亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        黃麻葉水解液中總黃酮、黃酮醇類組分含量及酪氨酸酶活性抑制分析

        2022-05-11 06:49:20馮湘沅楊琦成莉鳳鄭科彭正紅段盛文
        中國麻業(yè)科學(xué) 2022年2期
        關(guān)鍵詞:黃酮

        馮湘沅,楊琦,成莉鳳,鄭科,彭正紅,段盛文

        (中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所,湖南 長沙 410205)

        黃酮類化合物(Flavonoids)是植物中重要的一種次級代謝產(chǎn)物,包括山奈酚(Kaempferol)、槲皮素 (Quercetin)、楊梅素 (Myricetin)和異鼠李素 (Isorhamnetin)等黃酮醇(Flavonols)類組分物質(zhì),其多種生理功能已得到證實,黃酮化合物具有潛在促進(jìn)健康作用[1-2]。酪氨酸酶(tyrosinase,EC1.14.18.1)是一種含銅的金屬氧化還原酶,能催化L-酪氨酸羥基轉(zhuǎn)化成 L-多巴,再氧化形成多巴醌,經(jīng)一系列的酶促和非酶促反應(yīng)最終形成黑色素。在人體中,過多黑色素的積累會導(dǎo)致皮膚形成各類色斑等問題,只有通過抑制酪氨酸酶活性,才能減少黑色素的形成,達(dá)到美白效果。目前,常用的酪氨酸酶活性抑制劑大多是通過化學(xué)方法合成,存在著一定的副作用,而從植物中提取的黃酮類化合物則被認(rèn)為是理想的酪氨酸酶抑制劑之一[3-5],因此,尋找安全、高效的黃酮類化合物植物和酪氨酸酶抑制劑在食品及醫(yī)藥方面具有重要意義。

        黃麻(Jute)屬于錦葵科(Malvaceae)黃麻屬(Corchorus)一年生草本植物,約有100多個品種,其中不同品種黃麻葉片中均含有黃麻甙、黃麻酮及多糖類等化學(xué)成分,具有一定的抗氧化活性[6]。近年來,黃春梅[7]開展了水和微波法提取菜用黃麻(即長蒴黃麻)中黃酮類化合物的研究;陳如冰等[8]研究了長蒴黃麻總黃酮的提取及其抗氧化性。但尚未見有關(guān)不同品種黃麻葉中黃酮類化合物對抑制酪氨酸酶活性的報道。本文對不同品種黃麻葉在甲醇-鹽酸、加熱回流條件下進(jìn)行水解,檢測分析水解液中總黃酮、黃酮醇類組分含量及抑制酪氨酸酶活性,旨在為黃麻葉功能性食品、美容產(chǎn)品等的深度開發(fā)利用提供基礎(chǔ)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        原料:于湖南長沙試驗基地采摘的黃麻葉(苗后天數(shù)均為28 d),品種名稱分別為:黃德深紅皮(C.capsularis)、巴麻 72-3(C.olitorius)、中黃麻 4號(C.olitorius)。

        試劑:異槲皮素、楊梅素、槲皮素、山奈酚、異鼠李素、蘆丁等標(biāo)準(zhǔn)品購自Aladdin公司;福林酚、Tris、HCL、甲醇(色譜純)、磷酸(色譜純)、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、L-抗壞血酸/Vc、酪氨酸酶(100KU)均為Aladdin公司產(chǎn)品。

        PBS緩沖溶液:A液為稱取Na2HPO4·12H2O 71.63 g,用超純水溶解定容于1000 mL容量瓶中;B液為稱取NaH2PO4·2H2O 31.20 g,用超純水溶解定容于1000 mL容量瓶中;以A∶B=51∶49的體積比混合,用pH計測定調(diào)至pH值6.8。

        1.2 儀器

        高效液相色譜儀(Dionex Ultimate 3000),C18柱(Thermo Hypersil BDS,250 mm×4.6 mm,5μm),泵(LPG-3400),紫外檢測器(VWD-3400),采用變色龍軟件采集并處理數(shù)據(jù);粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司,F(xiàn)Z102型);全波長酶標(biāo)儀(Thermo Scientifc,1510型);pH計(梅特勒-托利多儀器上海有限公司,F(xiàn)E28型)。

        1.3 HPLC檢測條件

        流動相:V(甲醇)∶V(0.4%磷酸)=55∶45;流速:1 mL/min;洗脫方式:等度洗脫;柱溫:25℃;紫外檢測波長:360 nm;進(jìn)樣量:20μL[9]。

        1.4 方法

        1.4.1 供試樣品制備

        參照吳柳春等[10]方法并略做修改。將黃麻葉洗凈,50℃烘干,粉碎,過45目篩;精確稱取1.0 g黃麻葉粉末于250 mL圓底燒瓶中,加入甲醇40mL、鹽酸4mL,置于85℃回流水解1.5 h后,冷卻至室溫;再移入離心管于4500 r/min離心10 min,除去沉淀,收集得到的上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾,即得水解液,同時設(shè)置CK(甲醇-鹽酸溶液)對照。

        1.4.2 總黃酮含量的測定

        標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制:精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5 mg,用甲醇溶液溶解后定容于50 mL容量瓶中,得到0.1 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液;同時適度稀釋成不同濃度溶液用作標(biāo)準(zhǔn)曲線測定[11]。

        取1mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液于10mL的容量瓶中,分別加5% NaNO2溶液0.30mL,搖勻,靜置6min;再加10% Al(NO3)3溶液0.30 mL,搖勻,靜置6 min;然后再加4% NaOH溶液4.00 mL,用60%乙醇稀釋至刻度,搖勻,靜置12 min,于510 nm處測吸光度[11]。

        樣品總黃酮含量測定方法同上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液的測定。

        總黃酮質(zhì)量濃度ρ0(mg/mL)按蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的線性回歸方程進(jìn)行計算。

        總黃酮含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)w0計,數(shù)值以毫克每克(mg/g)表示,按公式(1)計算:

        式中:ρ0為總黃酮濃度(mg/mL);n為樣品稀釋倍數(shù);v為總體積(mL);m0為粉末質(zhì)量(g)。

        1.4.3 黃酮醇類組分測定

        混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制:準(zhǔn)確稱取異槲皮素5.0 mg、楊梅素4.2 mg、槲皮素4.5 mg、山奈酚3.6 mg、異鼠李素3.0 mg混合,甲醇溶液超聲溶解,定容至50 mL,0.45μm濾膜過濾。同時適度稀釋成不同濃度溶液用作HPLC檢測,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線建立線性回歸方程。

        樣品:取1 mL提取液用0.45μm濾膜過濾,用作HPLC檢測。

        組分質(zhì)量濃度ρ1(mg/mL)按組分標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的線性回歸方程進(jìn)行計算。

        組分含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1計,數(shù)值以毫克每克(mg/g)表示,按公式(2)計算:

        式中:m0為粉末質(zhì)量(g);ρ1為組分質(zhì)量濃度(mg/mL);v為總體積(mL)。

        1.4.4 酪氨酸酶活性抑制測定

        參照錢文濤[12]方法并略做修改。按表1取樣混勻,37℃恒溫10min后,在T2、T4中分別加入酪氨酸酶,再反應(yīng)10 min,475 nm處測吸光度,同時以CK(甲醇-鹽酸溶液)、Vc(黑色素抑制劑)作為對照。

        表1 酪氨酸酶活性抑制率測定Table 1 Tyrosinase-inhibiting activities assay

        酪氨酸酶活性抑制率以φ計,數(shù)值以百分率(%)表示,按式(3)進(jìn)行計算:

        式中:AT1為未加樣品和未加酪氨酸酶的反應(yīng)液的吸光度;AT2為未加樣品和加酪氨酸酶的反應(yīng)液的吸光度;AT3為加樣品和未加酪氨酸酶的反應(yīng)液的吸光度;AT4為加樣品和加酪氨酸酶的反應(yīng)液的吸光度。

        1.4.5 IC50值

        IC50值是指酪氨酸酶活性抑制率為50%時所需樣品的濃度,該值根據(jù)線性回歸方程計算得出。IC50值越低,表明酪氨酸酶活性抑制能力越強(qiáng)。

        1.5 數(shù)據(jù)處理

        試驗數(shù)據(jù)均取平行3次測量值的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差,同時采用Excel、SPSS 19.0統(tǒng)計軟件和Origin 2020b軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理并分析。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 總黃酮含量

        采用Al(NO3)3顯色法對不同濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定,以濃度(x,mg/mL)為橫坐標(biāo),吸光度(y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,所得線性回歸方程為y=1.182 2x+0.090 4,R2=0.999 2。根據(jù)線性回歸方程和公式得出(表2):黃德深紅皮葉、巴麻72-3葉、中黃麻4號葉的水解液中總黃酮含量分別為92.76、35.51、37.36 mg/g。結(jié)果表明,3種黃麻葉中總黃酮含量存在差異。

        表2 黃麻葉水解液中總黃酮含量測定Table 2 Determination of flavones in hydrolysate of jute leaves

        2.2 黃酮醇類組分與含量

        2.2.1 黃酮醇類組分

        將5種黃酮醇類組分混合溶解,定容,稀釋至適宜倍數(shù),HPLC法檢測。以濃度(x,mg/mL)為橫坐標(biāo),色譜峰面積(y)為縱坐標(biāo),制作線性回歸方程(表3)。

        表3 黃酮醇組分的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍Table 3 The linear regression equation,relative coefficient and linearity range of flavonols

        樣品經(jīng)干燥、粉碎、水解、HPLC法檢測,對照黃酮醇類組分標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖(圖1)分析可知:3種黃麻葉水解液中均含有異槲皮素、楊梅素、槲皮素、山奈酚、異鼠李素以及2種主要未知組分等黃酮醇類組分。

        2.2.2 黃酮醇類組分含量

        由圖1、表4所示,按照黃酮醇類組分混合標(biāo)準(zhǔn)品曲線繪制的線性回歸方程及公式計算得出:黃德深紅皮葉、巴麻72-3葉水解液中黃酮醇類組分含量均以山奈酚最高,其次為異鼠李素。黃德深紅皮葉中的山奈酚和異鼠李素含量分別是巴麻72-3的1.37倍和1.24倍;中黃麻4號葉中黃酮醇組分含量最高的為槲皮素(2.45 mg/g),其次為山奈酚(0.36 mg/g),最低的為異槲皮素(0.09 mg/g);同時可以看出,中黃麻4號的槲皮素含量分別是黃德深紅皮葉、巴麻72-3葉的4.38倍、8.75倍。結(jié)果表明,3種黃麻葉均含有黃酮醇類物質(zhì),且各組分的含量差異顯著。

        圖1 黃麻葉水解液中黃酮醇類組分色譜圖Fig.1 Chromatograms of flavonols in hydrolysates of jute leaves

        表4 黃麻葉水解液中黃酮醇類組分含量測定Table 4 Determination of flavonols in hydrolysate of jute leaves

        2.3 酪氨酸酶活性抑制

        由圖2可知,黃德深紅皮葉、巴麻72-3葉、中黃麻4號葉水解液黃酮對酪氨酸酶活性抑制率均隨濃度的增加而增大,黃德深紅皮葉抑制率最高。當(dāng)水解液黃酮濃度為10 mg/mL時,黃德深紅皮葉、巴麻72-3葉、中黃麻4號葉的酪氨酸酶活性抑制率分別達(dá)到90.37%、86.29%、82.38%,而CK(甲醇-鹽酸溶液)雖然對其也存在一定程度的抑制作用,但相比黃麻葉的抑制率還相當(dāng)?shù)汀?/p>

        由表5可看出,黃德深紅皮葉、巴麻72-3葉、中黃麻4號葉水解液黃酮對酪氨酸酶活性抑制的IC50值分別為4.24、5.04、5.67 mg/mL,即黃德深紅皮葉活性抑制能力最強(qiáng)。結(jié)果表明,3種黃麻葉水解產(chǎn)物黃酮化合物(包括黃酮醇類物質(zhì))具有明顯地抑制酪氨酸酶活性作用,但與Vc(黑色素抑制劑)相比,其抑制能力均還較弱。

        表5 黃麻葉水解液中黃酮抑制酪氨酸酶活性IC50值比較Table 5 Comparison of IC50 values of tyrosinase-inhibiting activities of flavones in hydrolysate of jute leaves

        3 結(jié)論與討論

        本研究是對3個不同品種黃麻葉(苗后天數(shù)均為28 d)利用甲醇-鹽酸溶液在85℃加熱、回流1.5 h條件下進(jìn)行水解,采用Al(NO3)3顯色法測得黃德深紅皮葉、巴麻72-3葉、中黃麻4號葉的水解液中總黃酮含量分別為92.76、35.51、37.36 mg/g;HPLC法檢測得到黃德深紅皮葉、巴麻72-3葉、中黃麻4號葉的水解液中均含有異槲皮素、楊梅素、槲皮素、山奈酚及異鼠李素等黃酮醇類組分,其中黃德深紅皮葉、巴麻72-3葉水解液中以山奈酚為主要黃酮醇類成分,含量分別為1.38、1.01 mg/g;中黃麻4號葉的水解液中則是以槲皮素(2.45 mg/g)為主要黃酮醇類成分。結(jié)果表明,3種黃麻葉均含有較豐富的黃酮類化合物。

        作為黃酮類化合物,許多研究均表明其具有較強(qiáng)的抑制酪氨酸酶活性能力,如:李娜[13]研究了紅花黃酮類化合物(醇提-微波法提?。舛葹? mg/mL時,對酪氨酸酶抑制率為63.5%;潘維等[14]分析了槐豆黃酮提取物(堿提-微波法提?。舛葹?.46 g/L時,對酪氨酸酶抑制率為77.40%;寧亞萍等[15]報道了山杏花總黃酮(乙醇-閃式法提取)IC50為2.24~3.08 mg/mL。本研究(水解法提取)結(jié)果顯示,3種黃麻葉對酪氨酸酶活性抑制能力均隨水解液黃酮濃度增加而增大,當(dāng)水解液黃酮濃度為10 mg/mL時,黃德深紅皮葉、巴麻72-3葉、中黃麻4號葉抑制率分別達(dá)到90.37%、86.29%、82.38%,且 IC50值相應(yīng)分別為 4.24、5.04、5.67 mg/mL。與文獻(xiàn)[13-15]相比,當(dāng)黃德深紅皮葉水解液黃酮濃度為8.46 g/L時,其對酪氨酸酶活性抑制率(可達(dá)81.23%)高于槐豆黃酮提取物,低于紅花和槐豆黃酮提取物,而巴麻72-3葉、中黃麻4號葉其抑制率均稍低于上述文獻(xiàn)報道。通過比較發(fā)現(xiàn),3種黃麻葉水解液中含有的黃酮類化合物均對酪氨酸酶活性存在一定的抑制作用。因此,黃麻葉具有廣闊的深加工開發(fā)前景。

        在本研究條件下,水解液中總黃酮含量大小排序為黃德深紅皮葉>中黃麻4號葉>巴麻72-3葉,而酪氨酸酶活性抑制強(qiáng)弱、黃酮醇類組分中的山奈酚及異鼠李素含量多少排序均為黃德深紅皮葉>巴麻72-3葉>中黃麻4號葉,由此表明,總黃酮含量高的黃麻葉并不一定對酪氨酸酶的抑制作用強(qiáng),并且這一結(jié)果提示酪氨酸酶活性抑制能力可能與水解產(chǎn)物中黃酮醇類某些組分含量多少有關(guān),從中推斷,黃麻葉中的黃酮醇類組分中的山奈酚也許是酪氨酸酶活性抑制的主要成分之一,這一結(jié)論與文獻(xiàn)[16-17]報道相吻合。然而,從黃酮醇類組分色譜圖分析中發(fā)現(xiàn),不同品種黃麻葉水解產(chǎn)物中出現(xiàn)2種未知組分,其峰面積(含量)大于已知5種組分,至于這2種未知組分是否屬于黃麻葉中的黃酮醇類組分或者與酪氨酸酶抑制能力存在著直接關(guān)聯(lián)抑或協(xié)同作用,還有待于進(jìn)一步探討。

        猜你喜歡
        黃酮
        不同桑品種黃酮含量測定
        桑黃黃酮的研究進(jìn)展
        一測多評法同時測定腦心清片中6種黃酮
        中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:57:00
        HPLC法同時測定固本補(bǔ)腎口服液中3種黃酮
        中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:40
        MIPs-HPLC法同時測定覆盆子中4種黃酮
        中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:13
        DAD-HPLC法同時測定龍須藤總黃酮中5種多甲氧基黃酮
        中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:50
        正交法優(yōu)化王不留行中王不留行黃酮苷的超聲提取工藝
        黃酮抗癌作用研究進(jìn)展
        瓜馥木中一種黃酮的NMR表征
        UV法和HPLC法測定甘草總黃酮混懸液中總黃酮和查爾酮含量
        精品久久综合一区二区| 久久伊人网久久伊人网| 色综合久久精品中文字幕| 不卡免费在线亚洲av| 成人一区二区人妻少妇| 亚洲av无码无线在线观看| 国产农村熟妇videos| 午夜一区欧美二区高清三区| 国产人成精品综合欧美成人| 91孕妇精品一区二区三区| 日韩av中文字幕少妇精品| 尤物国产一区二区三区在线观看| 手机看片久久第一人妻| 午夜精品射精入后重之免费观看| 人妻丝袜av中文系列先锋影音| 亚洲精品视频久久| 中文字幕乱码人妻无码久久久1 | 99热久久只有这里是精品| 青青草手机在线免费观看视频| 亚洲精品电影院| 亚洲亚洲人成综合网络| 五月婷婷激情综合| 日本一区二区免费看片| 久久99国产精品久久| 88国产精品视频一区二区三区| 国产哟交泬泬视频在线播放| 亚洲无av码一区二区三区| 亚洲中文字幕在线综合| 又大又粗又爽的少妇免费视频| 四虎欧美国产精品| 亚洲午夜久久久精品国产| 日本中文字幕有码在线播放| 国语自产视频在线| 大肉大捧一进一出视频 | 亚洲国产日韩欧美高清片a| 国产一区二区三区不卡视频| 欧美熟妇另类久久久久久多毛| 色婷婷综合久久久久中文| 精品国产AⅤ一区二区三区V免费| 一区二区三区手机看片日本韩国| 极品av一区二区三区|