孫世民，孫珍珠，池菊芳，郭航遠，4*

本研究價值：

（1）沉默調(diào)節(jié)蛋白3（SIRT3）是線粒體相關的重要蛋白，本研究通過SIRT3作為連接，提供了研究阿霉素（DOX）與心肌細胞線粒體的橋梁，并且進一步強調(diào)了線粒體功能在心肌細胞中的重要作用；（2）黃酒多酚（YWPC）對緩解DOX所致心肌損傷的過程仍有不明晰的內(nèi)容，本研究提出了YWPC緩解DOX引起心肌損傷的新的可能途徑。

本研究局限性：

（1）未能通過相關的實驗增加SIRT3表達水平，進一步證明SIRT3后續(xù)作用；（2）沒有深入探究線粒體功能改變對YWPC的影響。

自20世紀50年代第一個蒽環(huán)類藥物被發(fā)現(xiàn)以來，因其在各類腫瘤治療中的明顯效果而被廣泛應用于臨床治療［1］。阿霉素（即多柔比星，Doxorubicin，DOX）是一種蒽環(huán)類藥物，對白血病及多種實體腫瘤均有較好的臨床治療效果，但在臨床應用中常因其劑量依賴性、進展性、不可逆性心肌損傷而受到限制，如DOX在兒童癌癥治療后會形成長期心肌損傷［2-3］。DOX誘導的心肌損傷機制十分復雜，包括線粒體功能障礙、DNA損傷、鐵代謝受損、細胞凋亡及自噬失調(diào)等多種途徑［4］，目前如何預防蒽環(huán)類藥物引起的心肌損傷仍無法形成共識。多酚類物質(zhì)是一類具有抗腫瘤、抗氧化、清除氧自由基和保護心血管作用的天然化學物，本研究團隊前期研究以黃酒及其主要成分黃酒多酚（Yellow Wine Polyphenol Compounds，YWPC）為研究對象，探究其對心血管系統(tǒng)的保護作用，結果發(fā)現(xiàn)YWPC具有緩解DOX所致心臟毒性的作用。研究表明，YWPC可以通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)核因子E2相關因子2（Nrf2）的核易位水平緩解DOX引起的氧化應激及心臟毒性［5-6］。除引起氧化應激反應外，破壞線粒體功能的完整性也是DOX引起心臟毒性的重要原因，而沉默調(diào)節(jié)蛋白3（SIRT3）是線粒體中的Ⅲ類組蛋白脫乙酰基酶，主要通過調(diào)節(jié)賴氨酸的乙?；瘉碚{(diào)節(jié)線粒體網(wǎng)絡。SIRT3通過對細胞線粒體的代謝功能等進行調(diào)節(jié)，減少心臟損傷過程中活性氧的生成，在與心肌損傷相關的許多通路中發(fā)揮著重要作用［7］。由于多酚類化合物表現(xiàn)出較好的線粒體保護作用［8-9］，因此推測YWPC可以通過調(diào)節(jié)SIRT3表達水平降低心肌細胞凋亡水平，進而降低DOX的心臟毒性。為進一步探究YWPC在DOX心肌損傷中的作用機制，本研究擬通過體內(nèi)及體外實驗模擬DOX心肌損傷，并由此觀察SIRT3在其中發(fā)揮的作用，為后期研究SIRT3在DOX心肌損傷中的作用及線粒體的功能打下基礎，為治療DOX心肌病提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 動物及細胞株 體內(nèi)實驗采用SPF級雄性SD大鼠24只，6～8周齡，體質(zhì)量（250±20）g，由上海斯萊克實驗動物有限公司提供〔許可證號：SCXK（滬）2017-0005〕。體外實驗采用的大鼠心肌細胞H9C2購自中國科學院上海細胞庫。本研究通過紹興市人民醫(yī)院實驗動物倫理委員會審批（倫理批號：2020-012）。

1.2 研究試劑 DOX（貨號：HY-15142）、SIRT3抑制劑（3-TYP）（貨號：HY-108331） 購 自MCE公司；YWPC由上海中藥制藥技術有限公司分離提取，純度＞60%；胎牛血清（FBS）（貨號：10270-106）購自Gibco公司；抗SIRT3抗體（貨號：ab86671）、抗B淋巴細胞瘤-2蛋白（Bcl-2）抗體（貨號：ab32124）及抗Bcl-2相關X蛋白（Bax）抗體（貨號：ab32503）均購自Abcam公司；抗甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體及二抗購自Cell Signaling Technology公司；原位末端標記（TUNEL）凋亡檢測試劑盒購自Roche公司；其他生化試劑均為進口分裝或達到國產(chǎn)分析純（AR）級別。

1.3 研究方法

1.3.1 大鼠DOX心肌損傷模型的構建及實驗分組動物適用性喂養(yǎng)1周后，將大鼠隨機分成4組：對照組、YWPC組、DOX組與DOX+YWPC組。DOX組及DOX+YWPC組大鼠每周通過尾靜脈注射1次2.5 mg/kg的DOX，共注射6周，累計劑量15 mg/kg；另外兩組大鼠每周通過尾靜脈注射等量的0.9%氯化鈉溶液。DOX+YWPC組及YWPC組大鼠每日中午12時通過灌胃給予30 mg/kg（總體積2 ml）的YWPC，另外兩組給予等量0.9%氯化鈉溶液，每次灌胃后觀察30 min。實驗大鼠均在6周后結束實驗。

1.3.2 血清乳酸脫氫酶（LDH）水平檢測 動物LDH檢測試劑盒購自南京建成生物公司，于動物實驗藥物干預結束后、大鼠心臟摘除前使用采血針刺入大鼠左心室取血，分離大鼠血清并用于LDH水平的檢測，按照試劑盒說明書將各項檢測液混合后，使用酶標儀測定450 nm處吸光度值。

1.3.3 心臟組織的獲取及保存 動物實驗藥物干預結束后，將大鼠心臟取出并橫向切分，其中上半部分心臟組織置于液氮中保存待Western Blot法檢測使用，下半部分用于組織切片的制備，浸泡于4%甲醛溶液中固定，經(jīng)過常規(guī)脫水、浸蠟、包埋后制成切片。

1.3.4 MASSON染色和免疫組織化學染色 MASSON染色時取各組大鼠心肌新切片脫蠟處理至水，按照MASSON染色試劑盒說明書染色后封片，顯微鏡下觀察各組大鼠心肌切片的心肌纖維形態(tài)/結構、藍色膠原纖維顯色水平；免疫組織化學染色時將各組大鼠心肌新切片脫蠟處理至水，按照一般流程進行抗原修復，滴加抗SIRT3抗體（抗體濃度為1∶200）后4 ℃過夜，磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗后滴加二抗孵育，按照二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒的使用方法進行顯色反應。顯色終止后使用蘇木素染色液將核染為藍色，染色結束后脫水、封片，觀察所顯棕黃色的面積與顏色深淺，即SIRT3表達水平。

1.3.5 TUNEL細胞凋亡檢測 將各組大鼠心肌新切片脫蠟處理至水，用蛋白酶K 37 ℃孵育30 min，滴加TUNEL反應液并37 ℃避光孵育1 h，用PBS沖洗后使用二氨基苯基吲哚（DAPI）進行核染，在熒光顯微鏡下觀察細胞，其中綠色亮點代表細胞凋亡。

1.3.6 組織總蛋白提取及Western Blot法檢測 取保存在液氮中的新鮮、適量、等質(zhì)量的各組大鼠心肌組織，使用電動勻漿器冰上勻漿裂解，提取組織總蛋白。使用喹啉甲酸（BCA）法進行蛋白定量，根據(jù)結果加入適量上樣緩沖液，稀釋配平后制成蛋白質(zhì)樣品以用于Western Blot法檢測。為測定凋亡水平（Bcl-2及Bax蛋白）和SIRT3表達水平的改變情況，分別使用抗Bcl-2、Bax、SIRT3和內(nèi)參GAPDH抗體4 ℃孵育過夜，二抗室溫孵育1 h。使用化學發(fā)光成像系統(tǒng)采集圖像，圖像處理分析軟件（Image J）對各組大鼠心肌Bcl-2、Bax、SIRT3及GAPDH條帶灰度值進行定量分析。

1.3.7 體外大鼠H9C2細胞培養(yǎng)及分組 H9C2細胞在杜氏高糖培養(yǎng)基（DMEM）、37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)，同一代一批H9C2細胞被隨機分為5組：對照組、DOX組、DOX+YWPC（1 mg/L）組、DOX+YWPC（10 mg/L）與DOX+YWPC（100 mg/L），不同濃度的YWPC在添加DOX 12 h前進行預添加，當細胞達到約70%融合時添加1 μmol/L的DOX，干預24 h得到體外DOX心肌損傷模型，采用CCK-8法測定細胞活性，采用Western Blot法測定蛋白表達情況，每種實驗重復3次。

1.3.8 H9C2細胞中3-TYP的應用 在明確YWPC影響DOX引起H9C2細胞凋亡及SIRT3表達水平改變后，為進一步明確SIRT3在實驗過程中的作用，將同一代另一批H9C2細胞隨機分為對照組、DOX組、DOX+YWPC組、DOX+3-TYP組及DOX+YWPC+3-TYP組。DOX干預濃度為1 μmol/L，干預時間為24 h；DOX+YWPC組與DOX+YWPC+3-TYP組在添加DOX 12 h前使用10 mg/L YWPC進行預干預；DOX+3-TYP組與DOX+YWPC+3-TYP組在添加DOX 4 h前使用5μmol/L 3-TYP進行預干預，采用Western Blot法測定蛋白表達情況，實驗重復3次。

1.3.9 CCK-8法 為檢測各干預條件對細胞活性的影響，將H9C2細胞種于96孔板中，每孔約5 000個細胞，每組設復孔3個。細胞貼壁后進行實驗干預，干預結束后按照CCK-8試劑盒說明書在每一個孔加入10 μl反應液，37 ℃培養(yǎng)4 h后用酶標儀讀取各孔450 nm處吸光度值，繪制吸光度值曲線，以吸光度值代表細胞活性。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用Graphpad Prism 7.0軟件繪圖，SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 YWPC緩解DOX引起的大鼠心肌細胞損傷 大鼠心肌切片通過MASSON染色后可見：DOX組大鼠心肌纖維排列紊亂，大量藍色膠原纖維貫穿心肌纖維；DOX+YWPC組大鼠心肌切片紋理部分恢復，藍色膠原纖維減少（圖1）。四組膠原纖維占比比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中DOX組膠原纖維占比高于對照組、DOX+YWPC組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。四組LDH水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中DOX組血清LDH水平高于對照組、DOX+YWPC組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

圖1 YWPC緩解DOX引起的大鼠心肌細胞損傷Figure 1 Effect of YWPC in alleviating DOX-induced myocardial injury in the in vivo experiment with four groups of rats

2.2 YWPC緩解DOX引起的大鼠心肌細胞凋亡 將各組大鼠心臟組織制成蛋白樣品后進行Western Blot法檢測。四組Bcl-2/Bax比值比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中DOX組Bcl-2/Bax比值低于對照組、DOX+YWPC組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。將大鼠心肌切片進行TUNEL染色，可見DOX組的大鼠心肌切片中代表凋亡的綠色亮點明顯增多，呈片狀分布，而經(jīng)YWPC治療后凋亡亮點減少，見圖2。

圖2 YWPC緩解DOX引起的大鼠心肌細胞凋亡情況Figure 2 Effect of YWPC in alleviating myocardial cell apoptosis due to DOX-induced myocardial injury explored in the in vivo experiment with four groups of rats

表1 大鼠心肌損傷相關各實驗結果（±s）Table 1 Results of YWPC in alleviating DOX-induced myocardial injury explored in the in vivo experiment with four groups of rats

表1 大鼠心肌損傷相關各實驗結果（±s）Table 1 Results of YWPC in alleviating DOX-induced myocardial injury explored in the in vivo experiment with four groups of rats

注：a表示與DOX組比較，P＜0.05；YWPC=黃酒多酚，DOX=阿霉素，LDH=乳酸脫氫酶，Bcl-2=B淋巴細胞瘤-2蛋白，Bax=Bcl-2相關X蛋白，SIRT3=沉默調(diào)節(jié)蛋白3

S I R T 3表達水平對照組 6 2 5.7 4±0.7 9 a 3 7 7 3.7 9±2 0 1.6 1 a 1.0 4±0.1 0 a 0.9 9±0.0 8 a Y W P C 組 6 2 4.7 3±3.3 1 4 0 5 9.8 8±3 5.0 8 0.9 0±0.0 6 0.8 4±0.0 5 D O X組 6 3 8.5 0±1.1 9 5 5 4 6.9 1±1 3 7.3 7 0.1 9±0.0 1 0.2 9±0.0 8 D O X+Y W P C組 6 3 1.6 8±1.1 3 a 4 4 9 1.6 8±1 4 9.9 3 a 0.5 7±0.0 2 a 0.5 3±0.0 4 a F值 6 7.7 6 1 7 4.3 2 4 4.0 1 3 9.7 P 值 ＜0.0 1 ＜0.0 1 ＜0.0 1 ＜0.0 1組別 只數(shù) 膠原纖維占比（%）L D H（U/L）B c l-2/B a x比值

2.3 YWPC緩解DOX引起的H9C2細胞凋亡 通過CCK-8法比較DOX作用下各組H9C2細胞的存活率，五組吸光度值比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中DOX組吸光度值低于對照組、DOX+YWPC（1 mg/L）組、DOX+YWPC（10 mg/L）組、DOX+YWPC（100 mg/L）組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。通過Western Blot法檢測H9C2細胞蛋白表達水平，五組Bcl-2/Bax比值比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中DOX組Bcl-2/Bax比值低于對照組、DOX+YWPC（1 mg/L）組、DOX+YWPC（10 mg/L）組、DOX+YWPC（100 mg/L）組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖3、表2。

表2 H9C2細胞CCK-8及Western Blot法檢測結果（±s，n=3）Table 2 Results of viability measured by CCK-8 assay，and levels of apoptosis and SIRT3 measured by Western blotting in DOX-injured H9C2 cells

表2 H9C2細胞CCK-8及Western Blot法檢測結果（±s，n=3）Table 2 Results of viability measured by CCK-8 assay，and levels of apoptosis and SIRT3 measured by Western blotting in DOX-injured H9C2 cells

注：a表示與DOX組比較，P＜0.05

SIRT3表達水平對照組 1.93±0.01a 1.08±0.09a 1.11±0.18a DOX 組 0.74±0.03 0.08±0.01 0.47±0.05組別 吸光度值 Bcl-2/Bax比值DOX+YWPC（1 mg/L）組 0.94±0.04a 0.27±0.02a 0.89±0.08a DOX+YWPC（10 mg/L）組 1.11±0.05a 0.30±0.05a 0.91±0.10a DOX+YWPC（100 mg/L）組 1.35±0.02a 0.50±0.01a 0.95±0.25a F值 605.1 256.2 8.142 P值 ＜0.01 ＜0.01 0.004

圖3 YWPC緩解DOX引起的H9C2細胞凋亡相關蛋白表達情況Figure 3 Effect of YWPC in alleviating apoptosis in DOX-injured H9C2 cells explored in the in vitro experiment

2.4 體內(nèi)外SIRT3表達情況 在動物組織蛋白中，四組SIRT3表達水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中DOX組SIRT3表達水平低于對照組、DOX+YWPC組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。利用免疫組織化學染色觀察到各組切片中SIRT3表達水平的變化趨勢與大鼠心臟組織Western Blot法檢測結果變化趨勢基本一致。在H9C2細胞中，五組SIRT3表達水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中DOX組SIRT3表達水平低于對照組、DOX+YWPC（1 mg/L） 組、DOX+YWPC（10 mg/L） 組、DOX+YWPC（100 mg/L）組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見圖 4、表 1～2。

圖4 大鼠心臟組織、H9C2細胞內(nèi)SIRT3表達情況Figure 4 Expression levels of SIRT3 in DOX-injured myocardial tissues of rat model and DOX-injured H9C2 cell model

2.5 3-TYP對YWPC作用的影響 對照組、DOX組、DOX+YWPC組、DOX+3-TYP組及DOX+YWPC+3-TYP組Bcl-2/Bax比值比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中DOX組及DOX+3-TYP組Bcl-2/Bax比值低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；DOX+YWPC+3-TYP組Bcl-2/Bax比值低于DOX+YWPC組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。五組SIRT3表達水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），其中DOX組、DOX+3-TYP組SIRT3表達水平低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；但DOX+YWPC組與DOX+YWPC+3-TYP組SIRT3表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見圖5、表3。

表3 3-TYP作用下H9C2細胞內(nèi)凋亡相關蛋白表達及SIRT3表達水平變化（±s，n=3）Table 3 Changes of expression levels of apoptosis-related protein and SIRT3 in DOX-injured H9C2 cells intervened with 3-TYP

表3 3-TYP作用下H9C2細胞內(nèi)凋亡相關蛋白表達及SIRT3表達水平變化（±s，n=3）Table 3 Changes of expression levels of apoptosis-related protein and SIRT3 in DOX-injured H9C2 cells intervened with 3-TYP

注：a表示與對照組比較，P＜0.05；b表示與DOX+YWPC組比較，P＜0.05

組別 Bcl-2/Bax比值 SIRT3表達水平對照組 1.06±0.18 1.03±0.08 DOX 組 0.15±0.01a 0.53±0.09a DOX+YWPC組 0.56±0.02 0.81±0.03 DOX+3-TYP 組 0.14±0.01a 0.40±0.16a DOX+YWPC+3-TYP 組 0.08±0.01b 0.63±0.23 F值 401.6 9.979 P值 ＜0.01 0.0016

圖5 3-TYP作用下H9C2細胞內(nèi)凋亡相關蛋白表達及SIRT3表達水平Figure 5 Expression levels of apoptosis-related proteins and SIRT3 in DOX-injured H9C2 cells intervened with 3-TYP

3 討論

DOX具有廣泛的抗癌譜和較高的臨床療效，是多種癌癥的一線化療藥物，然而DOX的嚴重心臟毒性作用較大，使其臨床應用受到了一定限制［10］。DOX與心肌有較高的親和力，長期暴露在DOX中可能導致較為嚴重的心肌損傷，甚至引發(fā)心力衰竭，威脅患者生命［11］。目前臨床上控制DOX心臟毒性的常用策略有：限制劑量暴露、將藥物包裹在脂質(zhì)體中減少心肌攝取、與鐵螯合劑右雷佐生同時給藥以減少游離鐵催化的活性氧的形成以及改變藥物結構等［12］。盡管如此，DOX引起的心力衰竭仍在繼續(xù)發(fā)生，部分原因是其分子和細胞作用機制仍存在爭議且尚未被完全理解［13］，目前如何有效防治DOX誘導的心肌損傷是許多研究的探索方向。各類天然化合物，如積雪草酸、α-亞麻酸、黃酮類、類黃酮類化合物以及酚類化合物等均可通過抗氧化、減少應激及自噬調(diào)節(jié)等途徑起到緩解DOX誘導的心肌損傷的作用［14-17］。近年來，多酚類物質(zhì)的抗氧化活性成為研究熱點，研究證實其在控制心血管系統(tǒng)疾病方面有多種保護作用，例如SHAKERI等［18］提出姜黃素通過調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激而在多種疾病（包括動脈粥樣硬化）中起著重要作用；SERGAZY等［19］提出葡萄多酚提取物可以增加血漿中的抗氧化劑水平并降低自由基水平，具有一定的逆轉DOX心肌損傷的能力和心臟保護作用。本研究團隊前期對黃酒及其主要成分YWPC也進行了長期深入的研究，發(fā)現(xiàn)YWPC在心血管系統(tǒng)中在減輕內(nèi)皮細胞損傷、抑制平滑肌細胞表型轉化等方面均有作用［20-22］，并且證實了YWPC可能通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)Nrf2的核易位水平緩解DOX引起的氧化應激反應及在DOX所致心臟毒性中的保護作用［6］，但仍有進一步研究其他作用機制的必要。SIRT3通過對細胞線粒體的代謝等進行調(diào)節(jié)而減少心臟毒性發(fā)生過程中的活性氧的生成，并通過對叉頭框蛋白O3（FOXO3）、P53及腺苷一磷酸（AMP）等信號通路的作用在許多心臟毒性機制的控制點發(fā)揮重要作用［7］。本研究作為對YWPC緩解DOX心肌損傷作用機制的補充，進一步完善了YWPC在心肌細胞內(nèi)的作用途徑，同時也進一步明確了心肌細胞中SIRT3改善心臟狀態(tài)的作用，為臨床及科研人員開發(fā)DOX新型保護劑提供了理論依據(jù)。

本研究采用體內(nèi)和體外實驗同時進行研究，動物實驗中通過比較DOX組與DOX+YWPC組的Masson染色結果、血清LDH水平和凋亡相關蛋白表達改變，發(fā)現(xiàn)在動物實驗中DOX組較對照組心肌損傷更嚴重，其中血清LDH水平上升提示心肌損傷程度加重，Bcl-2/Bax比值下降提示心肌細胞凋亡增加；與DOX組相比，DOX+YWPC組心肌損傷較輕，血清LDH水平部分恢復，Bcl-2/Bax比值上升，提示YWPC可以在動物實驗中降低心肌細胞凋亡水平，進而緩解心肌損傷。細胞實驗進行了細胞活性的比較和細胞模型中凋亡相關蛋白表達水平比較，其中DOX組較對照組吸光度值減少且Bcl-2/Bax比值下降，提示DOX引起細胞凋亡后降低了細胞活性，而使用不同濃度YWPC進行干預后，與DOX組相比，DOX+YWPC組吸光度值上升且Bcl-2/Bax比值也上升，得到了與動物實驗相一致的結果，進一步證實YWPC可以降低心肌細胞凋亡水平，維持細胞存活，這些結論與早期YWPC相關研究結果一致［5，17］。通過對動物切片免疫組織化學染色、動物組織及H9C2細胞Western Blot法發(fā)現(xiàn)，在DOX及YWPC作用的過程中SIRT3表達水平發(fā)生了改變：與對照組相比，使用DOX會使動物心臟內(nèi)和H9C2細胞內(nèi)SIRT3表達水平下降；在YWPC的作用下，DOX+YWPC各組中SIRT3蛋白表達水平升高，提示SIRT3可能參與了DOX與YWPC作用的過程，對比其他研究者關于SIRT3在DOX引起的心肌毒性中作用的相關研究下如：YANG等［23］認為高SIRT3表達水平及活性可以有效減輕DOX心肌毒性，SALEH等［24］也提出恢復氧化物酶體增殖激活受體γ共激活因子1α（PGC-1α）/SIRT3信號在治療DOX心肌毒性中具有重要作用，本研究實驗結果與之相符。由于YWPC相關研究較少，且SIRT3在其中的作用仍不明確，為了進一步探究SIRT3在YWPC緩解DOX引起心肌損傷過程中的作用，本研究通過進一步的細胞實驗發(fā)現(xiàn)使用3-TYP抑制SIRT3功能后，YWPC緩解DOX心肌凋亡的作用被抑制，提示YWPC可能通過調(diào)節(jié)SIRT3減輕心肌損傷，但這需要進一步的實驗驗證。

綜上所述，YWPC可能通過上調(diào)SIRT3的表達起到保護心肌免受DOX毒性影響的作用，而在DOX誘導的心肌損傷中SIRT3是一種重要的保護蛋白。在后續(xù)的實驗研究中，可以SIRT3為基點，深入探究YWPC在其中發(fā)揮作用的位點；同時，可以基于SIRT3相關的位點尋找能更加有效地緩解DOX誘導的心肌損傷的藥物。

作者貢獻：孫世民設計研究方案，進行細胞實驗及后期數(shù)據(jù)收集、統(tǒng)計學分析，繪制圖表等；孫珍珠負責進行動物實驗中的造模、取材以及切片染色；池菊芳負責文章的質(zhì)量控制及審校；郭航遠提出研究思路，對文章整體負責、監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。