余照斌 葛晶晶 張廣清

[摘要]目的研究化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CIA）在隱匿性乙型肝炎病毒（HBV）篩查中的價(jià)值。方法選取2019年5—12月于清遠(yuǎn)市婦幼保健院進(jìn)行 HBV 篩查的患者60例，所有患者均采用 CIA 進(jìn)行 HBV 五項(xiàng)檢測(cè)進(jìn)行初篩，將初篩中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）（-）、乙肝核心抗體（HBcAb）（+）樣本進(jìn)行復(fù)篩，并采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（FQ-PCR）法檢測(cè)各樣本中 HBV DNA 病毒載量，統(tǒng)計(jì) CIA 檢測(cè)情況以及 HBsAg（-）、HBcAb（+）樣本復(fù)篩及 HBV DNA 檢測(cè)情況。結(jié)果60例 HBV 樣本 CIA 結(jié)果檢出 HBsAg（+）15例，陽(yáng)性率為25.00%， HBsAg（-）、HBcAb（+）樣本39例。以 HBV DNA 檢測(cè)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)， ELISA 檢測(cè)靈敏度為46.67%，特異度為66.67%; CIA 檢測(cè)靈敏度為86.67%，特異度為91.67%;與 ELISA 比較， CIA 檢查靈敏度、特異度更高（χ2=5.400、4.547，P=0.020、0.033）。結(jié)論 CIA 檢測(cè) HBsAg 具有較高的靈敏度，但當(dāng)樣本存在 HBsAg（-）、HBcAb（+）的情況下，需進(jìn)行復(fù)篩和 FQ-PCR HBV DNA 檢測(cè)，以免造成漏診的情況。

[關(guān)鍵詞]隱匿性乙型肝炎病毒;化學(xué)發(fā)光免疫分析法;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);病毒載量;靈敏度

[中圖分類號(hào)] R512.6+2? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A?? [文章編號(hào)]2095-0616（2022）07-0146-04

Application? value? of chemiluminescence? immunoassay? in screening occult hepatitis B virus

YU? Zhaobin??? GE? Jingjing??? ZHANG? Guangqing

Maternal and Child Health Hospital of Qingyuan City， Guangdong， Qingyuan 511500， China

[Abstract] Objective To study the value of chemiluminescence immunoassay （CIA） in screening occult hepatitis B virus （HBV）. Methods A total of 60 patients who underwent HBV screening at Maternal and Child Health Hospital of Qingyuan City from May to December 2019 were selected as study subjects. All patients were initially screened for the five HBV markers by CIA， and samples of hepatitis B surface antigen （HBsAg）（-） and hepatitis B core antibody （HBcAb）（+） undergoing the initial screening were re-screened. The real- time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （FQ-PCR） was used to detect the viral load of HBV DNA in each sample， and the CIA results and the re-screening and HBV DNA detection results of HBsAg （-） and HBcAb （+） samples were counted. Results In the CIA results of 60 HBV samples， 15 cases of HBsAg （+） samples were detected， with a positive rate of 25.00%， and 39 cases of HBsAg （-） and HBcAb （+） samples were detected. Using HBV DNA detection results as the gold standard， the sensitivity was 46.67% and the specificity was 66.67% for the detection by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）， and the sensitivity was 86.67% and the specificity was 91.67% for the detection by CIA. Compared with ELISA， CIA has higher sensitivity and specificity（χ2=5.400，4.547;P=0.020，0.033）. Conclusion CIA has a high sensitivity for detecting HBsAg， but when HBsAg （-） and HBcAb （+） are present in the sample， re-screening and HBV DNA detection by FQ-PCR are needed to avoid missed diagnosis.

[Key words] Occult hepatitis B virus; Chemiluminescence immunoassay; Enzyme-linked immunosorbent assay; Viral load; Sensitivity

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus， HBV）可以經(jīng)血液、母嬰以及生殖細(xì)胞等方式進(jìn)行傳播，是引起乙型肝炎的重要病原體[1]。乙肝表面抗原（HBsAg）是檢測(cè) HBV 感染最常用的指標(biāo)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是其主要的檢測(cè)方法，具有成本低、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)勢(shì)，但該方法靈敏度偏低，干擾因素較多，因此臨床應(yīng)用存在一定的局限性。臨床上，將 HBsAg（-）但 HBV DNA（+）的現(xiàn)象稱為隱匿性 HBV，由于此種現(xiàn)象的患者也存在傳播的可能性，可對(duì)機(jī)體造成嚴(yán)重的危害，因此僅以 HBsAg（+）作為篩查標(biāo)準(zhǔn)可能導(dǎo)致漏診[2]?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法（CIA）是目前檢測(cè) HBV 感染的常用方法，其具有靈敏度高的優(yōu)勢(shì)，且屬于全自動(dòng)操作[3-4]。本研究通過(guò)分析 CIA 在隱匿性 HBV 篩查中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5—12月于清遠(yuǎn)市婦幼保健院進(jìn)行 HBV 篩查的患者60例，年齡18～69歲，平均（38.88±4.79）歲，男43例，女17例。本研究相關(guān)操作符合倫理，經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，參與研究者均知情且簽署同意書(shū)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡不小于18歲;②既往無(wú)肝腫瘤放化療和手術(shù)史患者;③對(duì)體格檢查、血液采樣以及本研究其他相關(guān)操作知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他類型（丙型、丁型）肝炎病毒患者;②合并人類免疫缺陷病毒感染患者;③存在免疫功能缺陷障礙患者。HBV 感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]：由乙型肝炎病毒持續(xù)感染引發(fā)，可以分為乙型肝炎病毒 e 抗原（HBeAg）（+）慢性乙型肝炎和HBeAg（-）慢性乙型肝炎;HBeAg（+）慢性乙型肝炎： HBV DNA 定量水平>2×107 IU/ml，血清HBsAg>1×104 IU/ml，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）持續(xù)或反復(fù)異?；蚋谓M織學(xué)檢查有明顯炎癥壞死和/或纖維化（≥ G2/S2）;HBeAg（-）慢性乙型肝炎：血清 HBsAg（+）、HBeAg持續(xù)（-），多同時(shí)伴有抗-HBe（+）， HBV DNA 定量水平≥2×103 IU/ml， ALT 持續(xù)或反復(fù)異常，或肝組織學(xué)有明顯炎癥壞死和/或纖維化（≥ G2/S2）。隱匿性 HBV 感染診斷標(biāo)準(zhǔn)：血清 HBsAg（-）、HBcAb（+），且血清和/或肝組織中 HBV DNA（+）。

1.2 方法

所有患者均采集靜脈血2管，每管各5 ml，并分裝在帶分離膠真空采血管中送檢，以3000 rpm 的速率離心8 min 獲取血清。1管采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CIA）配套試劑盒由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供，進(jìn)行 HBV 五項(xiàng)檢測(cè)，分別為 HBsAg、乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb）、HBeAg、乙型肝炎病毒 e 抗體（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）。初篩出39例 HBsAg（-）、HBcAb（+）樣本，判定標(biāo)準(zhǔn)：信號(hào)值比臨界信號(hào)值（S/Co）≥1為有反應(yīng)性（+）， S/Co<1為無(wú)反應(yīng)性（-）。針對(duì)上述 HBsAg（-）、HBcAb（+）樣本進(jìn)行復(fù)篩，分別采用 ELISA（試劑盒購(gòu)自上海榮盛生物技術(shù)有限公司）、CIA 進(jìn)行檢測(cè)。換用另1管血清進(jìn)行是實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（FQ-PCR）法 HBV DNA病毒載量檢測(cè)，操作按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，試劑盒購(gòu)自湖南圣湘生物科技有限公司。以 HBV DNA 病毒載量>20 IU/ml 記為（+）。

1.3 觀察指標(biāo)

所有患者均采用 CIA 進(jìn)行 HBV 五項(xiàng)檢測(cè)進(jìn)行初篩，將初篩中 HBsAg（-）、HBcAb（+）樣本進(jìn)行ELISA、CIA 復(fù)篩，并采用 FQ-PCR 法檢測(cè)各樣本中 HBV DNA 病毒載量，統(tǒng)計(jì) CIA 檢測(cè)情況、HBsAg （-）、HBcAb（+）樣本 ELISA、CIA 復(fù)篩及 HBV DNA 檢測(cè)情況，并以 HBV DNA 檢測(cè)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算 ELISA、CIA 對(duì)隱匿性 HBV 感染的診斷價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x ± s）表示，采用 t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用[n （%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)， P <0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 60份HBV樣本CIA檢測(cè)結(jié)果

以 HBsAg（+）和（-）為界，將60份 HBV 樣本 CIA 結(jié)果分為10種模式，檢出 HBsAg（+）15例，陽(yáng)性率為25.00%。見(jiàn)表1。

2.2? HBsAg（-）、HBcAb（+）樣本復(fù)篩及HBV DNA檢測(cè)結(jié)果

將 HBsAg（-）、HBcAb（+）樣本39例分別進(jìn)行 CIA 和 ELISA 復(fù)篩，ELISA 篩查出HBcAb強(qiáng)（+）樣本7例，陽(yáng)性率為17.95%; CIA 篩查出HBcAb強(qiáng)（+）樣本13例，陽(yáng)性率為33.33%; HBV DNA 檢測(cè)結(jié)果顯示病毒載量>20 IU/ml 樣本15例， HBV? DNA 陽(yáng)性率為38.46%，以 HBV DNA 檢測(cè)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)， ELISA 檢測(cè)靈敏度為46.67%，特異度為66.67%; CIA 檢測(cè)靈敏度為86.67%，特異度為91.67%;與 ELISA 比較， CIA 檢查靈敏度、特異度明顯提升（χ2=5.400、4.547， P=0.020、0.033）。見(jiàn)表2。

HBV DNA 檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性樣本分為5種模式，與模式2、3比較，模式4、5 HBV DNA 陽(yáng)性率有所升高。見(jiàn)表3。

3討論

HBV 感染是一個(gè)全球性的健康問(wèn)題，HBsAg （+）是目前大多數(shù)國(guó)家篩查該感染的唯一標(biāo)準(zhǔn)，但在20世紀(jì)70年代，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)， HBsAg（-）也有可能引發(fā) HBV 感染，即引出了隱匿性 HBV 感染的概念[6]。ELISA 是 HBV 感染經(jīng)典的檢測(cè)方法，但該方法需要重復(fù)多次的加樣和洗板操作，容易摻雜較多的人為操作因素，從而對(duì)結(jié)果造成一定的影響，導(dǎo)致漏診[7-8]。且 ELISA 檢測(cè)的靈敏度也較差，加之隱匿性 HBV 感染患者可能存在基因突變的現(xiàn)象[9-10]，因此尋找一種對(duì)結(jié)果影響小、靈敏度更高的方法以降低漏診或者隱匿性 HBV 的情況出現(xiàn)很有必要。

CIA 是一種全自動(dòng)化操作的 HBV 感染檢測(cè)方法，其可以避免因人為操作而對(duì)結(jié)果產(chǎn)生的誤差，從而相較于 ELISA 具有更高的準(zhǔn)確度。同時(shí)，CIA 是檢測(cè)抗原和抗體免疫結(jié)合反應(yīng)的一種 HBV 檢測(cè)方法，其可以對(duì)微量的抗原和抗體進(jìn)行免疫標(biāo)記和定量檢測(cè)，從而可以極大地提高檢測(cè)的靈敏度[11-12]。本研究中，在對(duì)樣本進(jìn)行了 CIA 檢測(cè)之后，同時(shí)對(duì) HBsAg（-）、HBcAb（+）樣本做了進(jìn)一步的篩查，以檢驗(yàn)是否存在漏診隱匿性 HBV 的情況。HBcAb是 HBV 感染患者體內(nèi)比較穩(wěn)定的抗體，HBcAb（+）的出現(xiàn)說(shuō)明患者可能處在乙肝的慢性感染期或者恢復(fù)期，此時(shí) HBV 病毒復(fù)制水平也較低，導(dǎo)致 HBsAg 濃度也較低，可能未達(dá)到試劑可測(cè)水平，從而產(chǎn)生病毒隱匿性，出現(xiàn)漏診的情況。本研究結(jié)果顯示，CIA 檢測(cè)陽(yáng)性率為25.00%，高于普通水平，分析原因可能與樣本選擇的差異以及樣本量較小存在關(guān)聯(lián)。而復(fù)篩及 HBV DNA 檢測(cè)結(jié)果顯示，HBsAb（+）HBeAg（+）HBcAb（+）模式 HBV? DNA 陽(yáng)性率最高，且整體陽(yáng)性率也偏高，說(shuō)明 CIA 檢測(cè)存在漏診的現(xiàn)象。劉曉紅等[10]采用 HBV DNA 檢測(cè)復(fù)篩 CIA 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)的 HBsAg（-）、HBcAb（+）樣本也顯示，在該類樣本中存在隱匿性 HBV 感染的可能，且發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)隨HBcAb反應(yīng)性 S/Co 值升高而升高，與本研究結(jié)果相似。有研究[13]顯示，隱匿性 HBV 的出現(xiàn)，一個(gè)重要的原因可能是存在基因的突變，而HBsAb（+）HBeAg（+）HBcAb（+）模式的最高陽(yáng)性率也表明，HBeAg（+）按照常規(guī)應(yīng)該是有 HBsAg，但這種模式中 HBsAg 卻為（-），說(shuō)明其不存在或者水平極低，這也表明隱匿性 HBV 患者可能存在基因的突變，與李韋杰等[14-15]的研究結(jié)果相似。對(duì)復(fù)篩中 ELISA、CIA 檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析顯示，與 ELISA 比較，CIA 檢測(cè)靈敏度、特異度明顯提升，說(shuō)明 CIA 檢測(cè)可以提升對(duì)隱匿性 HBV 感染的診斷價(jià)值。

綜上所述，CIA 對(duì) HBV 感染的檢測(cè)靈敏度較高，但還是存在隱匿性 HBV 的可能性，對(duì)于檢測(cè)中 HBsAg（-）、HBcAb（+）的患者需做進(jìn)一步的核酸檢測(cè)，以降低漏診情況的發(fā)生。本研究選取病例數(shù)較少，可能會(huì)對(duì)結(jié)果造成一定的影響，在后續(xù)研究中，需擴(kuò)大病例數(shù)進(jìn)行更加具有代表性的研究;同時(shí)，雖然進(jìn)行了初篩和復(fù)篩，但仍然存在漏診的病例，在后續(xù)研究中，需進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)方法的研究或者尋找新的生物標(biāo)志物來(lái)進(jìn)一步提高隱匿性 HBV 感染檢測(cè)診斷率。

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（收稿日期：2021-07-23）