韓曉云

（大連市友誼醫(yī)院，遼寧 大連 116011）

隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，診斷、檢測技術(shù)不斷更新，但微生物測試的細(xì)菌培養(yǎng)研究中，盡管已有可以自動細(xì)菌培養(yǎng)的儀器，但培養(yǎng)仍需要較長時間，并且操作不當(dāng)可能影響細(xì)菌培養(yǎng)的結(jié)果，不能讓患者得到快速且準(zhǔn)確地報告[1-2]。細(xì)菌培養(yǎng)耗時長以及結(jié)果的準(zhǔn)確性低仍是微生物檢測中的兩個主要問題[3]。然而，在細(xì)菌培養(yǎng)之前注意直接涂片和染色顯微鏡檢查，提供快速診斷信息，評價標(biāo)本質(zhì)量，對加強質(zhì)量控制具有重要意義，并指導(dǎo)藥物的使用和重獲某些重癥患者的生命，有效地提高細(xì)菌培養(yǎng)的速度和準(zhǔn)確性[4-5]。現(xiàn)對細(xì)菌培養(yǎng)與涂片鏡檢進行研究比較，對比兩種方法的準(zhǔn)確性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以我院住院部和門診部送檢的300例樣品為研究標(biāo)本，分別進行細(xì)菌培養(yǎng)和涂片鏡檢，對比兩種診斷方法的涂片鏡檢合格率與細(xì)菌培養(yǎng)的檢出率。

1.2 方法 涂片鏡檢，即將標(biāo)本進行直接涂片和離心沉淀后涂片，隨后分別進行革蘭染色和抗酸染色，鏡下觀察，若發(fā)現(xiàn)存在涂片陽性則報告其形態(tài)，若未找到細(xì)菌或無法辨認(rèn)則報告涂片陰性。

細(xì)菌培養(yǎng)，根據(jù)涂片結(jié)果為標(biāo)本選擇不同的培養(yǎng)基，孵育18～24 h觀察結(jié)果，48 h無細(xì)菌生長則報告無菌生長。

1.3 觀察指標(biāo) 標(biāo)本直接涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)分為三級：A級：低倍顯微鏡的白細(xì)胞不低于25，鱗狀上皮細(xì)胞不超過10；B級：低放大倍數(shù)的白細(xì)胞不低于25，鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)在10～25，并且細(xì)菌不少于3種；C級：鱗狀上皮細(xì)胞不小于25，是不合格的標(biāo)本。A、B級適合細(xì)菌培養(yǎng)，C級不適合細(xì)菌培養(yǎng)。

細(xì)菌培養(yǎng)后，直接涂抹革蘭染色鏡檢，觀察到針對主要病原體和致病細(xì)菌或顯性生長細(xì)菌的菌落特征。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)本直接涂片鏡檢的合格率 根據(jù)標(biāo)本涂片鏡檢的三級標(biāo)準(zhǔn)，得到研究結(jié)果如下：在300例標(biāo)本中，涂片鏡檢合格的標(biāo)本259例，合格率為86.33%，其中A類標(biāo)本132例，占總數(shù)的44.00%，B類標(biāo)本127例，占總數(shù)42.33%，涂片鏡檢不合格標(biāo)本C類41例，占總數(shù)的13.67%。

2.2 標(biāo)本涂片鏡檢ABC三類與細(xì)菌的檢出率的關(guān)系 300例標(biāo)本中有205例標(biāo)本檢出致病菌或優(yōu)勢生長菌，陽性檢出率為68.33%，涂片鏡檢合格標(biāo)本有259例，涂片鏡檢合格的標(biāo)本檢出細(xì)菌數(shù)為192例，檢出率為74.13%，其中A級檢出細(xì)菌數(shù)107例，檢出率為55.72%；B級檢出細(xì)菌數(shù)85例，檢出率為44.27%。涂片不合格標(biāo)本有41例，檢出細(xì)菌13例，檢出率為31.70%（13/41）。A級細(xì)菌檢出率明顯高于B級、C級，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（A與B相比較，χ2=6.740，P=0.007；A與C相比較，χ2=35.857，P＜0.001）；B級細(xì)菌檢出率明顯高于C級，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=15.820，P＜0.001）。

2.3 合格標(biāo)本涂片鏡檢結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)的符合率 259例合格標(biāo)本共檢出致病菌214例，涂片鏡檢合格標(biāo)本涂片與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果總符合率為82.62%。在214株陽性標(biāo)本中檢出革蘭陰性菌135例，檢出率為63.08%；革蘭陽性菌43例，檢出率為20.09%，檢出的革蘭陰性菌主要為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌及流感嗜血桿菌；革蘭陽性菌主要為金黃色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肺炎鏈球菌；真菌36例，檢出率為16.82%，包括白色念珠菌及熱帶念珠菌。涂片陰性而培養(yǎng)出致病菌11例，檢出率為26.82%；鏈球菌屬3例，檢出率為27.27%；腸桿菌屬細(xì)菌4例，檢出率為36.36%；白念珠菌3例，檢出率為27.27%；非發(fā)酵菌1例，檢出率為9.09%。涂片檢出細(xì)菌而細(xì)菌培養(yǎng)未培養(yǎng)出致病菌的45例，占比為17.38%，詳細(xì)結(jié)果見表1。

表1 合格標(biāo)本涂片鏡檢結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)的符合情況

3 討論

涂片鏡檢和細(xì)菌培養(yǎng)是細(xì)菌學(xué)檢測的基本方法[6]。涂片顯微鏡操作簡單，細(xì)菌達到一定數(shù)量時，可以快速檢測樣本[7]。具有初步診斷但是源自正常菌群的位點的標(biāo)本具有有限的臨床意義。細(xì)菌培養(yǎng)是最可靠的細(xì)菌學(xué)檢測方法，但細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)需要很長時間，培養(yǎng)過程容易產(chǎn)生污染，影響結(jié)果，實際工作中很難滿足臨床需求[8-9]。例如，腦脊液涂片，取腦脊液涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)致病菌，其最初可以診斷為由腦膜炎奈瑟球菌引起的腦膜炎[10]。直接涂抹深層穿刺液以檢測革蘭陽性球菌，陰性桿菌，并在第一時間向診所提供此信息。最初在臨床中使用抗生素是有幫助的。實驗室需要進行細(xì)菌培養(yǎng)的分級報告（涂片后，藥物敏感后和鑒定后的順序報告），并強調(diào)直接涂片的重要性[11]。同時，細(xì)菌培養(yǎng)清楚地表明革蘭染色是細(xì)菌鑒定的前提。同時涂片觀察還可以糾正儀器報告的錯誤，例如細(xì)菌和酵母樣細(xì)菌，這些細(xì)菌很容易與形態(tài)學(xué)區(qū)分開來，并且可以完全避免誤報。耐酸染色鑒定出抗酸桿菌，改良金色游泳染色是諾卡氏菌和紅球菌的鑒定試驗之一，因此可以看出涂片染色的重要性[12-13]。涂片顯微鏡和細(xì)菌培養(yǎng)很重要。例如，涂片可以快速檢測到標(biāo)本中的一定數(shù)量的死細(xì)菌和活菌，這不僅對非污染標(biāo)本具有重要意義。此外，評估樣本質(zhì)量和細(xì)菌分布在同樣十分重要[14]。細(xì)菌培養(yǎng)是黃金標(biāo)準(zhǔn)，陽性率也很高。臨床重點是細(xì)菌培養(yǎng)，因此實驗室工作人員應(yīng)主動加強涂片的顯微鏡檢查。涂片顯微鏡對細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果具有重要的互補作用。另外，由于病原體的多樣性，生長特征是復(fù)雜的。特別是用于檢測一些生長緩慢的菌落，非常小或混合的細(xì)菌感染病原體[15]。

但二者同時進行診斷時，仍存在一定概率的誤差。細(xì)菌培養(yǎng)前涂片觀察到存在某細(xì)菌，但培養(yǎng)后其結(jié)果與培養(yǎng)前不一致，應(yīng)及時從如下幾方面查找原因：①標(biāo)本采集、運送等技術(shù)操作過程中存在不正確操作，細(xì)菌未能及時接種培養(yǎng)，造成細(xì)菌細(xì)胞死亡，產(chǎn)生假陰性結(jié)果，或外來細(xì)菌混入，產(chǎn)生假陽性結(jié)果[16-17]。②標(biāo)本來自于已經(jīng)接受抗菌藥物治療的患者，標(biāo)本中存在殘余的抗生素抑制了細(xì)菌的生長，產(chǎn)生了假陰性結(jié)果。③不合適的培養(yǎng)基所提供的培養(yǎng)條件，如培養(yǎng)基成分比例、pH值、培養(yǎng)溫度、氣體環(huán)境等不能達到要求等，不利于細(xì)菌的繁殖，甚至使細(xì)菌發(fā)生形態(tài)、染色性質(zhì)的變異。④實驗室內(nèi)消毒不徹底，紫外燈照射時間過短，或操作不當(dāng)，用過的培養(yǎng)物和培養(yǎng)基不及時處理，操作者無菌操作觀念淡薄，可造成實驗室內(nèi)污染，使用培養(yǎng)結(jié)果與涂片結(jié)果不一致[18-19]。

文獻研究表明，涂片陽性和陰性細(xì)菌培養(yǎng)物中的一株G+桿菌培養(yǎng)48 h。在長時間培養(yǎng)至72 h后，G－細(xì)菌快速生長并且細(xì)胞量很大。抑制了G+球菌的生長。在不同培養(yǎng)基上生長或檢測相同屬是導(dǎo)致錯過診斷培養(yǎng)的因素之一[20]。本研究結(jié)果顯示，本研究結(jié)果表明，300例標(biāo)本中，涂片鏡檢合格的標(biāo)本259例，合格率為86.33%，其中A類標(biāo)本132例，占總數(shù)的44.00%，B類標(biāo)本127例，占總數(shù)42.33%，涂片鏡檢不合格標(biāo)本C類41例，占總數(shù)的13.67%。300例標(biāo)本中有205例標(biāo)本檢出致病菌或優(yōu)勢生長菌，陽性檢出率為68.33%，涂片鏡檢合格標(biāo)本有259例，涂片鏡檢合格的標(biāo)本檢出細(xì)菌數(shù)為192例，檢出率為74.13%，涂片不合格標(biāo)本有41例，檢出細(xì)菌13例，檢出率為31.70%（13/41）。259例合格標(biāo)本共檢出致病菌214例，涂片鏡檢合格標(biāo)本涂片與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果總符合率為82.62%。在214株陽性標(biāo)本中檢出革蘭陰性菌135例，檢出率為63.08%；革蘭陽性菌43例，檢出率為20.09%，檢出的革蘭陰性菌主要為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌及流感嗜血桿菌；革蘭陽性菌主要為金黃色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肺炎鏈球菌；真菌36例，檢出率為16.82%，包括白色念珠菌及熱帶念珠菌。涂片陰性而培養(yǎng)出致病菌11例，檢出率為26.82%；鏈球菌屬3例，檢出率為27.27%；腸桿菌屬細(xì)菌4例，檢出率為36.36%；白念珠菌3例，檢出率為27.27%；非發(fā)酵菌1例，檢出率為9.09%。涂片檢出細(xì)菌而細(xì)菌培養(yǎng)未培養(yǎng)出致病菌的45例，占比為17.38%。

總之，涂片鏡檢可以提前做出預(yù)測報告，作為診斷的初步依據(jù)，指導(dǎo)臨床合理用藥，兩種診斷方法相互補充，可使臨床細(xì)菌學(xué)檢驗縮短報告時間，增加可靠性，為臨床正確分析細(xì)菌學(xué)檢驗結(jié)果提供參考。