陳 巖，袁 晨，劉 寧，紀(jì)鳳蘭，丁 濤，溫富春，徐惠波

(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院·吉林 長(zhǎng)春 130021)

血瘀證是中醫(yī)臨床常見證候，與冠心病、心絞痛，動(dòng)脈粥樣硬化等多種疾病具有相關(guān)性[1-3]，中醫(yī)的治療原則多為活血化瘀[4]。XS組合物是由西洋參莖葉與山楂葉有效部位經(jīng)科學(xué)配比組合而成，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、行氣散瘀之功，可用于治療胸痹(氣陰兩虛證冠心病)。本研究通過觀察XS組合物對(duì)以皮下注射腎上腺素及冰浴刺激致大鼠急性血瘀模型血液流變學(xué)指標(biāo)變化和正常大鼠血小板聚集率變化的影響，證實(shí)其活血化瘀作用，為XS組合物臨床應(yīng)用的有效性和新藥開發(fā)提供理論研究依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠，雄性，5～6周齡，SPF級(jí)，體質(zhì)量(200±10)g，購(gòu)自長(zhǎng)春億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證：SCXK(吉) 2011-004。SD大鼠，5～6周齡，SPF級(jí)，雄性，體質(zhì)量(212±12)g，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司。許可證號(hào)：SCXK(京)2009-0004。動(dòng)物飼養(yǎng)在本單位屏障環(huán)境動(dòng)物觀察室，溫度21～25 ℃，相對(duì)濕度40%～60%。

1.2 藥物與試劑 XS組合物(西洋參莖葉提取物∶山楂葉提取物=1∶1.1)：吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院新藥研究與開發(fā)中心劑型室提供，批號(hào)：20160101；益心酮分散片，海南天煌制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：1608211。鹽酸腎上腺素注射液(Adr)：天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)：1003121；二水合檸檬酸三鈉(檸檬酸鈉、又稱枸櫞酸鈉)：南京化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：050580052；水合氯醛：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20100709；ADP：大連美侖生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：091M70002V；肝素鈉：北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)：151809086A。

1.3 主要儀器 BT255型十萬分之一電子天平：北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；JJ2000型電子天平：常熟市雙杰測(cè)試儀器廠；FASCO-3010全自動(dòng)血流變快測(cè)儀：重慶大學(xué)為多生物工程研究所；DT5-3型低速臺(tái)式自動(dòng)平衡離心機(jī)：北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司；LBY-NJ血液凝聚儀：北京普利生精密儀器研究中心。

2 方法

2.1 急性血瘀模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的測(cè)定 取Wistar大鼠60只，適應(yīng)飼養(yǎng)3 d后按體質(zhì)量隨機(jī)分為6 組：正常對(duì)照組10只，血瘀模型組10只，陽(yáng)性對(duì)照藥益心酮片(96 mg/kg)組10只，XS組合物(58.8、29.4、14.7 mg/kg) 高、中、低3個(gè)劑量給藥組每組10只。每天給藥1次，灌胃劑量為10 mL/kg，實(shí)驗(yàn)過程中正常對(duì)照組及血瘀模型組給予等量的蒸餾水，各給藥組均給予供試藥液，連續(xù)給藥7 d。給藥第7 d，除正常對(duì)照組大鼠皮下注射等體積生理鹽水外，其余各組大鼠皮下注射Adr0.08 mL/100 g體質(zhì)量，2 h后將大鼠置于1.5 ℃冰水中游泳4 min，撈出后2 h再注射Adr0.08 mL/100 g體質(zhì)量1 次，制備大鼠急性血瘀證模型[5]。大鼠第2次注射腎上腺素后，將大鼠禁食不禁水12 h，次日，大鼠灌胃給藥1 h后，大鼠腹腔注射水合氯醛(300 mg/kg)將其麻醉，進(jìn)行大鼠腹主動(dòng)脈取血5 mL，緩慢注入肝素抗凝管中(血液與抗凝劑體積比為9∶1)混勻(每組前10只動(dòng)物取血)。將肝素鈉抗凝管中的血液先取出適量測(cè)定血沉和紅細(xì)胞壓積。剩余血液用FASCO-3010全自動(dòng)血流變快測(cè)儀測(cè)定大鼠全血黏度的高切(200/s)、中切(30/s)及低切(3/s)值；然后將全血3 000 r/min離心10 min，取出貧血小板血漿測(cè)定血漿黏度。

2.2 正常大鼠血小板聚集率的測(cè)定 取SD大鼠55 只隨機(jī)分為5 組，空白對(duì)照組，益心酮分散片(96 mg/kg)給藥組，XS組合物(58.8、29.4、14.7 mg/kg)高、中、低3 個(gè)劑量給藥組，每組11 只，各組大鼠每天灌胃給藥1次，連續(xù)7 d，空白對(duì)照組給予同體積(10 mL/kg)蒸餾水。末次灌胃給藥1 h后，于腹腔注射水合氯醛300 mg/kg麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈采血4.5 mL，緩慢注入裝有3.8%枸櫞酸鈉溶液0.5 mL的試管中(血液與抗凝劑體積比為9∶1)，混勻，離心，1 000 r/min，分離PRP血小板血漿和3 000 r/min，分離PPP血小板血漿，按文獻(xiàn)[6]方法用血液凝聚儀測(cè)定ADP(每份樣本加ADP7μL)誘導(dǎo)血小板1、3、5 min聚集率及最大聚集率。

3 結(jié)果

3.1 XS組合物對(duì)急性血瘀模型大鼠血液流變學(xué)的影響 見表1。

表1 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的比較

3.2 XS組合物對(duì)大鼠血小板聚集率的影響 見表2。

表2 各組大鼠血小板聚集率比較

4 討論

急性血瘀證是中醫(yī)臨床中常見的基本證候之一，是心、腦血管疾病發(fā)生、發(fā)展的病理生理基礎(chǔ)，而血瘀證的重要診斷指標(biāo)有血液流變性、血小板聚集功能的改變等[7]。冠心病氣虛血瘀證一直是中醫(yī)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為氣虛血瘀是冠心病的主要病機(jī)，氣虛則無力推動(dòng)血液運(yùn)行，血液凝滯成瘀，阻于心脈，則會(huì)產(chǎn)生心前區(qū)憋悶疼痛[8]。XS組合物是由西洋參葉提取物與山楂葉提取物根據(jù)均勻設(shè)計(jì)原理經(jīng)計(jì)算機(jī)計(jì)算配比比例后組合而成[9]，方中選用西洋參莖葉提取物，取其補(bǔ)心氣、益脾氣之功；選用山楂葉提取物取其行氣散瘀之力，兩藥合用可使心血得以滋養(yǎng)、脾氣得以健運(yùn)、肝氣得以疏泄，共奏補(bǔ)氣養(yǎng)陰、行氣散瘀之功。氣行則血行，心脈通暢，心血充足，機(jī)體功能得以恢復(fù)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明西洋參有抗氧化、抗心肌缺血、增加心肌收縮力等作用[10-12]；山楂有活血化瘀、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量、保護(hù)心肌缺氧的功能[13-17]。為此，西洋參葉與山楂葉有效部位組合，可用于治療胸痹(氣陰兩虛證冠心病)。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘接慩S組合物預(yù)防治療冠心病心絞痛的機(jī)制，并針對(duì)其補(bǔ)氣養(yǎng)陰、行氣散瘀的功能選用了血瘀模型。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示該藥可明顯改善急性血瘀大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)，明顯降低全血黏度，降低紅細(xì)胞壓積和血沉值，還能降低正常大鼠的血小板1、3、5 min的聚集率及最大聚集率。提示XS組合物能改善血瘀大鼠異常的血液流變學(xué)指標(biāo)，抑制血小板聚集；具有活血化瘀作用，可用于防治胸痹，還有可能通過該作用防治其他心、腦血管疾病。