒性心肌炎的感染早期，IL6通過(guò)增加巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，降低TNF-α和單核細(xì)胞趨化蛋白-1水平，限制病毒復(fù)制和調(diào)節(jié)早期炎癥反應(yīng)，從而減輕心肌損傷，但隨著炎癥持續(xù)蔓延，IL6過(guò)度表達(dá)則可加重心肌損害[25]。STAT3作為激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子家族的重要成員，對(duì)擴(kuò)張型心肌病病程發(fā)展具有保護(hù)作用，有研究表明在用呋喃唑酮構(gòu)建大鼠擴(kuò)張型心肌病的模型中，由于鈣網(wǎng)蛋白表達(dá)，下調(diào)STAT3通路的磷酸化，因而導(dǎo)致了顯著心肌變性、間質(zhì)纖維化和線(xiàn)粒體腫脹[26]。EGFR是一種廣泛分布于人體各組織細(xì)胞膜上的重要跨膜受體，EGFR通路的激活能夠促使心肌肥大、炎癥及纖維化的發(fā)生，最終發(fā)展為心力衰竭[27]。NOS3是一種內(nèi)皮源性一氧化氮，其在調(diào)節(jié)血管壁功能和心血管穩(wěn)態(tài)方面起著關(guān)鍵作用，心肌NOS表達(dá)的研究表明，擴(kuò)張型心肌病終末期心力衰竭病人中NOS3表達(dá)上調(diào)[28]，可通過(guò)限制鈣離子內(nèi)流對(duì)心肌有一定的保護(hù)作用，從而預(yù)防心律失常和心肌肥厚的發(fā)生[29]。上述靶點(diǎn)在PPI互作網(wǎng)絡(luò)中具有重要地位，在擴(kuò)張型心肌病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，因此，本研究推測(cè)真武湯可能是通過(guò)山奈酚、β-谷甾醇、豆甾醇、去甲烏頭堿、3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮、芍藥新苷等關(guān)鍵成分作用于上述5種關(guān)鍵靶點(diǎn)從而實(shí)現(xiàn)治療作用。

通過(guò)KEGG通路富集分析得到真武湯治療擴(kuò)張型心肌病主要涉及AGE-RAGE 、HIF-1、弓形蟲(chóng)、脂肪細(xì)胞脂解、腎素分泌、鈣離子等信號(hào)通路。晚期糖基化終產(chǎn)物受體RAGE是一種多配體的膜受體，與不同配體結(jié)合后可以啟動(dòng)多條信號(hào)通路，引起細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，破壞細(xì)胞膜蛋白功能，引起鈣離子內(nèi)流，從而導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能及代謝的異常，甚至細(xì)胞凋亡[30]。研究表明，晚期糖基化終產(chǎn)物AGE及其細(xì)胞受體RAGE相互作用對(duì)心臟功能障礙和糖尿病性心肌病的發(fā)作至關(guān)重要[31]。缺氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)對(duì)機(jī)體內(nèi)氧穩(wěn)態(tài)平衡的調(diào)節(jié)起到維持作用，促使機(jī)體對(duì)缺氧產(chǎn)生代償適應(yīng)。心力衰竭病人的心肌處于缺氧狀態(tài)，HIF-1α的表達(dá)增加，可通過(guò)調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等促進(jìn)新血管形成，增加低氧局部的血流量來(lái)增加氧供，以及參與葡萄糖的攝取和糖酵解，在低氧狀態(tài)下改善心肌細(xì)胞的能量代謝；此外，HIF-1α還能介導(dǎo)一氧化氮合酶、腎上腺素受體等參與血管張力的調(diào)節(jié)，發(fā)揮擴(kuò)血管作用，從而實(shí)現(xiàn)心肌保護(hù)[32-34]。但也有研究表明，過(guò)度、持續(xù)地激活HIF-1α?xí)?dǎo)致心肌肥厚，降低心臟病病人的心功能，甚至加重心肌病的發(fā)生[35]。感染也被認(rèn)為是擴(kuò)張型心肌病的重要病因之一，其中柯薩奇B病毒、弓形蟲(chóng)和其他某些病毒感染是主要的病因。有研究表明弓形蟲(chóng)在免疫系統(tǒng)受損的病人中存在一種特殊的感染形式，該類(lèi)病人通常在數(shù)年前就已獲得感染，其中緩殖子在組織囊腫中一直處于休眠狀態(tài)，直到免疫抑制再次激活感染，最終發(fā)展成為心肌病及心力衰竭[35-36]。

綜上所述，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)，初步探討了真武湯治療擴(kuò)張型心肌病的多靶點(diǎn)、多通路的作用機(jī)制。真武湯可能通過(guò)β-谷甾醇、山奈酚、3β-乙酰氧基蒼術(shù)酮、去甲烏頭堿、芍藥新苷等關(guān)鍵活性成分作用于IL6、TNF、STAT3、EGFR、NOS3等關(guān)鍵靶點(diǎn)，通過(guò)調(diào)節(jié)AGE-RAGE 、HIF-1、弓形蟲(chóng)、脂肪細(xì)胞脂解、腎素分泌、鈣離子等信號(hào)通路，產(chǎn)生抑制氧化應(yīng)激及炎癥、改善心肌能量代謝、調(diào)節(jié)免疫功能等機(jī)制發(fā)揮綜合治療作用。但本研究同時(shí)也存在一定的局限性，如由于數(shù)據(jù)庫(kù)的限制及算法的差異，得出的結(jié)論不免有所偏差，因此，尚需進(jìn)一步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或臨床驗(yàn)證。